国家自然科学基金(30973402)
- 作品数：12 被引量：37H指数：4
- 相关作者：万艳平毛旭虎李倩余敏君唐双阳更多>>
- 相关机构：南华大学第三军医大学西南医院第三军医大学第一附属医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金湖南省教育厅重点项目湖南省高校科技创新团队支持计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- HPV16 E6蛋白在宫颈癌中的作用研究进展被引量：11
- 2015年
- 高危型人乳头状瘤病毒16型(HPV16)与50%以上的宫颈癌密切相关,其E6癌蛋白作为病毒生命周期的主要蛋白之一,在诱导肿瘤发生与发展进程中起重要作用,且与病毒复制、宿主细胞周期调控、细胞凋亡、细胞增殖、细胞恶性表型转化有关。E6蛋白主要作用包括:通过结合E6相关蛋白降解P53抑制细胞凋亡;增强端粒酶活性使宿主细胞永生化;与Daxx启动子区结合,抑制启动子转录活性,降低Daxx蛋白表达,阻遏细胞凋亡;与多种细胞因子相互作用后,经多种途径改变细胞微环境,使之有利于肿瘤细胞逃避宿主固有免疫应答。因此,在宫颈癌的发生和发展中,HPV16 E6蛋白通过多种作用机制发挥重要作用。
- 安振万艳平
- 关键词：HPV16E6蛋白P53端粒酶宫颈癌
- 类鼻疽伯克霍尔德致死因子被引量：7
- 2015年
- 类鼻疽伯克霍尔德菌是一种胞内感染的革兰阴性杆菌,所导致的疾病称为类鼻疽。迄今为止,还没有针对类鼻疽的疫苗。其致死因子1(BLF1)作为类鼻疽伯克霍尔德菌的重要致病因子,能抑制宿主细胞翻译起始因子e IF4A的解旋酶活性,从而抑制蛋白质合成。BLF1作为e IF4A的抑制剂,有望成为靶向抗肿瘤药物。同时,BLF1具有很强的免疫原性,对其进行结构改造后,可成为类鼻疽疫苗的候选抗原。
- 任春艳李倩毛旭虎
- 关键词：类鼻疽伯克霍尔德菌
- HPV16 E6蛋白与hDaxx在HeLa细胞的定位及对凋亡的影响被引量：5
- 2012年
- 目的探讨外源人乳头瘤病毒16型E6蛋白（HPV16E6）与人Daxx蛋白（hDaxx）在HeLa细胞内的亚细胞定位及诱导HeLa细胞凋亡的影响。方法Western印迹法检测融合蛋白DsRed—HPV16E6和EGFP—hDaxx的表达。激光共聚焦显微镜观察HPV16E6和hDaxx的亚细胞定位。将HeLa细胞分为对照组、TNF—α处理组、转染空载体组、转染HPV16E6组、共转染HPV16E6和hDaxx组。后4组均经TNFTNF-α诱导。用流式细胞仪测定细胞凋亡率，分光光度法检测Caspase-8与Caspase-3的相对活性。结果融合蛋白DsRed—HPV16E6和EGFP—hDaxx在细胞内表达并分布于胞质与胞核，出现共定位现象，且部分hDaxx从胞核转移至胞质。转染E6组凋亡率（21．4％±1．1％）低于转染空载体组（27．0％±0．9％，P〈0．01）；与转染E6组相比较，共转染组凋亡率（32．5％±2．1％）显著升高（P〈0．01）。转染E6组Caspase-8和Caspase-3相对活性分别为0．057±0．003、0．054±0．006，均低于空载体组（0．092±0．012、0．093±0．005，均P〈0．01）；与转染E6组相比较，共转染组Caspase-8和Caspase-3相对活性（0．109±0．013、0．110±0．004）均显著升高（P值均〈0．01）。结论HPV16E6使部分hDaxx从胞核转位至胞质，二者发生共定位。HPV16E6蛋白可抑制TNF-α诱导的HeLa细胞凋亡，hDaxx高表达可下调HPV16E6蛋白这种作用。
- 陈苏芳朱翠明唐双阳余敏君粟盛梅阳帆万艳平
- 关键词：人乳头瘤病毒16HELA细胞
