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嗜碱菌Alkalimonas amylolytica N10在不同pH条件下的膜蛋白差异表达研究被引量：3: 2006年; 为了探讨嗜碱菌的嗜碱机制，对一株新型专性嗜碱菌（Alkalimonas amylolytico N10）在不同pH条件下的差异膜蛋白质组进行了初步的研究。在3种pH条件下（pH值分别为8．4、9．4和10．4）培养的该菌的膜蛋白，通过8％-20％的梯度SDS—PAGE进行分离。经胶图图像和统计计算，7条电泳条带的相对染色强度随培养液的pH值变化而改变，其中仅有一条条带强度随pH值增高而增加。这些条带经胰蛋白酶胶内消化和高效液相色谱-电喷雾离子阱串联质谱（LC—Ms／Ms）分析，共鉴定出了12种蛋白质。其中4种膜蛋白已有报道直接或间接参与细胞pH稳态的保持，其他几种蛋白则是首次发现其表达水平与生活环境的pH变化可能相关。; 王全会王敬强钱忠刘斯奇马延和; 关键词：嗜碱菌 N10 膜蛋白 LC-MS/MS

腾冲嗜热厌氧菌热休克蛋白60及其基因表达的热激动态变化分析被引量：3: 2006年; 热休克蛋白60(HSP60)是细菌体内一种非常重要的分子伴侣,其可以协助蛋白质或肽链的正确折叠和构型,防止变性和降解。基于本实验室的早期观察,腾冲嗜热厌氧菌的HSP60是一个典型的温度相关蛋白质,在80℃的表达水平最高。为了进一步了解嗜热菌应急的分子机制,继续进行了在热激后HSP60基因表达的动态研究。将最适温度(75℃)下培养的腾冲嗜热厌氧菌迅速地转移至80℃继续培养,然后在不同的时间点上分别取样,并通过双向电泳、Western blot和Real_time PCR等方法,分析了HSP60在mRNA和蛋白质水平上的表达量的改变。试验结果表明,在80℃热处理4h内的短期应急过程中,HSP60蛋白水平一直呈上升趋势,而它的mRNA水平则表现为先升高后下降的一个非对称性的峰形变化。HSP60的mRNA和蛋白质的对温度的应答快慢程度是不同的。HSP60的mRNA水平的显著变化在1h内便可观察到,而蛋白质水平的显著改变要延迟3h左右。此外,HSP60的mRNA和蛋白质对温度的应答量变大小也是不同的。; 孟博王敬强李娜马延和刘斯奇; 关键词：热休克蛋白60 腾冲嗜热厌氧菌嗜热菌

腾冲嗜热厌氧菌葡萄糖激酶在不同温度下的表达和催化活性被引量：1: 2006年; 尽管在腾冲嗜热厌氧菌的基因组注释中缺乏葡萄糖激酶(Glucokinase,GLK)(EC 2.7.1.2),但是该菌的蛋白质表达谱分析表明,TTE0090可能是一种新型的葡萄糖激酶。利用体外克隆表达的方法,表达了重组TTE0090;此蛋白质不仅具备使葡萄糖磷酸化的催化活性,同时在高温下也能参与反应。采用Western blot和阴离子交换层析的方法进一步检验了TTE0090在腾冲嗜热厌氧菌体内的蛋白质表达及其催化活性,发现体内TTE0090蛋白表达量随温度的升高而降低,而酶比活力却与生长温度呈正相关。这可能预示不同温度下腾冲嗜热厌氧菌中的糖酵解途径的催化通量是相对恒定的。实验数据均表明,TTE0090是存在于腾冲嗜热厌氧菌中的一种新型的葡萄糖激酶。TTE0090基因和其蛋白产物的研究工作,将进一步加深人们对嗜热菌的温度适应性以及它们的生存机理的了解。; 钱忠王敬强周传奇马延和刘斯奇; 关键词：腾冲嗜热厌氧菌葡萄糖激酶温度糖酵解

