全球变化研究国家重大科学研究计划(2007CB914100)
- 作品数：10 被引量：53H指数：4
- 相关作者：张丽华张玉奎梁振刘晋湘陶定银更多>>
- 相关机构：中国科学院中国科学院研究生院国家色谱研究分析中心更多>>
- 发文基金：全球变化研究国家重大科学研究计划国家自然科学基金中国科学院知识创新工程重要方向项目更多>>
- 相关领域：理学生物学医药卫生更多>>
- 多维液相色谱分离技术及其在蛋白质组研究中的应用被引量：9
- 2009年
- 对近年来多维液相色谱技术及其在蛋白质组学研究中的应用进行了系统综述。详细描述了由不同液相色谱模式构建的多维液相色谱系统,并介绍了其在蛋白质组表达谱、翻译后修饰、定量等方面的应用。此外,还对多维液相色谱的发展趋势和前景进行了展望。
- 朱贵杰梁振张丽华张玉奎
- 关键词：蛋白质组学
- 基于环氧功能基团的杂化硅胶固定化酶反应器被引量：2
- 2010年
- 在蛋白质组学研究中,为解决自由溶液酶解时间长、蛋白酶自降解等问题,各种类型的固定化酶反应器引起了人们的关注.采用溶胶凝胶法,在100μm内径毛细管内,以3-(甲基丙烯酰氧)丙基三甲氧基硅烷为功能单体,以四乙氧基硅烷为交联剂,制备了一种新型的杂化硅胶整体材料.并通过在整体柱表面由环氧功能团水解得到的二醇与胰蛋白酶(trypsin)的氨基进行一步反应,实现了胰蛋白酶固定化.利用该IMER,在47s内实现了牛血清白蛋白的酶解;经反相色谱分离和质谱鉴定,序列覆盖率在35%以上,与自由溶液酶解12h的效果相当.结果表明,基于亲水性杂化硅胶整体材料的IMER有望在蛋白质组学研究中发挥重要作用.
- 吴帅宾马俊锋杨开广刘晋湘梁振张丽华张玉奎
- 关键词：蛋白质高效液相色谱-质谱
- 蛋白质分离和鉴定的新技术新方法研究进展被引量：4
- 2012年
- 综述了国家重大科学研究计划"蛋白质分离和鉴定新技术新方法"课题的研究进展:高丰度蛋白质去除方面,采用强阳离子交换色谱(SCX)和反相色谱(RPLC),构建二维液相色谱分离系统;利用分子印迹技术制备高丰度蛋白质印迹聚合物.低丰度蛋白分离富集方面,采用新型功能材料磷酸化蛋白质/多肽、糖基化蛋白质/多肽、蛋白质/多肽实现对低丰度蛋白质的选择性富集.多维、多模式、阵列式的蛋白质高效分离方面,利用循环分离体积排阻色谱(csrSEC)和RPLC的联用构建多维分离系统;构建弱阴弱阳离子混合色谱-固定化酶反应器-RPLC-电喷雾质谱系统.高灵敏鉴定新技术新方法方面,发展液质联用接口技术,以中空纤维膜为根本,设计以此为核心的集成化样品预处理装置;新发展多肽衍生试剂,能够将肽段在质谱的检测灵敏度提高1—2个数量级;在靶体材料方面,采用复合核壳纳米功能靶体材料;在质谱数据处理方法方面,基于遗传算法发展筛选标准优化策略.这些新技术和新方法为蛋白质组研究提供了有效的方法.选择性吸附材料的研制为蛋白质组学研究中高丰度蛋白质去除和低丰度蛋白质富集提供了新的途径,进而避免了复杂体系对目标蛋白质鉴定的干扰.以多维、多模式、阵列式的蛋白质高效分离技术为核心构建的平台,实现了蛋白质组的高效、高通量、高可靠性分离;以液相色谱/质谱联用为核心的高灵敏鉴定的新技术新方法的发展,提高了低丰度蛋白质的质谱鉴定灵敏度和准确度.
