北京市属高等学校人才强教计划资助项目(PHR200906116)
- 作品数：6 被引量：23H指数：3
- 相关作者：李俊发刘旭卜祥宁张楠韩松更多>>
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- 发文基金：国家自然科学基金北京市属高等学校人才强教计划资助项目国家重点基础研究发展计划更多>>
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- 低氧预适应对小鼠缺血脑的保护及其p38 MAPK机制的实验研究被引量：8
- 2009年
- 目的观察低氧预适应(hypoxic preconditioning,HPC)降低脑中动脉阻塞(middle cerebral artery occlusion,MCAO)所致小鼠缺血性脑损伤的作用,探讨在HPC脑保护作用中p38丝裂原激活蛋白激酶(p38MAPK)的变化。方法60只健康雄性BALB/c小鼠(18g～22g,8周～10周)分为:常氧假手术组(H0sham),常氧缺血组(H0),HPC假手术组(H4sham)和HPC缺血组(H4),每组15只。运用整体低氧预适应模型和脑中动脉梗死缺血模型,结合神经行为学评价、氯化三苯基四氮唑(TTC)染色、免疫组织化学和蛋白印迹(Westernblotting)技术,观察HPC对小鼠脑缺血损伤的影响以及皮质组织内p38MAPK磷酸化水平和蛋白表达量的变化。结果研究发现,HPC可明显改善小鼠缺血后神经行为学表现,减小MCAO导致的鼠脑梗死面积,减轻半影区神经元的丢失,降低缺血区水肿率和密度值;与H0假手术组相比,缺血组小鼠皮质半影区p38MAPK磷酸化水平显著增高;与常氧缺血组小鼠皮质半影区相比,HPC缺血组小鼠皮质半影区内p38MAPK磷酸化水平增高更加明显。结论p38MAPK信号转导通路可能参与了HPC对小鼠局灶性缺血脑的保护作用。
- 刘旭封素娟张彩艳卜祥宁张楠闫睿王芊芸李俊发
- 关键词：低氧预适应P38丝裂原激活蛋白激酶磷酸化水平
- 脑衰蛋白反应调节蛋白-2参与低氧预适应减轻小鼠脑缺血损伤被引量：4
- 2009年
- 目的研究参与低氧预适应(HPC)的经典型蛋白激酶CβⅡ(cPKCβⅡ)相互作用的脑衰蛋白反应调节蛋白-2(CRMP-2)对缺血脑是否有保护作用。方法成年雄性BALB/c小鼠随机分为常氧(Nor)、HPC、常氧假手术(Nor+sham)、HPC假手术(HPC+sham)、常氧缺血(Nor+I)和HPC缺血(HPC+I)等6组(每组n=6)。应用小鼠整体HPC和脑中动脉梗死(MCAO)致脑局部缺血模型,结合免疫沉淀、双向凝胶电泳和质谱等技术,分离和鉴定与cPKCβⅡ相互作用蛋白;利用聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和蛋白印迹(Western blot)技术,分析CRMP-2磷酸化和蛋白降解水平在脑HPC和缺血中的变化。结果与Nor组比,HPC鼠脑皮层组织内有10种与cPKCβⅡ相互作用蛋白的表达发生了明显变化,其中CRMP-2在膜相关蛋白组分中的表达量升高,而在胞质蛋白组分中的表达量降低。在脑缺血模型中,与Nor+Sham组相比,Nor+I组小鼠脑皮层缺血核心区(Ic)CRMP-2磷酸化水平明显降低(P<0.05,n=6);与Nor+I组相比,HPC+I组小鼠脑皮层Ic区内CRMP-2磷酸化水平明显增高(P<0.05,n=6)。脑缺血可导致CRMP-2发生水解并伴随着大量55ku水解片段(BDP)的出现,但与Nor+I组相比,HPC+I组小鼠脑皮层缺血半影区(P)内CRMP-2水解片段减少,水解率明显降低(P<0.05,n=6)。结论CRMP-2参与了HPC缓解小鼠脑缺血Ic区内CRMP-2磷酸化水平的降低和减少P区内CRMP-2水解片段从而减轻缺血脑组织的损伤。
- 张彩艳封素娟刘旭卜祥宁张楠郑雅欣袁晓文李晓光李俊发
- 关键词：低氧预适应大脑中动脉阻塞
- cPKCγ参与低氧预适应对小鼠脑缺血皮质内CRMP2水解和磷酸化的调节被引量：3
- 2012年
- 目的探讨经典型蛋白激酶Cγ(cPKCγ)在低氧预适应(HPC)调节小鼠脑缺血皮质内脑衰反应蛋白-2(CRMP2)水解和磷酸化中作用。方法利用雄性BALB/c小鼠(18～22 g)HPC和大脑中动脉阻塞(MCAO)模型,借助蛋白印迹、免疫共沉淀和免疫组化等生物化学技术,观察cPKCγ激活对小鼠缺血脑皮质内CRMP2蛋白水解程度(BDP)和磷酸化水平(p-CRMP2)、cPKCγ-CRMP2相互作用和皮质缺血半影区内p-CRMP2阳性细胞数的影响。结果 HPC显著提高缺血脑皮质半影区内p-CRMP2水平,降低BDP产物形成(P<0.05),而侧脑室注射cPKCγ抑制剂Go6983(6nmol/L)可明显解除HPC对半影区内CRMP2蛋白水解和磷酸化的调节作用(P<0.05);免疫共沉淀结果提示,cPKCγ激活程度参与HPC对缺血脑皮质半影区内cPKCγ-CRMP2相互作用的调节;同时,cPKCγ激活与HPC提高脑缺血半影区内p-CRMP2阳性细胞数有关(P<0.05)。结论 cPKCγ参与HPC对小鼠缺血脑皮质内CRMP2水解与磷酸化的调节。
