贵州省高层次人才科研条件特助经费项目(TZJF-01)
- 作品数：9 被引量：34H指数：4
- 相关作者：汤德元李春燕徐健曾智勇王凤更多>>
- 相关机构：贵州大学贵州省动物疫病预防控制中心云南省畜牧兽医科学研究所更多>>
- 发文基金：贵州省高层次人才科研条件特助经费项目博士科研启动基金贵州省农业攻关项目更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生生物学更多>>
- 乙型脑炎病毒贵州分离株E基因原核表达及其免疫原性的研究
- 本试验通过收集某猪场一例发病种公猪的睾丸病料,处理后采用细胞培养与乳鼠脑内接毒相结合的方法盲传并结合FRT-PCR方法分离鉴定JEV贵州分离株(GZ株),然后根据GenBank登录的日本乙型脑炎病毒SA14和SA14-1...
- 汤德元王凤马萍罗险峰李春燕曾智勇徐健刘建
- 关键词：乙型脑炎病毒贵州分离株E基因原核表达免疫原性
- 文献传递
- 日本乙型脑炎病毒的分离与鉴定被引量：10
- 2009年
- 收集一例疑为乙型脑炎病毒感染的种公猪肿大的睾丸病料,并将其处理制成匀浆过滤后,用乳鼠脑内接毒和细胞接毒相结合的方法盲传并分离病毒,然后设计一对PrM/E基因的特异性引物,采用RT-PCR方法对所分离的病毒进行鉴定,并将其PrM/E基因扩增产物测序,测序结果与乙型脑炎GenBank登陆的SA14-14-2株(AF315119)和SA14株(U14163)进行比较。结果表明,所分离病毒的PrM/E基因序列与JEV强毒株SA14和弱毒株SA14-14-2相应序列同源性分别为98.1%和97.1%,证实分离毒株为乙型脑炎病毒。
- 徐健汤德元黄涛王彬李春燕
- 关键词：日本乙型脑炎病毒
- 乙型脑炎病毒贵州分离株E基因原核表达及其免疫原性的研究被引量：8
- 2012年
- 收集某猪场1例发病种公猪的睾丸病料,处理后采用细胞培养与乳鼠脑内接毒相结合的方法盲传并结合RT-PCR方法分离鉴定,命名为乙型脑炎病毒(JEV)贵州分离株(GZ株),然后根据GenBank登录的日本乙型脑炎病毒SA14和SA14-14-2株全基因序列设计并合成1对扩增E基因的特异性引物,用RT-PCR方法扩增出JEV贵州分离株E基因,并将E基因克隆到pMD19-T载体上,构建重组质粒pMD19-T-E,经双酶切鉴定、测序及序列分析鉴定后,再将E基因亚克隆到pET-32a(+)原核表达载体上,成功构建乙脑病毒E基因原核表达质粒pET-32a-E,将构建好的原核表达质粒pET-32a-E转化至宿主菌BL21(DH3)中,诱导表达目的蛋白,表达产物经SDS-PAGE电泳和Western blot分析,得到了约59ku条带,与预期大小相符,进一步提取、纯化和浓缩目的蛋白,并将其加入弗氏佐剂后免疫小鼠,免疫后采血检测抗体。结果显示:乙型脑炎病毒贵州分离株E基因原核表达目的蛋白能诱导小鼠产生一定抗体水平,该研究为乙型脑炎亚单位疫苗的研究奠定了基础。
- 汤德元王凤马萍罗险峰李春燕曾智勇徐健刘建
- 关键词：乙型脑炎病毒贵州分离株E基因原核表达免疫原性
- 乙型脑炎的发病机理及毒力致病机理的研究进展被引量：7
- 2008年
- 主要介绍了乙型脑炎的病毒基因组成、发病机理和毒力致病机理的研究,从乙脑病毒的基因组结构及其所编码的蛋白质的功能上分析乙脑病毒的毒力致病机理与基因结构的关系及其研究进展,为进一步掌握乙脑病毒强弱毒株基因结构的差异及研究其基因工程疫苗提供了理论基础。
- 李春燕汤德元徐健刘玉攻黄涛
- 关键词：乙型脑炎发病机理
- 反向遗传操作技术在甲型流感病毒中的应用被引量：1
- 2008年
- 反向遗传操作技术是最近几年迅速兴起的一项分子生物学技术,它将解决对RNA病毒基因组难以操作的多年难题,并为负链RNA病毒的研究开创新的途径,使负链RNA病毒得以深入认识。目前,该技术已应用于多种负链RNA病毒的研究,特别在探寻甲型流感病毒基因组复制、转录和研发新型疫苗上发挥着重要作用,使甲型流感病毒研究工作取得了巨大进步,为大流感的再次流行及防控增添了新的研究方法和防控策略。文章就甲型流感病毒基因组特征、致病机理、新型疫苗及病毒载体的研究等最新进展进行了综述,重点介绍了反向遗传操作技术在甲型流感病毒中的应用。
- 袁东波汤德元汪忠荣刘霞
- 关键词：甲型流感病毒基因操作技术