腾冲嗜热厌氧菌6-磷酸果糖激酶的克隆、表达及其生物活性被引量：1: 2006年; 6_磷酸果糖激酶(PFK)是糖酵解途径一个关键酶。基于腾冲嗜热厌氧菌基因组中的注释,基因TTE1816可能是PFK的一种,但是,它是否确有生物活性还必须有实验数据的支持。腾冲嗜热厌氧菌在最适温度培养后,提取细菌全蛋白,并采用双向电泳将可溶性蛋白质分离,然后运用质谱鉴定若干染色斑点。实验表明,TTE1816在高温条件下能够表达蛋白质。将TTE1816基因体外克隆至细菌表达载体,并在BL_21大肠杆菌中表达为可溶性蛋白。酶动力学实验表明,重组蛋白TTE1816具有PFK的催化活性,最适反应温度在60℃。它还能够催化葡萄糖、果糖、甘露糖和6_磷酸葡萄糖的磷酸化反应。另外,在高底物浓度和酶浓度的条件下,TTE1816还表现果糖二磷酸酶的特性。结果证明,TTE1816是腾冲嗜热厌氧菌中PFK家族的一个新成员。; 周传奇王敬强钱忠马延和刘斯奇; 关键词：腾冲嗜热厌氧菌嗜热菌糖酵解

发酵液中透明质酸含量测定方法的比较研究被引量：11: 2006年; 比较了Bitter-Muir法和CTAB浊度法用于测定透明质酸质量浓度的准确度和精确度,发现在没有杂质的情况下,二者都适用于透明质酸浓度的测定.研究了葡萄糖、蛋白质、无机盐和酵母膏等发酵液成分对2种测量方法的影响,结果表明,这些物质对Bitter-Muir法存在较大影响,而对CTAB浊度法的干扰较小.CTAB浊度法的操作简便快捷,发酵液无需预处理即可直接测定.; 刘屹然陈林海李宗伟王雁萍杨天佑谈重芳和朝军秦广雍霍裕平; 关键词：透明质酸发酵液

代谢组学研究进展被引量：134: 2007年; 代谢组学是功能基因组学和系统生物学研究不可或缺的重要组成部分,是通过考察生物体系受刺激或扰动前后(如将某个特定的基因变异或环境变化后)代谢产物的动态变化,研究生物体系的代谢网络的一种技术。近年来,在药物研发、疾病研究、植物和微生物等领域发展迅速,但在分析技术、方法学和应用等方面急需突破。; 许国旺路鑫杨胜利; 关键词：代谢组学质谱系统生物学

生物催化生成对苯二甲酸微生物协同作用的代谢途径分析被引量：3: 2008年; 建立了对苯二甲酸、对甲基苯甲醛、对甲基苯甲醇、对甲基苯甲酸的高效液相色谱分析方法。采用HypersilSAX阴离子交换柱,流动相为2.5mol/LNH4H2PO4(含10%乙腈),pH4.32,流速0.8mL/min,柱温30℃,紫外检测波长为254nm。在此色谱条件下,各组分在7min内得到很好地分离,回收率符合测定要求。运用本方法测定了睾丸酮丛毛单胞菌和嗜麦芽窄食单胞菌生物催化生成对苯二甲酸不同发酵时间发酵液中主要代谢物含量。同时,采用GC-MS方法检测了有机酸、氨基酸、糖及长链脂肪酸等胞内代谢物,结合HPLC和GC-MS检测结果,分析了嗜麦芽窄食单胞菌和睾丸酮丛毛单胞菌协同作用催化对二甲苯生成对苯二甲酸的代谢途径。; 桑萍田晶高鹏许国旺; 关键词：对苯二甲酸高效液相色谱生物催化睾丸酮丛毛单胞菌嗜麦芽窄食单胞菌

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国家重点基础研究发展计划(2004CB719605)