国家自然科学基金(30470883)
- 作品数：13 被引量：61H指数：6
- 相关作者：谭玉珍王海杰王新艳国海东张贵焘更多>>
- 相关机构：复旦大学上海医学院复旦大学宜春学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家教育部博士点基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- Smad信号通路在骨髓源性心肌干细胞向心肌分化中的作用被引量：12
- 2006年
- 目的研究Smad信号通路在BMP_2诱导的骨髓源性心肌干细胞(MCSCs)向心肌分化中的作用,探讨MCSCs向心肌分化的信号转导机制。方法从SD大鼠骨髓中筛选MCSCs,用骨形态发生蛋白-2(BMP_2)诱导向心肌定向分化。Westernblotting和免疫细胞化学法检测诱导后细胞内磷酸化的Smadl/5/8的表达及其随诱导时间在细胞内分布的变化。RT_PCR检测诱导前后细胞内GATA_4和心肌特异性肌钙蛋白T(cTnT)mRNA的表达。结果BMP_2诱导后15min,细胞内可检测到磷酸化的Smadl/5/8的表达,30min^1h表达明显增加,1h后开始降低,4h呈低表达。BMP_2诱导后15min,磷酸化的Smadl/5/8仅见于胞质中,30min胞质和胞核均见表达,1h主要在胞核内表达。BMP_2诱导后2周,细胞明显表达GATA_4和cTnTmRNA。诱导后4周细胞呈现成熟心肌细胞样形态。用SB203580抑制Smad信号后,GATA_4和cTnTmRNA的表达显著降低,细胞形态变化不明显。结论Smad信号通路在BMP_2诱导MCSCs向心肌分化中发挥重要的介导作用。
- 王新艳谭玉珍王海杰张贵焘贺其志
- 关键词：SMAD信号通路骨形态发生蛋白-2骨髓源性心肌干细胞GATA-4WESTEMBLOTTING
- 生后不同时间乳鼠心肌细胞的形态结构和功能特征被引量：1
- 2009年
- 目的观察生后不同时间乳鼠心肌细胞的形态结构和功能特征,建立理想的分离和纯化乳鼠心肌细胞技术。方法采用胰蛋白酶消化和机械分离,结合两次差速贴壁法以及使用溴脱氧尿嘧啶核苷（BrdU）,从生后1~7d乳鼠心脏分离和纯化心肌细胞。观察细胞的形态和自发性搏动,并用心肌特异性肌钙蛋白丁（cTnT）免疫细胞化学染色进行鉴定。利用原位透射电镜术观察细胞超微结构,并观察其对肾上腺素和异丙肾上腺素的反应。结果从乳鼠心脏分离的细胞95%以上为心肌细胞,存活率为95%以上。乳鼠心肌细胞包括短柱状或杆状细胞和不规则形细胞。生后1~3d鼠大部分杆状细胞呈现幼稚心肌细胞的超微结构特征。6~7d鼠的杆状细胞具有类似于成熟心肌细胞的超微结构特征,cTnT呈高表达,横纹明显。不规则形细胞含有少量肌丝束,排列不规则。少数体积较小的细胞呈现未分化细胞的超微结构特征。培养72h后80%以上的细胞出现自发性搏动。肾上腺素和异丙肾上腺素刺激后,搏动细胞数目增多,搏动增强。生后6~7d鼠杆状细胞的药物反应较强。结论两类心肌细胞的超微结构特征、自发性搏动和对肾上腺素和异丙肾上腺素的反应不同。生后6~7d鼠心肌细胞较适合于成熟心肌细胞的体外实验研究。本实验建立...