- 长白猪IL-2基因克隆及真核表达载体的构建被引量：2
- 2010年
- 为了对长白猪白细胞介素-2(IL-2)基因的生物学作用进行研究,试验将长白猪外周血淋巴细胞在刀豆素A(ConA)的刺激下培养24 h后,提取总RNA,应用RT-PCR技术扩增IL-2 cD-NA,克隆到pMD19-T载体并测序。对构建好的T载体双酶切并回收目的片段,将回收片段与pcD-NA3.1(+)载体连接并转化到Top 10中构建真核表达载体。结果表明:克隆的IL-2 cDNA全长为526 bp,ORF全长为465 bp,编码154个氨基酸,与GenBank公布的猪IL-2比对同源性为100%,进而证明成功地克隆了长白猪IL-2 cDNA;并且真核表达载体双酶切及测序表明成功构建了长白猪IL-2真核表达载体。
- 王彬汤德元李春燕曾志勇黄涛徐健
- 关键词：长白猪IL-2基因真核表达载体
- 日本脑炎基因工程疫苗的研究进展被引量：3
- 2008年
- 日本脑炎是严重威胁人畜健康的一种中枢神经系统的急性传染病,是重要的人兽共患病,世界卫生组织把日本脑炎疫苗确定为优先研究和开发的项目之一。日本脑炎的防治主要是接种灭活苗和弱毒苗,由于灭活苗免疫原性较差、注射量大,且需重复注射;而我国利用SA14-14-2弱毒株研制的弱毒苗在世界上居于领先水平,具有接种针次少、副反应小、免疫原性强等优点,已在国内得到广泛应用。但弱毒苗易受母源抗体的影响,有毒力回复突变的可能性,且存在胎内感染的潜在隐患,加之SA14-14-2株病毒通过蚊虫繁殖后,其弱毒特性和基因型特征能否发生回复突变,致使毒力增强,引起健康人的感染和传播,是人们最担心的问题。如何选择合适的日本脑炎疫苗防治该病是当今人们在该领域研究的热点问题,随着日本脑炎病毒分子生物研究的深入,基因工程疫苗是日本脑炎疫苗的新的发展方向,现在很多学者正在设法利用生物技术手段研究开发基因工程疫苗,以克服现有疫苗的缺点,此项研究的成功将填补国内空白。本文综述了日本脑炎基因工程亚单位疫苗、合成肽疫苗、重组活疫苗和核酸疫苗等的研究新进展,为日本脑炎基因工程疫苗的深入研究提供参考。
- 常志顺徐健汤德元李春燕
- 关键词：日本脑炎基因工程疫苗
- 长白猪IL-2基因克隆及真核表达载体的构建
- 将长白猪外周血淋巴细胞在刀豆素A（ConA）的刺激下培养24h后,提取总RNA,应用RT-PCR技术扩增白细胞介素-2（IL-2）cDNA,克隆到pMD19-T载体并测序。将构建好的T载体双酶切并回收目的片段,将回收片段...
- 王彬汤德元李春燕曾志勇黄涛徐健张晓杰王凤
- 关键词：长白猪IL-2基因真核表达载体
- 文献传递
- 长白猪IL-2基因克隆及真核表达载体的构建
- 将长白猪外周血淋巴细胞在刀豆素A(ConA)的刺激下培养24h后,提取总RNA,应用RT-PCR技术扩增白细胞介素-2(IL-2)cDNA,克隆到pMD19-T载体并测序。将构建好的T载体双酶切并回收目的片段,将回收片段...
- 王彬汤德元李春燕曾志勇黄涛徐健张晓杰王凤
- 关键词：长白猪IL-2基因真核表达载体
- 日本乙型脑炎病毒贵州分离株NS1基因克隆及表达载体的构建被引量：3
- 2013年
- 为了研究日本乙型脑炎病毒(JEV)NS1基因工程疫苗、生物免疫活性及细胞因子IL-2对真核表达的影响,试验采用RT-PCR方法扩增出JEV贵州分离株(GZ株)NS1 cDNA,克隆到pMD19-T载体上,再进行双酶切并回收目的片段,分别与pET32a(+)和pcDNA3.1(+)载体连接并转化入感受态细胞Top10中,构建原核表达载体pET32a(+)-NS1和真核表达载体pcDNA3.1(+)-NS1,并将NS1基因插入已经构建好的重组质粒pcDNA3.1(+)-IL-2上,构建以IL-2融合表达的真核载体pcDNA3.1(+)-IL-2-NS1,分别通过抽提阳性质粒酶切鉴定和测序后,应用DNAStar等生物软件进行序列分析,最后进行原核表达载体和真核表达载体双酶切及测序。结果表明:JEV GZ株NS1 cDNA全长为1 245 bp,可编码415个氨基酸。说明JEV GZ株NS1 cDNA克隆成功,JEV GZ株NS1基因的原核表达载体、真核表达载体以及IL-2融合表达的真核载体构建成功。
- 王凤汤德元罗险峰曾智勇马萍李春燕
- 关键词：日本乙型脑炎病毒贵州分离株NS1基因