- 杨开广张丽华张玉奎
- 关键词：蛋白质组色谱分离质谱鉴定
- 基于M13噬菌体展示单链抗体文库的新型蛋白质均衡器的研制及其在肾病患者尿蛋白分析中的应用被引量：1
- 2009年
- 通过将展示单链抗体(scFv)文库的M13噬菌体固定于冷凝胶整体柱表面制备了一种新型蛋白质均衡器。由于展示的scFv片段具有种类多、数目大以及与蛋白质结合的特异性强等优点,因此其非常适合用于复杂蛋白质样品的预处理。将肾病患者尿蛋白在平衡器上反复上样5次后,依次使用2mol/LNaCl、50mmol/LGly-HCl(pH2.5)和凝血酶溶液洗脱与均衡器结合的蛋白质,收集各馏分,并采用串联微柱反相液相色谱-电喷雾质谱进行蛋白质的分离鉴定。与未经均衡器处理的样品相比,鉴定的蛋白质数目由142个提高到396个。此外,凝胶电泳的分析结果显示,在上样流出液中蛋白质的浓度差异明显变小,大量的高丰度蛋白质存在于NaCl洗脱液中。上述结果表明,基于M13噬菌体展示scFv文库的新型蛋白质均衡器能够有效减小样品中蛋白质的浓度差异,有利于发现更多的低丰度蛋白质。
- 赵鹏陶定银梁振张丽华张玉奎
- 关键词：蛋白质肾病患者
- 芯片自由流梯度电场电泳及其应用被引量：2
- 2009年
- 尽管在垂直的电场和流体场作用下,采用芯片自由流电泳(μ-FFE)可实现样品的连续微分离和制备,但是由于在运行过程中,存在分析物的区带展宽问题,会直接影响样品的分离效果.在本文中,在施加固定电压的情况下,通过向和分离缓冲液相同的电极缓冲液中添加硫酸钠的方法,在分离腔内形成了梯度电场.通过对罗丹明B和甲基绿混合物的分离发现,在均一电场下,施加400V分离电压,混合物需2min才能完全分离;甲基绿的区带宽度为3.8mm,与罗丹明B的分辨率是3.2.在向电极缓冲液中添加5mmol/L硫酸钠形成的电场梯度下,施加300V的分离电压,两种染料可在10s内完成分离;在20s时,甲基绿的区带宽度被压缩到0.5mm,检测灵敏度提高了7倍以上;与罗丹明B的分辨率可达到16.2.此外,该方法还被用于牛血清白蛋白的富集.与施加均一电场相比,蛋白质的检测灵敏度得到了显著提高.上述结果表明,通过在μ-FFE中引入梯度电场,可有效提高样品的分辨率、检测灵敏度和分析速度.
- 王平利张丽华梁振张玉奎
- 关键词：染料蛋白质
- 非水溶性药物潜在靶蛋白筛选方法探索
- 2011年
- 针对化学蛋白质组学在筛选非水溶性药物的靶蛋白中存在的问题,建立了以非水溶性药物颗粒为载体的靶蛋白筛选方法.通过避免药物固定化,不仅可以保留全部的药物官能团,而且减少了蛋白质在固载基质上的非特异性吸附,可提高获得数据的可信度.将非溶性药物地塞米松颗粒直接与人小细胞肺癌H446细胞提取蛋白质通过间歇性振荡孵育24h,然后采用缓冲液清洗药物颗粒,最后对药物颗粒特异性结合的蛋白质进行酶解和分离鉴定.结果表明,筛选出41个潜在的药物靶蛋白,参与了与DEX药物作用机理相关的多种蛋白质代谢通路和糖代谢通路,同时还发现部分蛋白质参与了帕金森症疾病过程.