- GFP-HPV16 E5融合蛋白在HeLa细胞内的表达与定位被引量：3
- 2010年
- 目的研究GFP-HPV16 E5融合蛋白在HeLa细胞内的表达与定位。方法 PCR扩增HPV16E5基因片段,将其连接到真核表达载体pEGFP-C1,双酶切及测序鉴定,构建表达载体pEGFP-C1/HPV16 E5;将质粒pEGFP-C1/HPV16 E5和pEGFP-C1分别转染HeLa细胞,在倒置荧光显微镜下观察GFP-HPV16 E5融合蛋白在HeLa细胞内的表达与定位。结果 GFP荧光均匀分布在细胞浆和细胞核;GFP-HPV16 E5融合蛋白组荧光分布在细胞浆。结论 GFP-HPV16 E5融合蛋白能在HeLa细胞内表达且定位于细胞浆。
- 唐双阳陈杰李薇周良余敏君朱翠明万艳平
- 关键词：人乳头瘤病毒16型E5
- 类鼻疽杆菌Ⅲ型分泌系统BPSS1395蛋白表达及其抗体制备与鉴定被引量：4
- 2017年
- 目的重组表达类鼻疽杆菌Ⅲ型分泌系统蛋白BPSS1395,利用其抗体检测该蛋白在细菌中的分布。方法以pET-22b为表达系统,采用DNA重组技术在大肠杆菌中表达BPSS1395蛋白;用纯化重组蛋白免疫新西兰大白兔,Western blot及ELISA法鉴定其免疫学性质;以制备的抗血清Western blot分析该蛋白的亚细胞定位。结果从类鼻疽杆菌BPC006株基因组DNA中PCR得到了BPSS1395目的基因,并成功构建pET-22b-BPSS1395重组质粒,转化到E.coli宿主菌BL21(DE3)经IPTG诱导表达、纯化得到了相对分子质量为32×10~3的高纯度BPSS1395蛋白,制备的兔抗血清ELISA效价均高达1∶1 280 000,并能与目的蛋白发生特异性抗原抗体反应。亚细胞分离后BPSS1395在类鼻疽杆菌中主要定位于细胞质。结论重组表达了具有生物活性的BPSS1395蛋白,制备了其特异性多克隆抗体,证明了该蛋白定位于细胞质。
- 胡艺胡志强马腾飞韩丹李倩方瑶毛旭虎
- 类鼻疽杆菌慢性感染BALB/c小鼠模型的建立被引量：1
- 2017年
- 目的建立类鼻疽杆菌(Burkholderia pseudomallei)慢性感染BALB/c小鼠模型并评价其稳定性。方法采用0.01 m L洗涤后的高、中、低剂量的类鼻疽杆菌液(菌量分别为3.3×104、3.3×103、3.3×102CFU)滴鼻感染BALB/c小鼠,密切监测42 d,记录小鼠的生存率,探索合适的攻毒剂量。在低剂量细菌(3.3×102CFU)感染小鼠后21、28、35、42 d,计数小鼠血液、肝脏、脾脏和肺脏的细菌定植量,ELISA检测血清炎性因子TNF-α、IFN-γ的表达和血清类鼻疽杆菌特异性Ig G抗体滴度,观察肝脏、脾脏和肺脏等主要器官的病理学改变,评价动物模型的稳定性。结果低剂量类鼻疽杆菌滴鼻感染BALB/c小鼠后,小鼠42 d生存率为60%。期间小鼠体质量呈下降趋势,血液、肝脏、脾脏和肺脏均有细菌定植,并出现大量炎性细胞浸润、多灶性坏死和脓肿等病理改变;类鼻疽杆菌血清中特异性Ig G抗体滴度从感染后21 d起持续增高;实验组小鼠血清炎性因子TNF-α和IFN-γ表达明显高于对照组(P<0.05)。结论成功建立了稳定的类鼻疽杆菌慢性感染BALB/c小鼠模型。
- 马腾飞胡艺方瑶朱攀胡治强韩丹康少雄李倩毛旭虎
- 关键词：动物模型
- Daxx的转录抑制及激活调控功能
- 2011年
- Daxx定位细胞核PODs,可在转录调控中行使转录抑制或转录激活双重功能.Daxx通过转位、化学修饰、染色体调节、直接与转录因子或转录相关蛋白相互作用等多种方式发挥转录调控作用.其中,Daxx通过转位,转录后化学修饰,染色体调节,与转录因子或转录相关蛋白相互作用行使转录抑制功能,但相关研究表明Daxx同样可通过与相关因子相互作用激活转录,但具体作用机制尚不清楚.
