国际科技合作与交流专项项目(2010DFA32450)
- 作品数：6 被引量：23H指数：2
- 相关作者：杨自权梁大川白洁玉王震康宁更多>>
- 相关机构：山西医科大学第二医院更多>>
- 发文基金：国际科技合作与交流专项项目国家自然科学基金山西省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 前交叉韧带重建术后康复期应用透明质酸钠凝胶的疗效分析被引量：10
- 2016年
- 目的 ：分析在关节镜下前交叉韧带重建术术后康复期第2阶段应用透明质酸钠凝胶的疗效。方法：回顾分析2013年1月至2014年1月行关节镜下单侧腘绳肌前交叉韧带重建术治疗前交叉韧带损伤的患者126例,分为两组：医用透明质酸凝胶注射72例：男39例,女33例,年龄18-43岁,平均（28.27±12.30）岁,病程1-40 d,平均25 d,于前交叉韧带重建术后1个月行透明质酸钠凝胶注射的患者,每周注射1次,连续注射3次;透明质酸钠凝胶未注射54例：男21例,女33例,年龄16-45岁,平均（29.14±10.23）岁,病程1-36 d,平均26 d,前交叉韧带重建术1个月后未行透明质酸钠凝胶注射的患者。对两组患者术后6个月之内的临床资料进行比较。采用轴移试验和Lachman试验检查患者的膝关节稳定性,在对术后4、6、8、12、24周时患者在该段康复期的Lysholm评分、关节活动度、股四头肌肌围的关节功能进行比较。结果：重复测量分析结果显示：两组的Lysholm评分、大腿周径在各时间点和组间交互差异无统计学意义（P〉0.001）,两组关节活动度各时间点与组间交互比较差异有统计学意义（F=197.354,P〈0.001）。Lysholm评分及大腿周径在注射后6、8、12、24周注射组均优于未注射组,统计结果有统计学意义（P〈0.001）;在术后6周与8周关节活动度组间比较差异有统计学意义（P〈0.001）,注射组优于未注射组。结论：关节镜下前交叉韧带重建术后康复期第2阶段应用透明质酸钠凝胶可以在术后康复期较好的提高患者的各项膝关节功能,在膝关节活动度的恢复中有确切疗效,远期疗效还需进一步观察研究。
- 杨自权冯军宇张晨赵永亮姬健钧谭利
- 关键词：康复透明质酸钠凝胶前交叉韧带修复外科手术
- 慢病毒介导SOX9基因转染骨髓间充质细胞中的基因表达被引量：2
- 2013年
- 目的:构建携带小鼠SOX9基因的慢病毒载体,体外转染小鼠骨髓间充质细胞,观察小鼠SOX9基因在小鼠间充质细胞中的表达。方法:从含有小鼠SOX9基因的质粒提取总RNA,利用RT-PCR方法扩增目的基因。连接目的基因与经Age-Ⅰ酶切线性化的慢病毒载体,转化感受态的大肠杆菌对质粒进行扩增,筛出阳性转化子,经293T细胞包装,收集病毒后,通过基因测序和限制性核酸内切酶酶切的方法对质粒进行鉴定。Lenti-SOX9-EGFP体外转染小鼠骨髓间充质细胞,利用倒置荧光显微镜观察转染是否成功,并通过流式细胞仪测定转染效率。同时利用RT-PCR和Western Blot检测小鼠SOX9基因的表达。结果:成功构建了携带SOX9基因慢病毒载体,Lenti-SOX9-EGFP能高效转染小鼠骨髓间充质细胞。RT-PCR和Western Blot检测显示经SOX9基因转染的小鼠骨髓间充质细胞表达目的基因产物。结论:利用慢病毒介导SOX9基因成功地转染小鼠骨髓间充质细胞,而且SOX9基因在小鼠骨髓间充质细胞中得到表达,这为SOX9修复软骨损伤的进一步研究奠定了基础。
- 白洁玉梁大川程鹏杨自权卫小春
- 关键词：骨关节炎细胞介导免疫慢病毒属SOX9基因骨髓间充质细胞
- 敲减SOX9基因对骨髓间充质干细胞表达的影响被引量：1
- 2013年
- 目的:构建小鼠S0X9基因干扰的慢病毒载体,体外转染小鼠骨髓间充质干细胞,观察小鼠SOX9基因在小鼠间充质干细胞中的表达影响。方法:针对小鼠SOX9基因序列,设计RNA干扰靶点序列,合成含干扰序列的双链DNAoligo连入酶切后的RNA干扰载体上,构建Lenti-SOX9-siRNA-EGFP载体,鉴定扩增。利用SOX9基因沉默载体体外转染小鼠骨髓间充质细胞,利用倒置荧光显微镜观察转染是否成功,并通过流式细胞仪测定转染效率。同时利用RT-PCR和Western Blot检测小鼠SOX9基因的表达。结果:成功构建了Lenti-SOX9-siRNA-EGFP,SOX9基因沉默慢病毒载体,能高效转染小鼠骨髓间充质细胞。RT-PCR和Western Blot检测显示经SOX9基因转染的小鼠骨髓间充质细胞基因表达沉默。结论:利用慢病毒结合RNA干扰技术敲减小鼠SOX9基因成功地转染小鼠骨髓间充质干细胞,且SOX9基因在小鼠骨髓间充质干细胞中发生了沉默,这为SOX9修复软骨损伤的进一步研究奠定了基础。