- 陶定银夏思敏刘晋湘张丽华梁振张玉奎
- 关键词：地塞米松
- 离子液体在分离领域的研究进展被引量：23
- 2010年
- 室温离子液体,又称离子液体,是一种在室温及接近室温的环境中完全以离子状态存在的液态物质.由于其具有不可燃、蒸汽压极低、黏度大、导电性和溶解能力好、高温稳定等特点,已被广泛应用于有机合成、催化、电化学、分析化学等领域.本文侧重介绍离子液体在样品预处理、毛细管电泳、高效液相色谱、气相色谱、质谱等分离领域的最新研究进展,并对其发展方向进行了展望.
- 韩彬张丽华梁振屈锋邓玉林张玉奎
- 关键词：离子液体色谱
- 新型单分散血清白蛋白印迹微球的制备被引量：2
- 2009年
- 以猪血清白蛋白(PSA)为模板,采用分级印迹方法,制备了新型单分散多孔蛋白质表面印迹微球.将PSA吸附在5μm粒径、1000孔径的球形硅胶表面及孔内后,将甲基丙烯酰胺、甲基丙烯酸为功能单体、甲叉双丙烯酰胺为交联剂的聚合物溶液,通过真空负压引入到硅胶孔内,并在室温下聚合24h.反应完成后,用3mol/LNH4HF2刻蚀硅胶,获得形状和结构与硅胶颗粒互补的PSA印迹聚合物微球.竞争吸附实验结果表明,在非模板蛋白质存在的情况下,实现印迹颗粒对模板蛋白的高选择性吸附,选择因子达到3.6,说明该印迹聚合物材料有望成为一种可以同生物抗体相媲美的新型亲和材料.
- 刘晋湘邓启良张丽华梁振张玉奎
- 关键词：血清白蛋白
- 基于在线二维色谱的不同生长时期鹿茸的比较蛋白质组分析被引量：8
- 2010年
- 建立了基于在线二维弱阴离子交换色谱-反相液相色谱(2D-WAX-RPLC)的蛋白质分离系统,并用于不同生长时期鹿茸的比较蛋白质组分析。以5种标准蛋白质的混合物为样品,考察了系统的重现性。通过改变标准蛋白质之间的浓度比,研究了该系统进行蛋白质相对定量的能力。在此基础上,针对4个不同生长时期的鹿茸样品,分别采用5种不同的方法进行蛋白质提取,经2D-WAX-RPLC分离后,收集各生长时期对应蛋白质的峰高最大比超过2的组分。酶解后,采用微柱反相液相色谱-串联质谱(μRPLC-MS/MS)进行肽段的分离鉴定;共从9个差异蛋白质峰中鉴定到了22个差异蛋白质。研究结果表明,利用基于蛋白质水平的在线二维液相色谱分离技术找寻差异蛋白质,具有重现性好、自动化程度高等优点,可用于开展比较蛋白质组学的研究。
- 高亮乔晓强梁振张丽华霍玉书张玉奎
- 关键词：鹿茸蛋白质组不同生长时期比较蛋白质组学
- 人神经母细胞瘤的磷酸化膜蛋白质组分析被引量：2
- 2011年
- 针对人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞系的磷酸化膜蛋白质组,发展了基于多酶酶解法结合杂化硅胶基质固定化钛离子亲和色谱(Ti 4+-IMAC)整体柱富集的分析策略。该方法通过对细胞裂解液进行超速离心,以及1 mol/LNaCl和0.1 mol/L Na2CO3顺序清洗,获得膜蛋白质组分。所提取的蛋白质分别经胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶和胃蛋白酶平行酶解,产生的肽段经Ti 4+-IMAC整体柱选择性富集磷酸肽后,采用纳升级反相液相色谱分离和质谱鉴定,成功鉴定到43个磷酸化蛋白质,其中有14个定位于膜上。研究结果表明,采用该策略开展SH-SY5Y细胞系磷酸化膜蛋白质组学分析有望加速对该肿瘤的研究和相关潜在标记物的筛选。
- 侯春彦马俊锋陶定银张丽华梁振张玉奎
- 关键词：人神经母细胞瘤膜蛋白质
