上海市卫生局科研基金(20114Y001)
- 作品数：2 被引量：24H指数：2
- 相关作者：季青刘宣李琦刘艳娜叶乃菁更多>>
- 相关机构：上海中医药大学附属曙光医院上海市中医医院更多>>
- 发文基金：上海市卫生局科研基金上海市教育委员会创新基金上海市卫生系统百名跨世纪优秀学科带头人培养计划更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 应用CRISPR/Cas9基因编辑技术建立miRNA-301a敲除小鼠被引量：6
- 2015年
- 目的利用CRISPR/Cas9基因编辑技术建立miRNA敲除小鼠模型。方法根据miRNA基因序列,设计针对miR-301a的gRNA引物序列(双靶点),PCR扩增获得针对miR-301a的体外转录模板DNA和构建Cas9体外转录模板,然后进行Cas9和gRNA体外转录。利用体外转录的gRNA/Cas9mRNA对小鼠受精卵显微注射,并利用T7E1酶切和基因测序对miR-301a突变进行检测和鉴定。结果 PCR扩增、凝胶电泳和基因测序鉴定证实,获得序列正确的用于体外转录的模板DNA;体外转录获得gRNA/Cas9mRNA,顺利完成对小鼠受精卵的显微注射;利用T7E1酶切对miR-301a突变进行检测,发现8只新生小鼠中有7只(87.5%)被鉴定在miR-301a位点携带突变;基因测序结果显示,各小鼠均有不同程度的碱基插入或缺失突变,其中缺失碱基数目最多的4号小鼠产生31个碱基缺失。结论成功建立miR-301a基因高效敲除小鼠模型。
- 刘宣季青李文周利红王璇江海丽陈静畅立圣李琦
- 关键词：基因敲除小鼠
- 左金丸通过Wnt/β-catenin信号通路对幽门螺杆菌感染的人胃癌细胞转移的影响被引量：18
- 2015年
- 目的:探讨左金丸通过抑制Wnt/β-catenin信号通路抗幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,H.pylori)感染的人胃癌MKN45细胞转移的机制。方法:以H.pylori感染人胃癌MKN45细胞,采用CCK-8检测不同浓度左金丸醇提物对H.pylori感染的MKN45细胞生长抑制作用。Transwell检测低、中、高剂量(25、50、100μg/ml)左金丸对H.pylori感染的MKN45细胞转移能力的影响;Western blot检测其对H.pylori感染的MKN45细胞核中的β-catenin蛋白表达;ELISA检测其对H.pylori感染的MKN45细胞培养上清液中MMP-7表达。结果:左金丸醇提物对H.pylori感染的MKN45细胞生长具有抑制作用,呈剂量依赖性。Transwell结果显示,与正常对照组比较,H.pylori感染后MKN45细胞转移能力显著增强(P<0.01);与H.pylori感染组比较,低、中、高剂量左金丸均能够明显抑制H.pylori诱导的MKN45细胞转移能力(P<0.01),呈剂量依赖性,且左金丸能够明显下调H.pylori诱导的β-catenin在细胞核的累积及其下游靶基因MMP-7蛋白表达(P<0.01)。结论:左金丸防治H.pylori诱发胃癌细胞转移的机制可能与通过Wnt/β-catenin信号通路抑制MMP-7表达有关。
- 张彦博李琦刘艳娜叶乃菁季青柴妮刘宣
- 关键词：左金丸胃癌幽门螺杆菌WNT/Β-CATENIN
