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无乳链球菌对罗非鱼粘液的粘附特性被引量：1: 2016年; 利用间接ELISA方法研究罗非鱼不同部位的粘液、作用时间、温度、p H及盐度等因子对无乳链球菌粘附作用的影响。结果表明:无乳链球菌对罗非鱼不同部位粘液的粘附能力受温度、粘附时间和p H值影响较大,受盐度影响较小。孵育温度为35℃、孵育时间为120 min时,无乳链球菌对肠道粘液的粘附能力最强,粘附量达到4.052×10~7cfu·m L^(-1);其次是体表粘液,粘附量为6.480×10~6cfu·m L^(-1);鳃粘液的粘附能力最弱,为2.825×10~6cfu·m L^(-1)。当孵育时间少于180 min时,粘附量与孵育时间呈正相关;粘附量在35℃下孵育180 min时,趋于饱和,达到5×10~8cfu·m L^(-1)。无乳链球菌对不同部位粘液粘附的最适p H值不同,肠道粘液、体表粘液和鳃粘液粘附力最强的p H值分别为5.0,7.0和8.0。; 刘海天赵光军郭晓慧张永政周永灿蔡岩谢珍玉郭伟良王世锋; 关键词：无乳链球菌罗非鱼病原菌粘附

海南罗非鱼源维氏气单胞菌的分离、毒力基因检测及ERIC-PCR分型被引量：6: 2017年; 从海南罗非鱼的体内分离和鉴定出40株维氏气单胞菌,并对这40株维氏气单胞菌进行了8种毒力基因检测及ERIC-PCR分型分析.毒力基因检测的结果表明:在这40株维氏气单胞菌中,主要携带6种毒力基因,即act,alt,ast,fla,lip和hlyA基因,其携带率分别为35.0%,22.5%,27.5%,37.5%,5.0%和15%,未能检测到TapA和aerA基因;根据不同菌株携带毒力基因的不同,这40株维氏气单胞菌又可分为13种毒力基因型,携带2种以上毒的菌株有15株,占总数的37.5%,携带3种以上毒力基因的菌株有9株,占总数的22.5%,其中HNWC23携带5种毒力基因,其毒力基因型为act^+alt^+ast^+hly A^+fla^+.ERIC-PCR分型结果显示:该40株维氏气单胞菌可分为四个大簇,以遗传相似度(96%)为界可将其分为18种ERIC型,每个簇中的ERIC型都呈现多样性.; 张永政李聪王世锋蔡岩周永灿郑玉朱薇薇; 关键词：罗非鱼维氏气单胞菌毒力基因 ERIC-PCR

基于滤纸包裹法的细菌扫描电镜样品制备方法改良被引量：5: 2016年; 滤纸包裹法制备细菌类单细胞生物扫描电镜样品具有耗时短和样品损耗少等优点,不过,样品量较少时,用该方法制样因干燥后难以分辨滤纸上样品位置而造成取样困难,且电镜观察时常常存在较严重的滤纸背景干扰,难以分辨细菌等样品表面的细微结构。为此,笔者对细菌类单细胞样品制备的滤纸包裹法进行了改良,在滤纸包裹的内层衬上1层锡纸,样品涂布于锡纸后再进行脱水等操作。改良后的方法不仅易于分辨样品在锡纸上的分布,方便取样,而且可有效克服原滤纸包裹法制样时产生的背景干扰,能清晰观察细菌样品的表面细微结构,提高了观察效果。; 徐先栋张国庆谢珍玉王世锋周永灿; 关键词：扫描电镜

抗哈氏弧菌中草药筛选及其活性成份提取工艺的优化被引量：3: 2013年; 为给中草药在水产病害防控中的应用提供科学依据,采用琼脂扩散法筛选出具有抗哈氏弧菌活性的中草药———鸡血藤,优化了其抗哈氏弧菌活性成分的提取工艺。首先筛选提取溶剂乙醇的最适体积分数,然后采用单因素法初步优化了提取液料比、浸润时间、温度和提取时间,之后采用Box-behnken试验设计结合响应面分析法进一步优化,最优提取条件为液料比5.00mL∶0.0744g,浸润66min,温度98.5℃,提取180min,抗哈氏弧菌活性成分提取得率的预测极值为17.043%,在最优条件下,4次平行验证,抗哈氏弧菌活性成分提取得率为(17.086±0.027)%,为优化前的1.71倍,验证值与预测值间相对误差为0.3%,模型预测准确可靠。对鸡血藤在水产病害防控中开发应用具有重要意义。; 邓恒为周永灿谢珍玉王世锋邓小琴郭伟良; 关键词：哈氏弧菌鸡血藤响应面