- 刘燕燕杨璇韩松苏吉儿罗宏李俊发
- 关键词：大脑中动脉阻塞
- Müller细胞反应性胶质化在急性高眼压致大鼠视网膜损伤中作用被引量：1
- 2013年
- 目的观察Müller细胞反应性胶质化在急性高眼压(AOH)大鼠视网膜中变化及其抑制对视网膜损伤的影响。方法建立大鼠AOH青光眼模型,分为正常对照(Ctrl)、AOH和AOH+玻璃体内注射胶质毒素α-氨基己二酸(AAA)后再灌注1、3和5d组,以及单纯AAA和AOH+PBS对照组。TUNEL染色检测细胞凋亡,GFAP免疫荧光染色反应Müller细胞反应性胶质化程度,Thy-1染色标记视网膜神经节细胞(RGCs)。结果 AOH可致大鼠视网膜内丛状层和内核层明显变薄、神经节细胞层内细胞排列紊乱和数量减少,并诱发Müller细胞反应性胶质化(GFAP表达增加)。同时,AAA抑制Müller细胞反应性胶质化可明显缓解AOH所致RGCs丢失和凋亡发生。结论 Müller细胞反应性胶质化参与AOH所致视网膜损伤,抑制其反应性胶质化可能是改善高眼压性青光眼视网膜病变的一种有效治疗方法。
- 苏吉儿丁静文韩松罗宏李俊发
- 关键词：急性高眼压视网膜MÜLLER细胞视网膜神经节细胞
- 蛋白激酶Cgamma参与低氧预适应减轻脑中动脉阻塞所致小鼠缺血性脑损伤
- 目的探讨低氧预适应（HPC）对脑中动脉阻塞（MCAO）所致脑缺血性损伤的影响及其可能的机制。方法借助已建小鼠整体HPC和脑MCAO模型,应用2,3,5-氯化三苯基四氮唑（TTC）染色、Nissl染色、SDS-PAGE和W...
- 梁婧杜建丽封素娟刘旭张彩艳张楠卜祥宁李俊发
- 文献传递
- 低氧预适应小鼠脑皮层内与nPKC epsilon相互作用蛋白的鉴定
- 目的低氧预适应是一种机体内源性保护机制,指轻度的低氧刺激可诱使组织或细胞对随后发生的重度持续性缺血/低氧产生耐受能力。我们以往的研究表明,蛋白激酶C epsilon（nPKC epsilon）的膜转位激活可能参与了脑HP...
- 封素娟刘旭张彩艳卜祥宁张楠梁婧杜建丽李俊发
- 关键词：低氧预适应蛋白表达量
- 文献传递
- 低氧预适应对缺血脑组织的保护作用及其蛋白激酶C亚型特异性信号转导机制研究
- 目的:脑缺血/低氧预适应(I/HPC)内源性保护现象的发现,为临床缺血/低氧性脑疾病尤其是脑卒中的防治带来了新希望,即缺血/低氧预处理组织器官对继发严重缺血/低氧刺激产生耐受,但目前其发生发展机制尚不清楚。我们曾报道,经...
- 李俊发
- 关键词：蛋白激酶C蛋白质组学信号转导
- 文献传递
- 小鼠大脑中动脉栓塞脑局部缺血模型及其评价方法被引量：8
- 2010年
- 目的通过比较客观和可靠的神经行为学评分,以及脑梗死体积和水肿率的计算,评价小鼠大脑中动脉阻塞(middlecerebral artery occlusion,MCAO)局部缺血模型的成功率和可靠性。方法线栓法致小鼠MCAO制备大脑局部缺血模型,应用2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)染色和神经行为学评分等方法,计算脑梗死体积、水肿率并观察行为学指标。结果TTC染色证实,MCAO可诱发明显的小鼠脑局灶性缺血,手术成功率约为90.8%,其中以皮质缺血为主,少数为单纯海马和丘脑缺血;脑局部缺血损伤可引起小鼠神经行为学的显著改变,即总体神经行为学评分增加;同时,脑梗死体积约占全脑体积的35%,分析结果准确和稳定。结论本研究成功地建立了MCAO致小鼠脑局部缺血的模型,且有较高的成功率(90.8%);同时所用评价神经功能损伤和脑梗死体积方法具有较高的可靠性。
- 于培兰隋雷鸣韩松赵焕英江君李俊发
- 关键词：大脑中动脉阻塞梗死体积TTC染色
- 低氧预适应小鼠脑皮层内与nPKCε相互作用蛋白的鉴定
- 2010年
- 目的鉴定脑低氧预适(HPC)小鼠脑皮层组织内与新奇型蛋白激酶Cε(nPKCε)相互作用的蛋白。方法利用免疫沉淀(IP)和双向电泳(2-DE)技术分离小鼠脑皮层中与nPKCε相互作用的蛋白;以ImageMaster2D Platinum软件对双向电泳图谱进行差异表达分析;目标蛋白用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)及蛋白印迹(Western blot)进行鉴定分析。结果与对照组比较,HPC小鼠脑皮层内与nPKCε相互作用的胞质成分中有34个蛋白点上调,20个蛋白点下调,膜相关成分中有27个蛋白点上调,28个蛋白点下调;HPC后脑皮层胞质及膜相关成分中与nPKCε相互作用的热休克蛋白(HSP)70和14-3-3γ的蛋白表达量均升高,而HSP60仅在膜相关成分中升高(P<0.05,n=3)。结论nPKCε可能通过调节HSP60、HSP70和14-3-3γ等多种与其相互作用的蛋白参与脑HPC的形成。
- 封素娟刘旭张彩艳卜祥宁张楠孙媛郭菲李俊发
- 关键词：低氧预适应蛋白质组学蛋白表达量