- 谭玉珍王海杰
- 关键词：心肌细胞超微结构自发性搏动免疫细胞化学染色乳鼠
- 不同年龄大鼠骨髓源性心肌干细胞生物学特性的比较
- 2009年
- 目的研究不同年龄大鼠骨髓源性心肌干细胞（MCSCs）形态和衰老相关指标的差异,探讨年龄因素对MCSCs增殖、存活和向心肌细胞分化的影响。方法利用单细胞克隆培养技术从幼年、成年和老年雄性SD大鼠骨髓中筛选MCSCs,透射电镜下观察细胞超微结构改变。SA-β-半乳糖苷酶染色和活性氧（ROS）染色检测细胞衰老变化,流式细胞术分析细胞周期分布。Annexin V/PI双标流式细胞术和Hochest33342染色检测细胞存活和凋亡。用骨形态发生蛋白-2（BMP-2）诱导不同年龄组MCSCs向心肌细胞分化,通过RT-PCR检测诱导后心肌早期转录因子和心肌特异基因的表达,并通过免疫细胞化学染色检测各年龄组细胞经（BMP-2）诱导后细胞内心肌特异性肌钙蛋T（cTnT）表达的变化。结果老年组MCSCs核质比减小,胞质内可见髓样小体。随着年龄增长,处于增殖期的MCSCs比例下降,β-半乳糖苷酶和ROS阳性细胞数目增多。老年组存活细胞比例较幼年组降低。用BMP-2诱导后4周,幼年组细胞的Nkx2.5、GATA-4和cTnT、Cx-43 mRNA表达明显,成年组和老年组细胞表达低于幼年组,差异有显著性意义。免疫细胞化学染色显示,BM...
- 王存谭玉珍王海杰国海东张大勇崔晓军
- 关键词：骨髓源性心肌干细胞骨形态发生蛋白-2细胞分化Β-半乳糖苷酶流式细胞术
- 自噬与心肌衰老及心血管疾病关系的研究进展被引量：6
- 2009年
- 吴快英王海杰谭玉珍
- 关键词：自噬作用心肌细胞衰老心血管疾病
- 促进移植干细胞存活、分化和修复坏死心肌的策略被引量：6
- 2009年
- 移植干细胞在缺血心肌微环境中的低存活率是影响干细胞移植治疗效果的关键。通过采取干预措施即利用细胞因子、药物、化合物等对移植干细胞进行体外预处理,或采用有利于干细胞存活、黏附或促进血管形成的基因对干细胞进行修饰,可直接和间接地提高干细胞在缺血心肌微环境中的存活和分化能力,从而有助于促进移植干细胞修复坏死心肌和改善心功能。
- 崔晓军谭玉珍王海杰
- 关键词：存活分化细胞移植心肌修复
- 骨髓源性心肌干细胞移植治疗心肌梗死的实验研究被引量：15
- 2007年
- 目的研究骨髓源性心肌干细胞(MCSC)移植对心肌梗死的治疗作用。方法通过单细胞克隆培养技术从雄性 SD 大鼠骨髓间充质干细胞(MMSC)中筛选 MCSC。结扎雌性 SD 大鼠的左冠状动脉前降支,建立心肌梗死模型,1周后于梗死区边缘移植 MMSC 和 MCSC。移植后4周,用超声心动图检测心功能变化。取心肌组织作冷冻切片,用 HE 和 Masson 染色法显示瘢痕区的组织结构变化,通过免疫组织化学染色标记血管内皮牛长因子受体-1阳性(VEGFR-1^+)微血管,用图像分析系统测量瘢痕而积和微血管密度。利用原位荧光杂交标记含有 Y 染色体的 MCSC,并检测心肌特异性肌钙蛋白 T(cTnT)的表达。结果筛选的 MCSC 表达 c-kit,心肌早期转录因子 Nkx2.5呈低表达。细胞移植后4周,MCSC 移植组的左室短轴缩短分数(62.9%±2.2%)和左室射血分数(32.8%±1.1%)高于 MMSC 移植组(分别为55.7%±1.6%和28.2%±1.6%)和对照组(分别为42.4%±2.1%和23.6%±1.2%);MCSC 组心肌梗死面积比率(8.7%±0.7%)低于 MMSC 组(12.0%±1.1%)和对照组(16.8%±0.9%)。含有 Y 染色体的 MCSC 表达 cTnT,与受体心肌相续。MCSC 移植组的梗死区周围微血管密度[(101.8±6.2)条/mm^2]大于对照组[(68.4±4.9)条/mm^2],与 MMSC 组[(97.2±3.2)条/mm^2]比较,差异无统计学意义。结论移植入心肌梗死模型的 MCSC 能够分化为功能性心肌,明显改善心功能,并诱导血管新生。MCSC 的移植治疗效果优于 MMSC。
