国家自然科学基金(30470819)
- 作品数：5 被引量：6H指数：2
- 相关作者：苏青李晓永周亚芹张洪梅董艳更多>>
- 相关机构：上海交通大学医学院附属新华医院更多>>
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- 相关领域：医药卫生更多>>
- 转染中国仓鼠卵巢细胞人TSH受体的功能评价被引量：1
- 2008年
- 目的研究转染中国仓鼠卵巢(CHO)细胞人促甲状腺激素(hTSH)受体(hTSHR)的功能。方法抽提已转染hTSHR的CHO细胞基因组DNA,PCR扩增目的条带,并对产物进行序列测定。采用受体的放射配体结合分析法,以固定量125I的牛促甲状腺激素(125I-bTSH)和浓度递增的未标记bTSH与hTSHR发生竞争结合反应分析受体的基本功能;通过TSH刺激试验测定细胞环磷酸腺苷(cAMP)含量,评价hTSHR的生物学活性。结果PCR扩增片段长度与预期相符,且序列完全正确。竞争结合反应表明,随着bTSH浓度的递增,125I-bTSH与hTSHR的结合量逐渐下降;TSH刺激试验显示,随着bTSH浓度的递增,细胞cAMP含量亦逐渐升高,当bTSH浓度为10 mIU/mL时,cAMP水平达到峰值。结论cDNA序列整合在CHO细胞基因组内并在细胞膜上表达的hTSHR,具有受体的基本功能特性和良好的生物学活性。该实验为自身免疫性甲状腺疾病患者血清甲状腺刺激性抗体(TSAb)和阻断性抗体(TSBAb)的检测奠定了基础。
- 周亚芹张洪梅李晓永董艳苏青
- 关键词：中国仓鼠卵巢细胞促甲状腺激素受体促甲状腺激素受体抗体环磷酸腺苷
- 人甲状腺刺激激素受体cDNA的克隆及真核表达载体的构建被引量：3
- 2008年
- 目的克隆人甲状腺刺激激素受体(hTSHR)基因cDNA并构建其真核表达载体。方法以人甲状腺组织cDNA为模板,聚合酶链反应(PCR)扩增hTSHR基因编码区的全部序列,克隆入pGEM-T载体中,经限制性内切酶、DNA序列分析鉴定目的基因后,定向亚克隆到真核细胞表达载体pcDNA3.1中,并进行双酶切鉴定。结果PCR扩增的特异性片段长度为2 337 bp,以此构建的pGEM-T-hTSHR克隆载体,经限制性内切酶酶切及DNA序列分析证实载体中带有hTSHR基因编码区的目的片段,重组质粒pcDNA3.1-hTSHR经KpnⅠ和XbaⅠ双酶切后显示5 1000 bp和2 300 bp左右的2个条带,DNA序列分析显示与GenBank中的hTSHR基因cDNA序列一致,证明hTSHR基因已成功克隆入真核细胞表达载体pcDNA3.1中。结论成功构建了野生型pcDNA3.1-hTSHR重组真核表达载体。
- 李晓永冯绮文董艳周亚芹葛勤敏张洪梅苏青
- 关键词：克隆真核表达载体
- 人促甲状腺激素受体与Graves病
- 2008年
- Graves病（GD）是器官特异性自身免疫性甲状腺疾病，其主要发病机制是机体失去了对促甲状腺激素受体（TSHR）的免疫耐受，从而产生TSHR自身抗体。GD的确切发病机制还不完全清楚，但已明确遗传因素在GD发病中起重要作用。由于TSHR是GD发病的主要抗原，因此其基因可能是GD的易感基因，但目前该基因是否与GD的发病相关还存在争议。
- 李晓永苏青
- 关键词：GRAVES病TSHR免疫耐受易感基因
- 促甲状腺激素受体的裂解和脱落被引量：2
- 2007年
- 促甲状腺激素受体(TSHR)是一种重要的自身抗原,TSHR的裂解和脱落可诱发自身免疫。裂解的TSHR是甲状腺主要的功能性受体,α亚单位的脱落对于刺激型TSHR抗体(TSAb)的形成及TSAb和阻断型TSHR抗体(TBAb)之间的平衡有重要意义,对于TSHR胞外域裂解和脱落的相关研究不仅有助于深入理解TSHR的结构和功能,而且有助于阐明自身免疫性甲状腺疾病的发病机制及探寻新的治疗方法。该文就TSHR概况、受体裂解和脱落的机制及其意义作一综述。
- 葛勤敏苏青
- 关键词：促甲状腺激素受体裂解
- 人促甲状腺激素受体全长表达载体在真核细胞内的稳定表达被引量：1
- 2009年
- 目的构建pcDNA3.1/人TSH受体(human thyroid-stimulating hormone receptor,hTSHR)基因真核表达载体(已完成),将该真核表达载体在CHO细胞(中国仓鼠卵巢细胞)中表达,并筛选获得稳定表达细胞株。方法通过脂质体介导,用重组质粒pcDNA3.1-hTSHR转染CHO细胞,以G 418筛选稳定表达细胞株,挑取单克隆,扩大培养并传代;取P5代细胞,抽提基因组DNA及蛋白分别用PCR及Western blot方法鉴定被转染CHO细胞hTSHR的表达情况。结果得到阳性单克隆5个,传代培养。P5代细胞PCR扩增产物为约530 bp特异性条带,大小与预期相符,未见非特异性条带。Western印记法结果表明被转染CHO传代细胞有hTSHR蛋白表达。结论pcDNA3.1-hTSHR真核表达载体可以在CHO细胞中稳定表达,成功构建稳定表达细胞株。为测定自身免疫性甲状腺疾病患者血清TSHR奠定了基础。
- 张洪梅周亚芹董艳冯绮文李晓永苏青
- 关键词：TSH受体真核表达载体CHO细胞
