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酵母双杂交系统筛选和验证与RARα-V相互作用的蛋白被引量：4: 2008年; 目的利用酵母双杂交技术筛选与RARα-V相互作用的蛋白，研究RARα-V的作用靶点及其生物学功能。方法构建诱饵质粒pGBKT7-RARα-V，利用酵母双杂交技术从K562细胞cDNA文库中筛选与RARα-V相互作用蛋白的基因序列，并通过酵母回转试验与GST pull-down技术进行验证。结果成功构建诱饵质粒，且没有毒性、渗漏和自激活现象；利用酵母双杂交技术筛选到16个能与RARα-V相互作用的蛋白质；经酵母回转试验得到8个阳性克隆；并经GST pull-down技术在体外验证了RARα-V与JTV-1蛋白的相互作用。结论在细胞内RARα-V与多种蛋白有相互作用，白血病的发病机制可能与这些蛋白相互作用所致的生物学功能改变有关。; 王东生王翀刘北忠夏乾峰郝坡刘畅金丹婷钟梁; 关键词：白血病

标本处理方法对荧光定量PCR检测HBV DNA的影响被引量：5: 2008年; 目的为提高标本检出率,比较煮沸法、Chelex100树脂法和核酸纯化法等3种不同标本处理方法对荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)技术检测乙型肝炎(简称乙肝)病毒(HBV)DNA的影响。方法收集36例乙肝确诊患者和14例非乙肝患者的血标本,分别经煮沸法、Chelex100树脂法和核酸纯化法平行处理后,采用FQ-PCR进行检测。结果经3种方法处理的标本HBV DNA的检出率分别为52.78%、55.56%和100.00%。核酸纯化法的检出率明显高于其他2种方法(P<0.01)。结论标本处理质量对进行HBV DNA FQ-PCR检测十分重要,煮沸法和Chelex100树脂法不适用于临床标本检测,用核酸纯化法处理标本可保证FQ-PCR检测结果的准确性。; 秦进钟梁刘北忠; 关键词：聚合酶链反应标本制备

带核定位信号的RARα与JTV1蛋白相互作用的验证实验被引量：5: 2009年; 目的通过实验验证带有核定位信号的维甲酸受体α(NLS-RARα)与JTV1蛋白之间的相互作用。方法将表达NLS-RARα诱饵蛋白和JTV1靶蛋白的两种重组表达质粒共转化AH109酵母菌,通过一对一的酵母双杂交技术验证两者在活细胞内的相互作用;构建NLS-RARα及JTV1蛋白标签融合表达载体并共转染人胚肾293细胞,利用免疫共沉淀技术在体外验证二者之间的相互作用。结果NLS-RARα诱饵蛋白和JTV1靶蛋白质粒共转化AH109酵母菌后,可见蓝色阳性克隆;NLS-RARα及JTV1蛋白标签融合表达载体构建成功,共转染293细胞,抗HA多克隆抗体沉淀HA-NLS-RARα相互作用蛋白复合物后,用抗Myc单克隆抗体进行免疫印迹检测,可以检测到Myc-JTV1蛋白。结论利用酵母双杂交和免疫共沉淀技术验证了NLS-RARα与JTV1间存在相互作用。; 王翀王东生刘北忠郝坡刘畅金丹婷钟梁王春光; 关键词：酵母双杂交免疫共沉淀蛋白质相互作用

维甲酸受体变异蛋白酵母双杂交诱饵载体构建: 2008年; 目的构建维甲酸受体变异蛋白(RARα-V)的诱饵表达载体,为应用酵母双杂交系统筛选与RARα-V相互作用的蛋白建立实验基础。方法PCR扩增RARα-V,克隆入诱饵载体pGBKT7中,将构建好的诱饵载体pG-BKT7-RARα-V转化到酵母细胞AH109中,并利用蛋白印迹法(Western Blotting)分析诱饵蛋白的表达情况。同时检测诱饵蛋白有无毒性、渗漏和自激活作用。结果成功扩增了RARα-V基因片断,并克隆入pGBKT7中,测序结果正确。诱饵载体成功转化到酵母细胞AH109中,诱饵蛋白无毒性,无自激活和渗漏,Western Blotting分析证实酵母细胞表达诱饵蛋白。结论成功构建了RARα-V结合域的酵母诱饵表达载体,为进一步筛选与之相互作用的蛋白提供基础依据。; 王东生王翀刘北忠郝坡刘畅金丹婷钟梁; 关键词：白血病质粒构建诱饵蛋白

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国家中医药管理局课题(02-03ZP52)