上海市自然科学基金(024119011)
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- 信号肽序列修饰的单纯疱疹病毒-2多表位复合DNA疫苗构建
- 2007年
- 目的:构建经糖蛋白gD信号肽修饰的单纯疱疹病毒2型(HSV-2)糖蛋白gD、gB、gC和早期表达蛋白ICP27的多表位复合DNA疫苗。方法:国内HSV-2野生株经测序与PCR鉴定后利用PCR技术从其基因组中扩增出HSV-2 ICP27 377-459、gD146-179、gD223-306、gB529-606、gC247-282、gD1-776个基因片段,PCR鉴定后按先后顺序,采用多基因片段一步酶切连接法获得HV融合基因片段,经pGEMT载体克隆后定向插入真核表达质粒pcDNA3.1载体中,构建出重组真核表达质粒HV-pcDNA3.1,并对其进行酶切分析及测序鉴定。PCR扩增gD146-179信号肽片段,进一步酶切连接构建重组质粒gDs-HV-his-pcDNA3.1,并对其进行测序鉴定。结果:酶切重组质粒HV-pcDNA3.1,电泳可见两条带,分别为融合基因HV(1.3kb)和线性质粒pcDNA3.1(5.4kb)。测序结果表明,克隆基因插入方向正确,重组质粒gDs-HV-his-pcDNA3.1与GenBank HSV-2中相关序列同源性达99.9%。结论:成功构建了经糖蛋白gD信号肽修饰的HSV-2多表位复合DNA疫苗。
- 徐金华许炎郑志忠夏天王健梁俊张臻朱小华朱乃硕
- 关键词：DNA疫苗
