广东省科技计划工业攻关项目(2005207007)
- 作品数：6 被引量：50H指数：4
- 相关作者：赵海金李文军蔡绍曦佟万成付亮更多>>
- 相关机构：南方医科大学南方医院南方医科大学更多>>
- 发文基金：广东省科技计划工业攻关项目中华医学会临床医学慢性呼吸道疾病科研专项资金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 甲苯二异氰酸盐对人支气管上皮细胞血管内皮生长因子表达的影响被引量：4
- 2008年
- 目的探讨甲苯二异氰酸盐(TDI)对正常人支气管上皮细胞(HBE)血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响。方法应用改良的Son氏等方法制备TDI-人血清白蛋白(TDI-HSA)。四唑盐(MTT)比色法检测不同浓度的TDI-HSA和HSA对正常人支气管上皮细胞株HBE135-E6E7活力的影响;分别用浓度为10、20、30、40μg/ml的HSA和TDI-HSA处理HBE135-E6E7,以未加任何处理因素的HBE135-E6E7为对照组,用半定量RT-PCR同时扩增各组HBE135-E6E7VEGF和β-actin基因片段,从基因水平上比较各组VEGF的相对表达情况。结果40μg/ml以下浓度的HSA和TDI-HSA不影响HBE135-E6E7活力;HBE135-E6E7组成性表达VEGF189和VEGF165;与10μg/mlHSA组以及对照组相比,10μg/mlTDI-HSA组HBE135-E6E7 VEGF189和VEGF165的表达增加,但无显著差异(P>0.05),20、30、40μg/ml的TDI-HSA组与相应浓度的HSA组以及对照组相比,HBE135-E6E7 VEGF189和VEGF165的表达均显著增加(P<0.05),且随着TDI-HSA浓度的增加,HBE135-E6E7 VEGF189和VEGF165的表达亦随之增加(P<0.05)。结论TDI显著增加HBE VEGF表达,这可能是TDI诱发哮喘的发病机制之一。
- 彭红娟蔡绍曦赵海金李文军佟万成
- 关键词：哮喘血管内皮生长因子血清白蛋白人支气管上皮细胞
- 呼吸道合胞病毒增加小鼠肺组织的高迁移率族蛋白B1的表达和释放被引量：9
- 2010年
- 探讨呼吸道合胞病毒(RSV)感染小鼠模型肺组织高迁移率族蛋白B1(HMGB1)的表达和释放。方法18只Balb/C小鼠,随机分成3组,分别为磷酸盐缓冲液(PBS)对照组、RSV组、RSV+利巴韦林治疗组;RSV感染小鼠7d后处理:支气管肺泡灌洗液(BALF)作细胞分类计数,酶联免疫吸附试验(ELISA)测定BALF上清中白细胞介素-4(IL-4)、干扰素-γ(IFN-γ)及HMGB1含量,左肺行苏木精-伊红(HE)染色,蛋白免疫印迹方法检测右肺组织HMGB1表达。结果1、RSV感染诱导了小鼠肺组织TH1型反应:BALF中的IFN-γ含量增加,IL-4含量减低。与对照组比较,RSV组BALF中细胞总数、中性粒细胞、巨噬细胞均显著增加(P<0.05),RSV+利巴韦林治疗组上述细胞数显著减低(P<0.05)。HE染色:RSV组可见黏膜下及管壁周围中性粒细胞,淋巴细胞等炎症细胞浸润。2、BALF中HMGB1含量变化:与对照组比较,RSV组显著升高(P<0.05)、利巴韦林治疗组显著降低(与RSV组比较,P<0.05)。3、肺组织HMGB1的表达情况:与对照组比较,RSV组明显升高(P<0.05)、治疗组无显著降低(与RSV组比较,P>0.05)。结论HMGB1在RSV感染小鼠的肺组织中表达和释放明显增加,提示其可能参与了RSV感染相关肺疾病的发生发展。
- 侯长春赵海金蔡绍曦李文军佟万成刘来昱
- 关键词：呼吸道合胞病毒利巴韦林小鼠
- N-乙酰半胱氨酸对哮喘小鼠肺组织HMGB1、RAGE表达的影响被引量：18
