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肾移植受者外周血单个核细胞中miR-29与急性排斥反应的相关性研究被引量：5: 2013年; 目的了解肾移植受者外周血单个核细胞（PBMC）中的微小RNA（miRNA-29（miR-29）家族分子在急性排斥反应（AR）发生及恢复后的变化。方法15例肾移植后发生AR的受者，分别在AR发生时（AR组）和恢复后（恢复组）采集外周血，提取PBMC的总RNA，共采集30个样本。用实时荧光定量聚合酶链反应方法分别对miR-29a、miR-29b和miR-29c的表达水平进行相对定量。通过PicTar和TargetScan预测miR-29调控的靶基因，再通过组织特异性数据库，对血液中miRNA靶基因进行筛查过滤。对miR-29对应的靶基因进行基因本体论（G0）和京都基因与基因组百科全书（KEGG）通路分析，得到miR-29可能的生物学过程和作用通路。结果miR-29a和-29c在恢复组的表达水平明显高于AR组（P〈0．05），而两组miR-29b的表达的差异无统计学意义（P〉0．05）。GO中，有14个生物学过程在预测的靶基因中被有意义的富集（P〈0．05）；在KECG中，3条途径被有效富集（P〈0．05）。结论miR-29通过调控代谢、生物学合成等生物学过程和（或）黏着斑通路等影响AR的恢复。受者PBMC中miR-29的检测未来可能会成为判断AR后移植。肾转归的微创检测方法。; 黄海燕陈梅梅许晓光钱叶勇蔡明韩永王新颖石炳毅; 关键词：急性排斥反应微RNAS 肾移植

小鼠肾脏特异性miR-29c表达载体的构建与鉴定被引量：1: 2015年; 目的构建载体实现miR-29c在肾脏组织的特异性表达。方法分别以质粒pc DNA 3.1(+)和小鼠基因组DNA为模板,扩增CMV增强子序列和肾脏特异性钙黏着素蛋白KSP-cadherin启动子序列;将连接成的单一片段酶切后替换p CAGGS载体上的CAG启动子构成目的载体p CMV-KSP。将GFP编码区序列或小鼠miR-29c前体及两侧序列克隆到构建的载体上观察转染后目的基因的表达。结果从相应的模板上扩增出的序列经验证后连接到了p CAGGS载体上,转染细胞后在荧光显微镜下观察到KSP启动子调控下的GFP在MDCK中表达,而在NIH-3T3细胞中仅见微弱荧光。p CMV-KSP-p CAGGS-miR-29c载体较对照载体在转染人胚肾293T细胞24 h后,成熟miR-29c的表达显著升高,其靶基因bcl-2表达相应降低。结论构建KSP启动子调控miR-29c表达的载体,为构建肾脏特异性表达miR-29c转基因小鼠,进一步研究miR-29c在肾移植后的各种病理过程中的作用奠定了基础。; 黄海燕肖漓何秀云许晓光樊文梅魏玉香马锡慧孔祥瑞韩永高钰王新颖石炳毅; 关键词：转录启动子肾移植微RNAS 钙黏着糖蛋白类

肾移植术后病毒感染对外泌体研究影响的初步探索被引量：1: 2018年; 目的探讨移植后病毒感染患者人群体液中存在的病毒颗粒和核酸物质是否会存在于提取的外泌体样品中。方法选取2015年1月至2017年7月于解放军第三。九医院全军器官移植中心行同种异体肾脏移植手术的受者10例，其中白细胞人巨细胞病毒（HCMV）-pp65抗原检测阳性，同时血浆HCMVDNA检测结果为阳性或可疑阳性的病例5例，血浆BK病毒（BKV）DNA检测结果为阳性的病例5例。用试剂盒法提取血浆外泌体，电镜和纳米颗粒粒度分析仪（NTA）观察和分析外泌体。用实时荧光定量PCR分别检测并比较血浆、外泌体和流出液中的病毒DNA拷贝数。结果电镜下可见样本中的外泌体样囊泡结构，NTA检测样品浓度为（1．2～4．5）X10^11颗粒／Ⅱd，颗粒直径30～200nm。外泌体与血浆病毒DNA定量结果基本在同一数量级，而流出液中急遽降低。结论病毒DNA在移植后病毒感染患者外泌体样品中被大量检测出来，不仅提示了病毒传播可能利用了外泌体的生物形成过程，更提醒了现有的外泌体提取方式的局限性可能是病毒感染患者人群中外泌体研究的瓶颈。; 黄海燕肖漓毕丽丽高钰孔祥瑞杜若李彬钰韩永张文慧石炳毅; 关键词：肾移植巨细胞病毒 BK病毒外泌体

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国家自然科学基金(81202336)

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