国家自然科学基金(81100405)
- 作品数：3 被引量：5H指数：2
- 相关作者：史颖莉陈捷顾林袁春桃李瑛更多>>
- 相关机构：南京医科大学江苏省计划生育科学技术研究所南京医科大学附属南京妇幼保健院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金南京市医学科技发展项目江苏省南京市医学科技发展基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- TCAB1基因RNAi慢病毒载体的构建及在人子宫内膜间质细胞中沉默TCAB1基因的效应被引量：3
- 2012年
- 目的构建TCAB1基因RNAi慢病毒载体,为子宫内膜异位症(EMs)的基因靶向治疗提供理论依据。方法化学合成3条靶向TCAB1基因的siRNA,转染HEK-293T细胞,24h后采用荧光素酶报告系统筛选有效siRNA,其对TCAB1mRNA有明显抑制作用。针对已经筛选确定的TCAB1基因RNAi有效靶序列,合成靶序列的Oligo DNA,退火形成双链DNA,与经XhoI和HpaI酶切后的LV1载体[含U6启动子和绿色荧光蛋白(GFP)]连接产生LV1-shRNA慢病毒载体,PCR筛选阳性克隆,测序鉴定。用LV1-shRNA、pRev、pVsvg、pcgv四质粒共转染包装细胞HEK-293T细胞,包装产生慢病毒,分别于转染后48h、72h收取病毒上清,感染人子宫内膜间质细胞(ESC),进行RT-qPCR检测TCAB1基因相对表达量,检测LV1-shRNA干扰效率。结果 PCR和测序证实,成功构建TCAB1 shRNA的慢病毒载体LV1-shRNA。结论成功构建TCAB1基因的RNAi慢病毒载体,其转染ESC细胞后显著抑制了TCAB1的表达,为子宫内膜异位症的基因靶向治疗提供了实验基础。
- 陈捷顾林史颖莉袁春桃倪婕
- 关键词：SHRNA慢病毒载体
- TCAB1在子宫内膜异位症在位内膜中的表达及其作用
- 2014年
- 目的:探讨TCAB1在内异症(EMs)患者中的表达及其可能的致病机制。方法:选取EMs患者在位内膜和正常妇女子宫内膜。Western blot法检测TCAB1蛋白表达。原代培养EMs患者在位内膜间质细胞(ESC)和正常内膜ESC,实时定量PCR检测TCAB1mRNA表达。构建TCAB1慢病毒沉默表达载体,感染ESC株THESCs,G418筛选稳定沉默表达TCAB1的细胞株后,分别采用MTT、流式细胞术观察细胞增殖和凋亡的变化。结果:与正常患者比较,EMs在位内膜中TCAB1呈异常高表达(P=0.006);在位内膜ESC中也呈高表达趋势(P=0.0014)。TCAB1基因在ESC中沉默表达能抑制细胞的增殖(P<0.05)、促进其凋亡(P<0.001)。结论:TCAB1在EMs患者呈异常高表达,可能通过提高逆流子宫内膜抗凋亡能力使之更易于在盆腹腔内生长,这有望为内异症临床治疗提供新的研究方向。
- 史颖莉陈捷钱宁倪婕鲍爱梅袁春桃顾林
- 关键词：子宫内膜异位症发病机制
- TCAB1慢病毒表达载体的构建及其在人子宫内膜间质细胞中的表达被引量：2
- 2012年
- 目的构建TCAB1基因的慢病毒过表达载体并验证在人子宫内膜间质细胞株(St-T1b)过表达效果。方法通过PCR获取TCAB1全长基因,进行TA克隆,进一步亚克隆构建TCAB1慢病毒表达载体,包被慢病毒后感染St-T1b细胞,通过观察荧光表达和实时定量PCR验证其表达。结果成功构建PLVX-TCAB1-IRES-ZsGreen1慢病毒表达载体并获得相应的慢病毒。荧光显微镜、实时定量PCR结果表明,TCAB1基因可在St-T1b细胞中实现过表达效果。结论成功构建人TCAB1基因特异性的重组慢病毒过表达载体,且证实包被的慢病毒可实现TCAB1基因在St-T1b细胞中的过表达,为后续人TCAB1在人子宫内膜间质细胞的功能研究奠定了基础。
- 顾林史颖莉倪婕陈捷李瑛
- 关键词：过表达慢病毒
