国家自然科学基金(30973327)
- 作品数：15 被引量：16H指数：3
- 相关作者：高玉光孙岩刘晓影张娟娟孙学玲更多>>
- 相关机构：潍坊医学院滨州医学院附属医院滨州医学院更多>>
- 发文基金：山东省自然科学基金国家自然科学基金更多>>
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- Foxo3a调控小鼠釉质发育过程中MMP-20基因的表达被引量：2
- 2014年
- 目的:探讨转录因子Foxo3a在釉质发育过程中调控基质金属蛋白酶-20(MMP-20)基因表达的分子机制。方法:分别利用免疫组织化学技术、免疫荧光、RT-PCR法、双荧光素酶报告基因检测系统检测转录因子Foxo3a与MMP-20启动子区域的转录调控水平,分析Foxo3a调控MMP-20的转录活性的机制。结果:免疫组织化学染色发现Foxo3a在成釉细胞核中呈阳性表达,并且随着釉质的分泌表达逐渐增强,晚期变弱;RT-PCR证实Foxo3a促进MMP-20基因表达(P<0.05);双荧光素酶检测显示,Foxo3a促进MMP-20表达(P<0.05);特定序列定点突变后的Foxo3a对MMP-20基因的转录活性无显著的影响(P>0.05)。结论:转录因子Foxo3a可能通过与特定序列结合而调控MMP-20的表达,从而在釉质分泌过程中发挥重要作用。
- 王云虹慈浩粟杨勇张莉王玉敏李伯翰高玉光
- 关键词：FOXO3ART-PCR
- 转录因子Dlx1和Dlx2在成釉细胞中调控MMP20启动子转录活性的研究被引量：2
- 2013年
- 目的:观察Dlx家族转录因子Dlx1和Dlx2对小鼠成釉细胞基质金属蛋白酶20(matrix metallo proteinase20,MMP20)基因的调控作用,初步确定Dlx家族在釉质发育中的作用。方法:构建Dlx1和Dlx2真核表达载体重组质粒,用双荧光素酶报告基因检测系统分析不同剂量的Dlx1和Dlx2对MMP20基因启动子转录活性的影响;确定Dlx1和Dlx2有明显作用的启动子区段,用基因定点突变和双荧光素酶报告基因检测系统分析Dlx1、Dlx2对MMP20基因启动子转录活性的影响,以及Dlx1、Dlx2在调控MMP20基因时的相互作用;最后观察Dlx1与Dlx2共转染时MMP20基因活性表达的变化。结果:Dlx1转染小鼠成釉细胞后MMP20启动子活性表达上调,Dlx2转染小鼠成釉细胞后MMP20启动子活性表达抑制;突变MMP20启动子的Dlx结合位点后,MMP20启动子的转录活性下降,而且Dlx1失去上调MMP20启动子转录活性的作用;当Dlx1与Dlx2共转染后,在Dlx1转染剂量不变的前提下,随着Dlx2转染量的增加,小鼠成釉细胞MMP20启动子转录活性显著增加。结论:Dlx1和Dlx2在釉质发育过程中有重要的生物学意义,对MMP20基因表达具有重要的调节作用。
- 袁杰刘晓影曲政孙岩张娟娟高玉光
- 关键词：DLX基因定点突变
- 转录因子JunB和JunD调控成釉细胞MMP-20基因转录活性的研究
- 2013年
- 目的通过研究转录因子JunB,JunD对成釉细胞中MMP-20基因表达的调控作用,从而进一步明确Jun家族在牙釉质形成中的影响。方法首先构建JunB和JunD真核表达载体重组质粒并瞬时转染重组质粒进入成釉细胞中;利用双荧光素酶基因检测报告系统分析不同浓度JunB,JunD对MMP-20启动子特征性序列区域的转录活性的影响;确定有明显作用的启动子区段,利用基因定点突变和双荧光素酶基因检测报告系统分析JunB对MMP-20基因启动子转录活性的影响;最后再观察JunB与JunD共转染时对MMP-20基因活性表达的改变。结果成功构建JunB,JunD真核重组表达载体,顺利将重组质粒转染入成釉细胞;双荧光素酶基因检测报告系统分析显示JunB对MMP20启动子活性表达上调,而JunD对MMP20启动子活性表达无作用;突变MMP20启动子AP1的两个结合位点后,MMP20启动子的转录活性下降,同时JunB也失去了上调MMP20启动子转录活性的作用。最后将JunB和JunD共转染时,在JunB存在的前提下,随着JunD转染量的增加,小鼠成釉细胞MMP20启动子转录活性明显减弱。结论该研究表明转录因子JunB与成釉细胞内MMP-20启动子的特征性序列相互作用,从而调控MMP20的表达水平;而JunD对MMP20启动子特征性序列无明显作用。所以为进一步研究Jun家族成员在釉质发育过程中的作用建立了重要的生物学基础。
- 郝佳张新新袁杰张娟娟刘晓影孙岩高玉光
- 关键词：JUND基因定点突变
