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极端嗜盐古生菌启动子序列缺失突变的微量热研究被引量：9: 2006年; 用微量热方法和DNA缺失突变技术研究了来源于极端嗜盐古生菌R1上的一个推测的启动子片段(RM10)在大肠杆菌中的启动子功能.启动子片段融合到质粒pKK232-8上无启动子的氯霉素乙酰转移酶(CAT)基因前来检测它驱动基因表达的能力,缺失分析RM10启动子片段定位具有启动活性的重要功能区.实验结果从热动力学角度揭示,这个启动子片段上含有-35区和-10区特征的1382～1517bp(碱基对)区段是它在大肠杆菌中具有启动子功能的关键部分;在1～1382bp区段或1571～1848bp区段上还存在它的负调控区.该研究为基因启动子功能研究提供了一种新的、更加灵敏便捷的、化学与生物学相结合的方法.; 朱建裕刘义胡岳华曾驰张立侠崔长征黄玉屏沈萍; 关键词：微量热嗜盐古菌缺失突变启动子

极端嗜盐古菌分子遗传与生理代谢研究: 古菌是与细菌及真核生物并列的生命的第三种形式。古菌大多生活在极端环境,既具有原核生物相对简单的细胞组织及代谢特征,又具有与真核生物类似的遗传机器及调控机制, 为理解生命的基本特征及其环境适应机制提供了具有鲜明特色的研究体...; 向华; 文献传递

嗜盐菌素HalC8基因簇克隆与分析被引量：1: 2006年; 采用基因组部分文库及锚定PCR技术,克隆了嗜盐菌素HalC8编码基因及其上下游可能的相关基因共约9.3kb的DNA序列。序列分析表明已知序列至少含有6个ORF,包括上游编码跨膜蛋白的halU基因、编码可能的调节蛋白的halR基因,编码嗜盐菌素HalC8及其免疫蛋白HalⅠ的proC8基因、以及位于proC8基因下游的编码可能的转运蛋白的halT1,halT2和halT3基因。这是国际上首次对嗜盐菌素基因簇可能的相关基因的克隆。; 梅双双厉云陆秋鹤向华; 关键词：基因克隆基因功能

Ssh10b2与其同源蛋白Ssh10b在细胞含量及固定DNA超螺旋的能力上存在明显差异: 2006年; 极端嗜热古菌———芝田硫化叶菌(Sulfolobus shibatae)基因组含一对亲缘关系较远的同源基因,ssh10b和ssh10b2。这对同源基因编码的蛋白(Ssh10b和Ssh10b2)属于古菌Sac10b DNA结合蛋白家族。关于Ssh10b以及与其极为相似的硫矿硫化叶菌(S.solfataricus)Sso10b、嗜酸热硫化叶菌(S.acidocaldarius)Sac10b蛋白已有较多研究,推测这些蛋白可能在染色体组织和包装、DNA重组、基因表达调控等方面起作用。克隆并在大肠杆菌中表达了ssh10b2基因,纯化了重组Ssh10b2蛋白。免疫印迹定量分析表明,ssh10b2在芝田硫化叶菌中有表达,但其细胞含量仅相当于Ssh10b的约十分之一。重组Ssh10b2对双链DNA的亲和力低于Ssh10b。此外,Ssh10b2和Ssh10b在与双链DNA结合时表现出相似的凝胶阻滞模式。有意思的是,Ssh10b2固定DNA负超螺旋的能力明显低于Ssh10b。这些结果提示,Ssh10b和Ssh10b2可能具有不同的生理作用。; 郭荣薛宏霍笑风徐冬一胡晋川黄力; 关键词：极端嗜热古菌芝田硫化叶菌

重组质粒对大肠杆菌HB101生长影响的微量热研究被引量：11: 2005年; 用微量热方法研究了嗜麦芽假单胞菌AT18,受体菌大肠杆菌HB101,mel基因工程菌——大肠杆菌HB101/pWSY8和携带克隆载体pUC18质粒的大肠杆菌HB101等的生长代谢过程.实验结果从热化学和热动力学上阐明了细菌的生长速率常数与其所含质粒的大小呈负相关.探讨了低温处理对含不同质粒大肠杆菌生长的影响,发现低温处理对工程菌生长影响最大.; 刘义王戈林赵儒铭沈萍屈松生; 关键词：HB 重组质粒 UC 克隆载体工程菌微量热

嗜盐古菌R1中与真核同源基因rad25启动子的序列分析和启动活性研究: 2006年; 在盐生盐杆菌(Halobacterium halobium)R1中分析了真核同源基因rad25的转录,分析了rad25同源基因启动子片段的序列特征,用β_半乳糖苷酶基因(bgaH)为报告基因,利用启动子探针检测技术验证了rad25同源基因启动子片段在嗜盐古生菌WFD11中的启动功能;缺失分析进一步确认了rad25同源基因启动子具有嗜盐古菌启动子典型特征。从启动子和转录水平上证明盐生盐杆菌R1中真核同源基因rad25存在生物学功能,推测其可能在核苷酸切除修复(NER)起作用。; 朱建裕胡岳华柳婧黄玉屏沈萍; 关键词：嗜盐古菌启动子

嗜盐古菌启动子DNA片段的功能检测被引量：1: 2006年; 将来源于嗜盐古菌染色体DNA的启动子片段RM07或RM13插入到启动子探针载体pYLZ_2的报告基因lacZ之前,通过β_半乳糖苷酶酶活性的检测,进一步确证RM07和RM13片段在大肠杆菌(Escherichia coli)中的启动功能。同时用微量热技术检测了大肠杆菌DH5α及其重组菌株在LB培养基中37℃生长过程的热输出功率。T2(pYLZ_2)、TE07(pYL726)、TE07_2(pYL702)、TE131(pYL131)和TE132(pYL132)菌株的生长速率分别比大肠杆菌DH5α降低了6.5%、11%4、1.1%4、7.5%和42.7%。当启动子启动了基因表达时,菌株的生长速率显著降低,热力学参数与酶活性检测结果有较好的一致性。微量热结果表明基因的表达比质粒DNA的复制过程需要消耗更多的能量,对细菌的生理代谢有较大改变。微量热技术为检测基因的表达和转录调控提供了新的方法和思路。; 黄玉屏刘鹏刘义沈韫芬沈萍; 关键词：启动子 Β-半乳糖苷酶基因嗜盐古菌

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国家重点基础研究发展计划(2004CB719603)