罗非鱼无乳链球菌拮抗菌的分离、鉴定及多样性分析被引量：3: 2014年; 采用径向扩散法筛选对罗非鱼致病性无乳链球菌具有拮抗作用的益生菌,利用16S r DNA对拮抗菌进行鉴定,构建系统发育树对拮抗菌的多样性进行分析,并通过腹腔注射法测定其对罗非鱼的安全性。结果表明,从8个采样点共分离细菌1 759株,其中59株对无乳链球菌具有较强的拮抗作用,抑菌圈直径为10.6mm^30.8 mm,平均21.9 mm;16S r DNA分子鉴定及系统进化树分析显示,59株拮抗菌分为5属8个种,其中芽孢杆菌属(Bacillus)45株、假单胞菌属(Pseudomonas)5株、肠球菌属(Enterococcus)2株、类芽孢杆菌属(Paenibacillus)2株和葡萄球菌属(Staphylococcus)5株。鱼体安全性试验显示,有22株拮抗菌对罗非鱼不具有致病性,可作为防治罗非鱼无乳链球菌病的备选菌株。; 赵光军周永灿杨慧蔡岩张晗谢珍玉王世锋李聪; 关键词：罗非鱼无乳链球菌拮抗菌

响应面法优化丹参中抗无乳链球菌活性成分的提取工艺被引量：3: 2014年; 在单因素提取工艺优化的基础上,选取液料比、浸润时间、提取时间和提取温度进行四因素三水平的Box-behnken实验设计,并结合响应面分析法进一步优化丹参中抗无乳链球菌(Streptococcus agalactiae,SA)活性成分提取工艺。优化所得最佳提取工艺为液料比37.8:1.0(ml:g)、浸润时间104 min、提取温度86.7℃、提取时间182 min。响应面模型预测在该提取工艺下抗SA活性成分提取得率极值为25.95%,经4次平行验证实验的实际提取得率为(25.87±0.03)%,为优化前的2.59倍,表明优化方法高效可靠。; 邓恒为郭伟良孙晓飞谢珍玉王世锋胡文婷周永灿; 关键词：无乳链球菌丹参响应面法

草鱼暴发性出血病病原分离、毒力基因检测与药敏分析被引量：7: 2016年; 从草鱼体内分离到致病菌株Jxsks1,该菌株对草鱼的LD50值为2.3×103CFU/g鱼体质量,为强致病菌;经生理生化、16S r DNA和gyr B基因序列测序鉴定为嗜水气单胞菌。ERIC-PCR分型结果表明,该菌株为迄今未见报道的类型。选取丝氨酸蛋白酶ahp、热稳定性肠毒素ast、气溶素aer A、热不稳定性肠毒素alt、鞭毛基因fla、脂酶lip等6种毒力基因特异性引物对该菌株进行PCR检测,结果表明其毒力基因型为aer A^+、alt^+、ast^+、ahp^+、lip^+、fla^-。选取28种抗生素进行药敏检测结果表明,该菌株对喹诺酮类、氨基糖苷类、四环素类、氯霉素、第二代和第三代头孢类等药物敏感,对硝基呋喃类、大环内酯类、多肽类中度敏感,对第一代头孢类、青霉素类、复方新诺明和洁霉素耐药。; 徐先栋付辉云饶毅盛银平王海华傅义龙李彩刚周永灿; 关键词：嗜水气单胞菌毒力因子

测定无乳链球菌灭活疫苗浓度的分光光度法: 2013年; 以无乳链球菌灭活疫苗为研究对象,利用分光光度计建立了快速准确测定该灭活疫苗浓度的方法.研究结果表明,波长为600 nm处无菌生理盐水及稀释后的无乳链球菌灭活疫苗均无特征吸收峰,吸光度变化平缓,此时无乳链球菌灭活疫苗的吸光值（X）与其浓度（Y）呈正相关（r =0.998 3,df=6,P＜0.01）,其关系曲线为：y=11.277x-2.022 9.无乳链球菌菌液经φ=0.4％甲醛灭活3h的A600值基本稳定;选择4名实验员对该方法进行重复检测,结果显示所测疫苗A600值的RSD为0.5％～1.2％,且符合上述相关性方程;说明利用分光光度计法测定经甲醛灭活的无乳链球菌疫苗浓度,其结果较准确、重复性较好,具有简单快速的特点.; 张晗周永灿赵光军蔡岩谢珍玉郭伟良王世锋; 关键词：无乳链球菌灭活疫苗分光光度法

海南罗非鱼致病性维氏气单胞菌分离鉴定及药敏特性研究被引量：27: 2015年; 2014年3—5月海南省罗非鱼主养区多个养殖场发生爆发性疾病,从患病尼罗罗非鱼不同组织中分离获得12株优势菌。经人工回归感染试验,从肝脏和脑中分离获得的HN-G-03和HN-B-02菌株具较强的致病力,HN-G-03和HN-B-02菌株对罗非鱼的的半致死密度分别为7.12×105cfu/尾和1.32×105cfu/尾。经16S rRNA和gyr B基因序列分析,同时结合细菌的形态学特征、生理生化特征,菌株HN-G-03和HN-B-02分别被鉴定为维氏气单胞菌的维氏生物型和温和生物型。体外药物药敏试验结果显示,两株菌均对左氧氟沙星、强力霉素、氟苯尼考、恩诺沙星、庆大霉素等5种药物高度敏感,对呋喃妥因等3种药物中度敏感,对青霉素等12种药物较强耐药。; 李聪蔡岩周永灿袁卫曹可刘海天谢珍玉郭伟良王世锋; 关键词：罗非鱼维氏气单胞菌 RRNA B基因药物敏感性

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海南省重点科技计划项目(ZDXM20120005)

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