- Runx2介导TGF-β1调控成釉细胞MMP20基因表达的研究被引量：3
- 2012年
- 目的:研究Runx2在TGF-β1调控小鼠成釉细胞金属基质蛋白酶-20(matrix metalloprotei-nase 20,MMP20)基因表达中的作用。方法:首先利用双荧光素酶基因报告系统分析TGF-β1对MMP20基因启动子转录活性的影响;然后利用染色体免疫共沉淀(Chromatin Immunoprecipitation,ChIP)方法观察Runx2与MMP20特异性结合位点之间的相互作用,并利用基因定点突变和双荧光素酶基因报告系统分析Runx2对MMP20基因启动子转录活性的影响;最后运用小RNA干扰技术使Runx2基因沉默,实时定量RT-PCR技术观察TGF-β1诱导MMP20基因表达的改变。结果:TGF-β1刺激成釉细胞后,MMP20启动子在-87～+23区域转录活性无明显变化外,其他各区域转录活性均增强。利用ChIP研究发现Runx2与MMP20基因核心启动子的特征性序列"TGTGGG"相互作用;将该特征性序列由"TGTGGG"突变为"TGTAAG"后,利用双荧光素酶基因报告系统发现Runx2对MMP20基因启动子转录活性的影响减弱;利用小RNA干扰技术使Runx2基因沉默后,TGF-β1上调MMP20基因表达的作用减弱。结论:TGF-β1通过转录因子Runx2调控成釉细胞MMP20的表达。
- 孙学玲孙岩张娟娟赵娜梁广智刘晓影成敏高玉光
- 关键词：RUNX2TGF-Β1
- SPDEF调控小鼠成釉细胞MMP-20基因表达的分子机制研究
- 2013年
- 目的通过克隆转录因子SPDEF以及其真核表达载体的构建,分析该基因对成釉细胞MMP-20基因表达的影响,为进一步研究转录因子SPDEF在牙釉质形成中发挥的作用奠定基础。方法利用RT-PCR技术从小鼠成釉细胞中获得SPDEF基因,测序正确后克隆至pcDNA3.1/myc-HisA载体中,将重组质粒瞬时转染成釉细胞,并用双荧光素酶报告基因系统检测技术来检测MMP-20启动子区域的转录活性。结果①SPDEF基因经过RT-PCR扩增得到的产物与预期片段978bp相符,将所获得的目的基因与GenBank提供的已知序列(NM:013891.4)完全一致。②重组质粒pcDNA3.1/myc-HisA-SPDEF转染成釉细胞后,用荧光素酶分析系统检测显示MMP-20启动子转录活性升高。结论成功构建了SPDEF真核表达载体,初步研究证明SPDEF可能与MMP-20特征性序列结合从而上调MMP-20的表达。
- 纪虹利杜森董超张世龙靖旭高玉光
- TGF-β1调控成釉细胞ODAM基因表达的研究被引量：1
- 2011年
- 目的:探讨TGF-β1对ODAM基因表达的作用。方法:通过实时定量RT-PCR法观察TGF-β1对成釉细胞ODAM基因表达的影响;利用c-jun小RNA干扰(siRNA)技术,阻断转录因子c-jun基因表达,观察c-jun基因沉默对TGF-β1诱导ODAM基因表达的影响;利用双荧光素酶基因报告系统研究成釉细胞中TGF-β1对ODAM启动子转录活性的调控作用。结果:TGF-β1刺激成釉细胞后,ODAM基因表达显著增强;利用小RNA干扰技术使c-jun基因沉默,实时定量RT-PCR法研究显示,TGF-β1调控ODAM基因表达的作用减弱。将pGL3-ODAM转染成釉细胞后,用TGF-β1刺激成釉细胞一定时间,ODAM启动子的转录活性增强。c-jun基因沉默抑制了TGF-β1对ODAM启动子的激活作用。结论:在釉质发育过程中,TGF-β1通过转录因子c-jun调控成釉细胞ODAM基因表达。
- 郝建忠孙学玲何永云梁广智刘晓影孙岩高玉光
- EGF/EGFR/ErbB2调控成釉细胞MMP-20基因表达的研究被引量：3
- 2013年
- 目的:研究EGF/EGFR/ErbB2信号通路对小鼠成釉细胞中基质金属蛋白酶-20(matrixmetalloproteinase-20,MMP-20)基因表达的调控作用。方法:用定时定量RT-PCR、双荧光素酶报告基因检测系统分析EGF/EGFR/ErbB2调控MMP-20基因的表达、EGF调控MMP-20启动子的主要区域、MAPK信号通路阻断剂对EGF调控MMP-20转录活性的影响、转录因子Jun家族介导EGF/ErbB2对MMP-20转录活性的调控;用基因定点突变和双荧光素酶基因检测报告系统分析EGF/ErbB2、C-Jun对MMP-20基因启动子转录活性的影响。结果:成釉细胞经20 ng/mL EGF刺激后,MMP-20的基因表达上调(P<0.05),MMP-20启动子在(-157～+23)之前的区域转录活性增强(P<0.05);EGFR、ErbB2、ERK阻断剂均能抑制EGF对MMP-20基因表达的调控(P<0.05);转录因子C-Jun介导EGFR/ErbB2上调MMP-20基因的表达(P<0.05);突变MMP-20启动子的AP1结合位点后,MMP-20基因表达的水平下降(P<0.05),同时EGF/ErbB2也失去上调MMP-20基因表达水平的作用。结论:在成釉细胞中EGF通过EGFR/ErbB2～ERK～C-Jun信号通路对MMP-20基因的表达起到调控作用。
