国家科技攻关计划(2004BA757C)
- 作品数：2 被引量：6H指数：1
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- 传染性法氏囊病毒HZ2株VP5基因缺失株的构建被引量：1
- 2006年
- 通过PCR方法，删除传染性法氏囊病毒HZ2株ORF A1和ORF A2非重叠区的33bp（96—129bp）的同时，引入Nhe Ⅰ酶切位点（GcTaGc）作为分子标记，构建含有A节段突变体的真核表达载体pCI-Nhe3，与HZ2株B节段真核表达载体pCI—mB在脂质体介导下共转染鸡胚成纤维（CEF）细胞．用转染细胞的培养液上清不断地接种新鲜细胞，模拟病毒“传代”．结果表明，细胞的形态学特征发生变化，产生了类似野生IBDV感染细胞时出现的细胞病变效应（CPE）．电子显微镜观察显示，在细胞超薄切片中有IBDV病毒粒子．间接免疫荧光分析结果表明，拯救的ANhe3株病毒的结构蛋白在CEF细胞得到了表达，而非结构蛋白（VP5）则不能表达．针对A节段的RT—PCR，酶切鉴定及进一步的序列测定结果验证了相应核苷酸片段的缺失和分子标记的引入．ANhe3株病毒接种不能导致11日龄SPF鸡胚的死亡，相对HZ2株致死率（20％）明显下降．本研究利用基于cDNA转染和RNA聚合酶Ⅱ系统的IBDV反向遗传系统，构建了IBDV VP5基因大片段缺失的毒株ANhe3株，为IBDV基因组学的研究提供了新方向，为进一步探索病毒复制和致病机制以及开发基因缺失疫苗奠定基础．
- 李龙魏永伟黄耀伟于涟
- 关键词：传染性法氏囊病毒基因缺失
- 鸡传染性法氏囊病病毒非结构蛋白基因的克隆、表达及多克隆抗体制备被引量：5
- 2005年
- 利用RT-PCR技术从传染性法氏囊病病毒(IBDV)TL2004株感染鸡胚尿囊液中扩增到VP5基因,进而构建了T7启动子控制下的N端GST-Tag融合表达质粒pGEX-VP5。序列测定表明VP5基因全长438bp,编码一个由145个氨基酸组成的VP5蛋白。将pGEX-VP5转化大肠杆菌BL21,在IPTG的诱导下高效表达了GST-VP5融合蛋白(44kD)。通过包涵体纯化的方法,获得的较高纯度的融合蛋白,免疫新西兰兔,Western blot和ELISA分析表明,制备的融合蛋白抗血清效价在1∶12800以上,并具有良好的免疫反应特异性,为进一步研究VP5在IBDV复制与致病中的作用,以及研制IBDVVP5基因缺失疫苗打下了良好的基础。
- 于涟李龙刘岩郑江涛魏永伟
- 关键词：VP5基因多克隆抗体