- 张贵焘谭玉珍王海杰敖红国海东黄国英
- 关键词：心肌梗塞干细胞骨髓
- 生物材料在干细胞移植治疗心肌梗死中的应用被引量：1
- 2009年
- 生物材料是一类具有特殊功能的、用于机体组织修复和再生的材料。目前，生物材料在干细胞培养和移植方面受到广泛关注。生物材料既可作为干细胞的支架，也可以作为移植干细胞临时的黏附基质。一种理想的生物材料应当模拟细胞外基质，它必须能够维持细胞的生长，并有利于细胞的存活和分化，在新生组织形成过程中逐渐降解。
- 国海东谭玉珍王海杰
- 关键词：移植干细胞生物材料心肌梗死细胞外基质
- PI3-K/Akt信号通路对骨髓源性心肌干细胞分化的调控作用被引量：14
- 2008年
- 目的研究磷脂酰肌醇-3激酶/丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶（PI3-K/Akt）信号通路在骨形态发生蛋白-2（BMP-2）诱导骨髓源性心肌干细胞（MCSCs）向心肌细胞分化中的调控作用,探讨MCSCs向心肌细胞分化的信号转导机制。方法利用单克隆培养技术从SD大鼠骨髓中筛选MCSCs,用BMP-2诱导其向心肌细胞定向分化,通过免疫细胞化学标记和Western blotting检测BMP-2诱导后细胞内p-Akt水平的变化,并通过RT-PCR检测心肌早期转录因子和心肌特异基因的表达。结果BMP-2诱导前MCSCs内p-Akt水平较低,诱导后渐增强,20~30min达高峰,1h后逐渐降低。用PI3-K抑制剂Ly294002预处理细胞后,p-Akt水平明显降低。RT-PCR检测显示,诱导前MCSCs的Nkx2.5和GATA-4呈低表达,诱导后2周表达增强,4周表达更加明显。cTnT和Cx-43 mRNA在诱导前未见表达,诱导后2周表达明显,4周表达增强。用Ly294002处理后,细胞的Nkx2.5、GATA-4和cTnT、Cx-43 mRNA的表达显著降低,细胞形态变化不明显。结论BMP-2能诱导MCSCs向心肌细胞分化,PI3-K/Akt信号通路在BMP-2诱导MCSCs向心肌细胞分化中发挥重要的调控作用。
- 国海东张贵焘王海杰王新艳谭玉珍
- 关键词：磷脂酰肌醇-3激酶骨髓源性心肌干细胞骨形态发生蛋白-2细胞分化
- 骨形态发生蛋白-2诱导心肌干细胞定向分化的信号转导机制被引量：5
- 2005年
- 骨形态发生蛋白-2(BMP-2)对心肌干细胞(CSCs)的分化起重要作用,其信号通过受体激活并经Smads、p38MAPK和P1-3K等3条信号通路转导,调节多种心肌转录因子的表达,进而诱导CSCs的终末分化。细胞内的BMP-2信号途径与其它信号途径形成网络,调控机制精密而复杂。明确BMP-2在CSCs向心肌分化中的信号转导机制,将为临床应用CSCs治疗心肌梗塞等疾病提供理论基础。
- 王新艳谭玉珍
- 关键词：骨形态发生蛋白-2心肌干细胞信号转导
- 微环境对心肌干细胞动员和分化的影响被引量：2
- 2007年
- 在成体心脏和骨髓中存在多能性心肌干细胞（cardiac stemcell，CSC）。当心肌发生缺血坏死时，心肌局部微环境发生改变，在粒细胞集落刺激因子、基质细胞衍生因子、骨形态发生蛋白-2和胰岛素样生长因子-Ⅰ等各类因子的作用下，CSC可被动员至心肌缺血区，向心肌细胞、内皮细胞等定向分化，从而修复缺血坏死的心肌。因此，尝试改善心肌局部微环境对于CSC动员或移植治疗缺血性心脏病将具有重要意义。
- 张贵焘谭玉珍王海杰
- 关键词：心肌干细胞微环境心脏