- 曲政王玉敏李博涵许针针袁杰高玉光
- 关键词：EGFEGFRERBB2
- TGF-β1调控小鼠成釉细胞Amelotin基因表达的研究被引量：4
- 2011年
- 目的:探讨TGF-β1对Amelotin基因表达的影响及作用机制。方法:通过实时定量RT-PCR法观察TGF-β1对釉成熟蛋白(Amelotin)基因表达的影响;利用TGFBR1小RNA干扰(siRNA)技术阻断TGF-β受体I(TGFBR1)表达,或在成釉细胞中过表达活化型TGF-β受体I(T204D),观察Amelotin基因表达的改变;利用双荧光素酶基因报告系统观察TGF-β1和T204D对成釉细胞Amelotin启动子转录活性的调控作用。结果:TGF-β1刺激成釉细胞后,Amelotin基因表达显著增强;利用小RNA干扰技术使TGFBR1基因沉默,实时定量RT-PCR显示TGF-β1调控Amelotin基因表达的作用减弱,而pCDNA3.1-T204D转染成釉细胞促进了Amelotin基因表达。将pGL3-Amelotin启动子转染成釉细胞,并用TGF-β1刺激成釉细胞,Amelotin启动子的转录活性明显增强。TGFBR1小RNA干扰阻断了TGF-β1诱导的Amelotin启动子转录活性,而将pGL3-Amelotin与T204D共转染成釉细胞后,促进了Amelotin启动子的转录活性。结论:在牙釉质发育过程中,TGF-β1和活化型TGFBR1信号通路调控成釉细胞Amelotin基因表达。
- 周红英孙学玲何永云刘晓影赵娜孙岩梁广智高玉光
- 关键词：TGF-Β1成釉细胞
- AP-2α对基质金属蛋白酶-20作用的研究被引量：2
- 2012年
- 目的:通过研究AP-2α转录因子对基质金属蛋白酶-20(matrix metalloproteinase-20,MMP-20)基因表达的调控作用,进一步明确AP-2α的功能,为研究AP-2α在釉质形成中的作用奠定基础。方法:利用RT-PCR法、双荧光素酶报告基因检测系统、染色体免疫共沉淀技术等来分析AP-2α与MMP-20启动子区域的转录调控能力。结果:小鼠成釉细胞转染AP-2αsiRNA后,成釉细胞中MMP-20 mRNA的表达水平显著上调。染色体免疫共沉淀结果显示,AP-2α可能通过与MMP-20启动子特征性序列相互作用,从而调控MMP-20的表达。双荧光素酶报告基因检测显示预测结合位点突变后,AP-2α对MMP-20启动子的表达水平无显著影响。结论:AP-2α基因沉默可显著上调MMP-20的mRNA表达水平;而AP-2α过表达可显著抑制MMP-20活性。提示AP-2α转录因子与成釉细胞内MMP-20启动子的特征性序列相互作用,从而调控MMP-20的表达水平。
- 赵娜王玉民孙学玲曲正孙岩张娟娟高玉光
- 关键词：RT-PCR
- 整合素β1调控成釉细胞外基质蛋白表达的研究
- 2013年
- 目的:观察整合素β1(Integrinβ1)在小鼠牙胚成釉细胞中的表达及其对成釉细胞细胞外基质蛋白——釉原蛋白(Amelogenin,AMELX)、成釉蛋白(Ameloblastin,AMBN)、釉成熟蛋白(Amelotin,AMTN)mRNA表达的影响。方法:采用免疫组化方法检测整合素β1在小鼠牙胚成釉细胞中的表达。构建真核重组表达载体pcDNA3.1/myc-hisA-Integrinβ1,并将其转染至小鼠成釉细胞,利用实时定量Real-time PCR法检测AMELX、AMBN、AMTN mRNA表达水平。结果:整合素β1在小鼠牙胚发育各期成釉细胞中均有表达。RT-PCR检测显示,与转染空白质粒的对照组相比,转染pcDNA3.1/myc-hisA-Integrinβ1的成釉细胞中AMELXmRNA的表达水平明显上调(P<0.05),但对AMBN和AMTN mRNA表达无显著促进作用(P>0.05)。结论:整合素β1在小鼠牙胚成釉细胞中表达,并促进Amelogenin在成釉细胞中的表达,提示整合素β1通过调节釉原蛋白而影响牙齿的发育和矿化。
- 张海英邵丹李伯翰韩婷婷李东亮王玉敏孙岩张娟娟高玉光
- 关键词：整合素Β1成釉细胞
