云南省科技厅科研基金(2009CA005)
- 作品数：1 被引量：1H指数：1
- 相关作者：詹辉王春晖颜汝平王文举王剑松更多>>
- 相关机构：中国医学科学院北京协和医学院昆明医学院第二附属医院更多>>
- 发文基金：国家教育部博士点基金国家自然科学基金云南省科技厅科研基金更多>>
- 相关领域：生物学更多>>
- 凋亡素蛋白多克隆抗体的制备及免疫学评价被引量：1
- 2011年
- 凋亡素由鸡贫血病毒中的VP3基因编码,能诱导多种肿瘤细胞发生凋亡。以真核表达载体pcDNA3.0-VP3为模板构建原核表达载体pET8a-VP3,经NdeⅠ/BamHⅠ双酶切鉴定和基因测序无误后,在IPGT诱导下表达VP3蛋白并对其进行纯化,将纯化后的VP3蛋白与弗氏完全佐剂或不完全佐剂乳化后,分别对两只新西兰大耳白兔进行皮下多点注射,间接ELISA检测免疫后血清效价,效价达到指标后第2天以心脏穿刺的方法采全血后分离抗血清。抗血清效价高的兔子进一步采用Protein A纯化总IgG,最终纯化后的抗体效价可以达到1∶243 000。用重组腺相关病毒rAAV-VP3感染细胞后对抗体的特异性进行免疫学评价。首先利用免疫荧光技术检测VP3基因在人膀胱癌细胞株T24、EJ细胞以及Vero细胞中的表达情况,观察到凋亡素在T24、EJ细胞中主要定位于细胞核,而在Vero细胞中则定位于细胞质。其次通过Western blotting检测纯化后的抗体能与细胞内腺相关病毒介导表达的凋亡素蛋白特异性结合。实验证明了制备的凋亡素蛋白多克隆抗体的有效性和特异性,为进一步阐明凋亡素抗肿瘤效应的分子机制及生物学特性奠定了基础。
- 王春晖王剑松王文举詹辉李鸿钧颜汝平徐鸿毅
- 关键词：VP3蛋白多克隆抗体膀胱肿瘤腺相关病毒