- 易旸万艳平
- 关键词：DAXX转录
- Daxx与蛋白质相互作用对转录调控影响研究进展被引量：1
- 2013年
- 死亡结构域相关蛋白(Daxx)是一种多功能的核蛋白,与PML相互作用共定位PML-NB,维持细胞的正常形态与功能。Daxx与PML、SUMO-1、Zacl、ATRX、H3.3、SF-1、AIRE和CREB等蛋白或受体相互作用,发挥转录调控作用,且与这些蛋白质在细胞亚核结构内的定位有关。
- 黄方万艳平
- 关键词：DAXX转录调控
- 类鼻疽伯克霍尔德菌BPSS1622蛋白免疫原性鉴定与亚细胞定位被引量：1
- 2017年
- 目的重组表达类鼻疽伯克霍尔德菌(Burkholderia pseudomallei)BPSS1622蛋白并鉴定其免疫原性及亚细胞定位。方法以pET-22b为表达载体,在大肠埃希菌BL21中表达BPSS1622蛋白;亲和层析纯化目的蛋白;用纯化后蛋白免疫新西兰兔获得抗血清;ELISA及Western blot鉴定纯化蛋白的免疫原性,并对类鼻疽杆菌BPSS1622蛋白进行亚细胞定位,探讨其生物学功能。结果以菌株BPC006基因组DNA为模板,通过PCR获得目的基因,构建pET-22b/BPSS1622重组质粒;转化至E.coli BL21获得工程菌株,经IPTG诱导表达、纯化得到了相对分子质量为22 000的目的蛋白;制备的抗血清ELISA效价高达1∶1 200 000,并能与目的蛋白发生特异性抗原抗体反应;亚细胞定位发现BPSS1622蛋白定位于类鼻疽杆菌的胞壁及胞膜中。结论成功克隆和表达了类鼻疽杆菌的BPSS1622蛋白,制备了免疫血清,该蛋白定位于细菌的细胞膜和细胞壁中,预测该蛋白具有ATP依赖的RNA解旋酶活性,为疾病诊断和预防奠定了基础。
- 金浩龙胡艺李倩马腾飞韩丹胡志强毛旭虎
- 关键词：类鼻疽伯克霍尔德菌免疫血清亚细胞定位
- 高危型人乳头瘤病毒E6蛋白与hTERT的相互作用研究进展被引量：1
- 2011年
- 人乳头瘤病毒（human papillomavirus,HPV）是一类能特异性感染人皮肤和黏膜基底上皮细胞的双链闭合环状DNA病毒。宫颈癌的病因学研究表明,生殖道感染高危型HPV（High-risk HPV,HR-HPV）是宫颈癌和宫颈上皮内瘤变（Cervical intraepithel ialneoplasia，CIN）高发的关键诱因。
- 范瑞岗万艳平
- 关键词：高危型人乳头瘤病毒HTERT相互作用E6蛋白DNA病毒特异性感染
