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江苏省自然科学基金(BK2007503)

作品数：1 被引量：0H指数：0
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文献类型

  • 1篇中文期刊文章

领域

  • 1篇医药卫生

主题

  • 1篇神经元
  • 1篇突变体
  • 1篇皮质
  • 1篇皮质神经
  • 1篇皮质神经元
  • 1篇重组腺病毒
  • 1篇腺病
  • 1篇腺病毒
  • 1篇腺病毒载体
  • 1篇磷酸化
  • 1篇酪氨酸
  • 1篇酪氨酸磷酸化
  • 1篇氨酸
  • 1篇PSD-95
  • 1篇病毒载体

机构

  • 1篇徐州医学院

作者

  • 1篇侯筱宇
  • 1篇徐镇
  • 1篇杜彩萍

传媒

  • 1篇徐州医学院学...

年份

  • 1篇2009
共 1 条 记 录，以下是 1-1
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排序方式：
PSD-95及其突变体的重组腺病毒对皮质神经元的感染
2009年
目的构建PSD-95（postsynaptic density-95）及其突变体PSD-95Y523F和PSD-95Y533F（523和533位酪氨酸分别突变成苯丙氨酸）的复制缺陷型重组腺病毒载体，并检测腺病毒颗粒对体外原代培养皮质神经元的感染能力。方法双酶切将PSD-95及其突变体的基因分别从载体peDNA3．1（＋）亚克隆至穿梭载体pAdTrack—CMV中；电穿孔法将穿梭重组体转化到电转感受态细胞BJ5183中，使其与腺病毒骨架载体pAdEasy-1同源重组；同源重组体经PacI酶切线性化，脂质体法转入HEK293H细胞中进行病毒包装；病毒颗粒分别感染HEK293T细胞和原代皮质神经元，荧光检测或免疫印迹方法检测目的蛋白的表达水平。结果经酶切电泳鉴定和序列测定证明同源重组体中含序列正确的目的基因；重组腺病毒颗粒感染HEK293T细胞后，免疫印迹显示有较高水平的目的蛋白表达；重组腺病毒具有感染原代皮质神经元的能力，在未成熟神经元（体外培养5—9天）中感染率低，而在成熟神经元（体外培养13天）中感染率较高。结论成功构建了PSD-95、PSD-95Y523F、PSD-95Y533F的重组腺病毒载体；获得具有感染能力的重组腺病毒颗粒，易于感染成熟的神经元。
徐镇杜彩萍侯筱宇
关键词：PSD-95腺病毒载体酪氨酸磷酸化
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