- 2008年
- 目的检测高迁移率族蛋白B1(HMGB1)及晚期糖基化终产物受体在小鼠哮喘模型肺组织表达及分布,以及N-乙酰半胱氨酸(NAC)对其影响。方法SPF级雌性BALB/c小鼠随机分为对照组、哮喘组及哮喘+NAC处理组,每组7只。建立哮喘模型,用RT-PCR法检测肺组织HMGB1及晚期糖基化终产物mRNA表达水平,免疫组化法检测两者在肺组织的分布。结果HMGB1mRNA表达在3组中分别为0.88±0.02,0.86±0.05,0.98±0.05;晚期糖基化终产物mRNA表达在3组中分别为1.20±0.20,1.21±0.08,1.58±0.21。相对于对照组,哮喘组的HMGB1和晚期糖基化终产物表达未发生显著性改变(P>0.05);相对于对照组和哮喘组,两者在NAC组表达均显著增加,具有统计学意义(P<0.05)。免疫组化染色可见HMGB1主要分布于支气管及肺泡上皮细胞,在细胞核、胞浆及胞膜均可见。晚期糖基化终产物主要分布于肺泡上皮,表达于胞膜上。结论HMGB1及其受体晚期糖基化终产物介导的信号转导通路可能参与哮喘气道氧化应激,但其确切的调控机制及在哮喘中的作用尚待深入研究。
- 付亮蔡绍曦赵海金李文军佟万成
- 关键词：哮喘高迁移率族蛋白B1晚期糖基化终产物N-乙酰半胱氨酸
- 文化程度对支气管哮喘患者自我评估及控制水平的影响被引量：12
- 2008年
- 目的探讨文化程度对支气管哮喘患者自我评估及控制的影响。方法研究对象为门诊初次诊断为哮喘的患者75例,以患者文化程度分为两组,包括初中及以下文化程度组(A组)46例和高中及以上文化程度组(B组)29例。所有哮喘患者支气管舒张试验阳性。控制药物均为沙美特罗联合丙酸氟替卡松干粉剂(SM/FP)。按照全球哮喘防治推荐方案降阶梯治疗。在治疗第8、12及24周进行哮喘控制测试(ACT)评分和最大呼气流速日内变异率检测。根据病人对ACT问题的回答、体征及肺功能检测结果判断患者是否存在高估控制水平的情况。ACT评分>19分认为已达良好控制。分析文化程度在不同治疗时期自我评估情况及控制水平的影响。结果两组在肺功能等基础水平无显著差异。经过8周治疗,A组中ACT评分>19为29例,其中11例存在高估控制水平,占24%,实际哮喘控制率为39.1%。B组中ACT评分>19为17例,其中4例存在高估控制水平,实际哮喘控制率44.8%。两组实际哮喘控制率无显著差异(P>0.05),自我哮喘评估也无显著差异(P>0.05)。经过12周治疗,A组中ACT评分>19为37例,其中17例存在高估控制水平,占该组的37.0%,实际哮喘控制率为43.6%。B组中ACT评分>19分的为22例,其中4例存在高估控制水平,占该组的13.8%,实际哮喘控制率为62.0%。两组实际哮喘控制率无显著差异(P>0.05),但A组高估控制水平显著多于B组(P<0.05)。经过24周治疗,A组中ACT评分>19分的为42例,其中19例存在高估控制水平,占该组的38.7%,实际哮喘控制率50.0%。B组中ACT评分>19分的为26例,其中5例存在高估控制水平,实际哮喘控制率为72.4%。B组实际哮喘控制率显著高于A组(P<0.05)。A组高估控制水平显著多于A组(P<0.05)。结论文化程度可能是影响病人病情评估和哮喘控制水平的重要因素,但在治疗期间不同时期并不完全一致。
- 赵海金蔡绍曦佟万成李文军付亮
- 关键词：哮喘哮喘控制测试降阶梯治疗文化程度
- 甲苯二异氰酸盐对人支气管上皮细胞通透性的影响被引量：3
- 2011年