- 梁大川白洁玉杜少华程鹏王震康宁杨自权
- 关键词：SOX9慢病毒属转染
- 小鼠间充质干细胞三系分化中SOX9与Ⅱ型胶原mRNA的定量
- 2013年
- 背景:研究表明,软骨中的主要成分Ⅱ型胶原的基因-Col2a1在软骨细胞中的表达与SOX9的浓度呈剂量依赖正相关关系。目的:通过成骨、成软骨、成脂肪诱导干细胞分化,分析3种分化过程及不同时期的SOX9与Ⅱ型胶原mRNA含量的变化,探讨SOX9在不同时空分布的表达规律及与Ⅱ型胶原的相关关系。方法:取4周龄昆明小鼠骨髓间充质细胞,体外培养得到间充质干细胞并传达至第3代,对间充质干细胞进行流式细胞仪鉴定细胞表型,共分3组每组设3个时间段,通过成骨、成软骨、成脂肪3种诱导培养液对3组细胞进行诱导,另设不进行诱导的细胞作为对照组。分别在诱导3,7,14 d后收集提取细胞的总RNA,通过RT-PCR进行SOX9与Ⅱ型胶原的mRNA定量检测,同时对诱导后的细胞进行染色、免疫荧光染色,观察其分化状态及相关统计分析。结果与结论:第3代骨髓间充质干细胞生长良好,流式细胞仪鉴定细胞表型证实为干细胞,对诱导后细胞进行染色、免疫荧光染色结果证实细胞分化为骨、软骨、脂肪细胞。经RT-PCR检测,在3组诱导分化细胞中SOX9 mRNA含量由高到低分别是成软骨、成骨、成脂肪,Ⅱ型胶原mRNA含量由高到低分别是成软骨、成脂肪、成骨。在成软骨分化中SOX9在3,7 d表达不断升高,14 d呈下降趋势。Ⅱ型胶原在3,7,14 d均逐渐升高。在成骨分化中SOX9 mRNA含量随着时间推移而增加,而Ⅱ型胶原则随着时间推移而不断降低。在成脂肪分化中SOX9 mRNA表达与对照组比较差异无显著性意义(P>0.05);而Ⅱ型胶原的表达没有规律可循,时间点的延伸及检测未观察到。结果提示,SOX9在软骨分化中作用优于成骨、成脂肪组,且软骨分化中SOX9与Ⅱ型胶原存在相关性,可能在软骨分化的早期Ⅱ型胶原随着SOX9的变化而变化;且软骨分化和成骨分化过程中SOX9可能起到了一个互相协调促进平衡的关键作用。
- 梁大川白洁玉杜少华程鹏康宁王震黄强开杨自权
- 关键词：干细胞间质干细胞
- 慢病毒介导的Sox9基因在兔骨髓间充质干细胞的过表达促进软骨损伤修复被引量：11
- 2015年
- 目的 :明确在体内Sox9基因过表达的兔骨髓间充质干细胞对于关节软骨损伤修复的作用。方法:以慢病毒介导的Sox9基因转染兔骨髓间充质干细胞(BMSCs),体外检测软骨特异性分子,将新西兰大白兔24只48个膝关节随机分为3组,动物麻醉后,双侧股骨滑车处的关节面上用直径4 mm的钻头钻孔,深度3 mm,穿透软骨下骨,造成全层关节软骨损伤,将转染后的细胞植入体内用以修复全层关节软骨损伤,实验组植入BMSCs-(Lenti-Sox9-EGFP)-藻酸钙复合物,实验对照组植入BMSCs-藻酸钙复合物,空白对照组只钻孔。术后6、12周分别进行光镜、电镜观察,以及HE、免疫组织化学染色检测软骨的修复程度。结果:经Sox9基因转染后的细胞在3 d时,Sox9基因表达最高,随后下降。转染后3 d,Ⅱ型胶原开始表达,到14 d时达到最高。表明Sox9过表达启动了兔骨髓间充质干细胞的软骨分化。组织学观察显示,实验组术后6周缺损处有透明软骨样组织填充,术后12周缺损处软骨和软骨下骨修复良好。两对照组,缺损处由纤维组织填充。免疫组织化学显示,修复组织内Ⅱ型胶原,免疫组化染色结果阳性强于两对照组。组织学评分结果显示实验组软骨损伤修复各时间点效果明显优于两对照组,差异有统计学意义。结论:Sox9基因过表达的兔骨髓间充质干细胞(BMSCs)促进软骨损伤的修复。
- 王震梁大川白洁玉康宁冯军宇杨自权
- 关键词：SOX9基因骨髓间充质干细胞软骨
- 慢病毒载体在基因治疗关节软骨损伤中的实验应用
- 2013年
- 基因治疗关节软骨损伤是传送目的基因至预定靶细胞,并且直接表达该基因的性质,达到修复治疗软骨损伤的目的。基因载体是传递目的基因进入靶细胞的介导工具。但大部分基因载体由于转染效率低、表达时间短、免疫反应大等诸多问题而运用新型的慢病毒载体使其介导目的基因获得持续表达,从而使关节软骨损伤修复顺利进行。慢病毒载体在多用性和安全性上展示了令人满意的特点,在基因工程中的运用更加安全,因此慢病毒载体成了最有潜力的基因工程工具。它不仅能应用于实验室操作,还能应用于疾病的诊断和治疗方面。本文按慢病毒载体的发展简介、慢病毒载体的生物安全性、在基因治疗软骨损伤中的应用以及展望四个方面对其予以综述。
- 杨自权梁大川
- 关键词：基因工程关节软骨慢病毒载体