- 目的探讨甲苯二异氰酸盐(TDI)对正常人支气管上皮细胞(16HBE)活性氧(ROS)生成及通透性的影响。方法应用改良的Son氏等方法制备TDI-人血清白蛋白(TDI-HSA)。四唑盐(MTT)比色法检测不同浓度的TDI-HSA对正常人支气管上皮细胞株16HBE活力的影响。实验分4组:以未加任何处理因素的16HBE为对照组,20、60、100μg/ml的TDI-HSA处理16HBE 24 h,通过2',7'-二氢二氯荧光黄双乙酸钠(DCFH-DA)细胞内ROS荧光染色,收集细胞后以流式细胞仪检测荧光强度。选择对ROS水平影响较大的100μg/ml的TDI-HSA处理16HBE 24 h。流式细胞仪定量检测抗氧化剂N-乙酰半胱氨酸(NAC)对TDI-HSA诱导ROS生成的影响,荧光显微镜观察照相。采用跨上皮电阻(TEER)法检测上皮单层细胞的通透性。结果 120μg/ml以下浓度的TDI-HSA对细胞活力无显著影响。ROS水平在对照组、20、60和100μg/ml组分别为:65.04±4.56,91.76±4.84,119.96±10.40,203.11±8.21。100μg/ml TDI-HSA组与对照组及20、60μg/ml组相比,16HBE的ROS水平显著升高(P<0.05)。对照组、100μg/ml TDI-HSA处理组、50 mmol/L NAC预处理组的细胞内ROS水平分别为:69.02±2.14,246.47±18.55,102.50±4.60;而TEER分别为:280.75±11.93,92.25±11.44,207.25±7.41。NAC可显著降低TDI-HSA诱导的ROS生成(P<0.05),改善氧化应激对单层细胞通透性的影响(P<0.05)。结论 TDI显著增加HBEROS的产生,其诱导的氧化应激部分参与支气管上皮细胞通透性的增加。这可能是TDI诱发哮喘的发病机制之一。
- 莫冠文蔡绍曦赵海金李文军佟万成刘来昱
- 关键词：活性氧氧化应激血清白蛋白N-乙酰半胱氨酸人支气管上皮细胞细胞通透性
- 过氧化氢PI3K依赖性促进人支气管上皮细胞血管内皮生长因子表达被引量：6
- 2010年
- 目的探讨过氧化氢(H2O2)对人支气管上皮细胞(HBE)VEGF表达的影响及可能的分子调控机制。方法四唑盐(MTT)比色法检测不同H2O2浓度对正常人支气管上皮细胞株HBE135-E6E7活力的影响;实验分4组:正常组,50μmol/L、200μmol/L和600μmol/L,分别处理HBE24h,RT-PCR检测VEGF及β-actin基因表达水平;选择基因表达水平影响较大的50μmol/LH2O2处理细胞24h,双抗体夹心酶联免疫吸附测定(ELISA)检测磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)选择性抑制剂Ly294002对H2O2诱导VEGF表达的影响。结果在200μmol/L以下H2O2对细胞活力无显著影响。HBE135-E6E7组成性表达VEGF189和VEGF165。VEGF165 mRNA表达在正常组,50、200和600μmol/L分别为0.379±0.044,0.791±0.042,0.585±0.133,0.720±0.0213VEGF189 mRNA表达在4组中分别为:0.193±0.018,0.270±0.012,0.205±0.074,0.302±0.035。相对于对照组,VEGF165、VEGF189在50μmol/L H2O2处理组即可显著升高VEGF表达(P<0.05),但并无浓度依赖性增加。ELISA结果显示:正常组、50μmol/L H2O2处理组和PI3K预处理上清VEGF浓度分别为:(591.5±9.5)、(768.9±21.3)、(489.3±10.9)pg/ml。H2O2处理组显著升高VEGF表达,而Ly294002可显著降低H2O2诱导的VEGF表达(P<0.05),甚至比正常水平更低(P<0.05)。结论氧化应激可以PI3K通路依赖性地增加HBEVEGF表达,这可能是哮喘慢性气道炎症产生和维持的分子机制之一。
- 沈湘波赵海金蔡绍曦彭红娟李文军佟万成
- 关键词：氧化应激血管内皮生长因子人支气管上皮细胞PI3K
