国家自然科学基金(39270314)
- 作品数：7 被引量：15H指数：3
- 相关作者：李卓娅龚非力姜晓丹徐勇冯玮更多>>
- 相关机构：华中科技大学同济医科大学北京医科大学更多>>
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- 相关领域：医药卫生更多>>
- PKA对跨膜型与分泌型TNF-α诱导中性粒细胞功能的影响
- 2002年
- 为研究 PKA (蛋白激酶 A)对跨膜型 TNF- α(TM- TNF- α)与分泌型 TNF- α(S- TNF- α)诱导中性粒细胞呼吸爆发的影响 ,采用放免法及化学发光法观察两型 TNF- α及联合应用腺苷酸环化酶激活剂在体外对中性粒细胞呼吸爆发及环磷酸腺苷 (c AMP)水平的影响。结果显示 S- TNF- α可明显诱导中性粒细胞呼吸爆发 ,同时使其 c AMP水平降低 (P<0 .0 5 ) ;但 TM- TNF- α却对之无明显影响。腺苷酸环化酶激活剂 Foskorlin(5 0 μm ol/L)可明显提高中性粒细胞的 c AMP水平 (P<0 .0 1) ,使 S- TNF- α对中性粒细胞呼吸爆发的促进作用受到约 15 %的抑制 (P<0 .0 5 ) ,但对 TM-TNF- α的作用无影响。提示 PKA途径参与 S- TNF- α诱导的中性粒细胞呼吸爆发的信号传导 ,而 TM- TNF- α与之无关。
- 李莉李卓娅龚非力姜晓丹徐勇冯玮
- 关键词：蛋白激酶A中性粒细胞
- 一氧化氮介导重型肝炎肝细胞损伤方式的研究
- 2003年
- 目的 探讨NO对重型肝炎肝细胞损伤方式的影响及可能机制。方法 雌性BALB/C小鼠 2 4只随机分为正常对照组、模型组、L Arg组 (NO供体干预 )和L NAME组 (NOS抑制剂干预 )。各组动物均于用药后 6h处死。常规测定血清谷丙转氨酶 (ALT)、血清总胆红素 (TBIL)并进行肝组织HE染色。用Griess法测定血清NO代谢产物NO2 -,末端转移酶标记技术原位检测各组肝细胞凋亡状况及采用流式细胞术 (FCM)检测各组肝细胞凋亡率。结果 急性重型肝炎模型组动物体内产生大量NO ,ALT、TBIL上升 ,出现重肝的肝组织病理学改变。运用NO合成干预因素后 ,L Arg组血清NO2 -升高 ,伴随ALT的上升和肝组织病变的加重 ;L NAME组NO2 -水平降低、ALT水平下降且肝组织损伤有一定程度的改善。正常肝细胞生理凋亡率低于 3% ,模型组凋亡率达 2 0 6 3% ,L Arg组凋亡率上升至 2 9 8% ,而L NAME组凋亡率下降到 10 15 % ,组间比较有显著性差异。结论 NO具有明显的肝细胞损伤作用 ,且坏死和凋亡同时存在。NOS抑制剂可在一定程度上减轻NO对肝细胞的损伤 (包括凋亡和坏死 )。
- 夏秦李卓娅
- 关键词：重型肝炎一氧化氮细胞凋亡细胞坏死
- 人TNFα分泌型、跨膜型和跨膜稳定型重组体的构建表达及杀瘤效应
- TNF-α的分泌型与跨膜型在生物学效应等方面各具特征。为研究比较二型TNF的生物学活性及其作用机制,本文用IL-2信号肽编码序列置换TNF的前导肽编码序列,构建出一种在真核细胞仅产生分泌型的TNF重组体;通过缺失二型TN...
- 黄家强卜夏李卓娅龚非力
- 关键词：杀瘤效应
- 文献传递
- 膜稳定型TNF突变体的构建、表达及活性研究被引量：3
- 2000年
- 目的 :TNF α可以分泌型 (S TNF)及其前体膜型 (M TNF)两种活性形式同时存在于体内。为膜型TNF的转基因应用 ,构建一种可表达于胞膜而不被酶解的膜稳定型TNF重组体 (mTNFm)。方法 :在克隆M TNFcDNA的基础上 ,删除两型TNF转换酶酶解部位的编码序列 ,构建出mTNFm并测序验证 ;建立只表达膜型TNF的真核细胞株。结果 :Westernblot分析及活性测定结果表明 ,mTNFm不再发生酶切转换且只通过效 靶细胞间直接接触发挥胞毒效应。通过基因直接注射方式 ,使mTNFm稳定表达于小鼠体内。结论
- 黄家强卜夏李卓娅龚非力
- 关键词：基因突变真核表达基因治疗
- 转染TNF-α及其突变体的成纤维细胞的杀瘤效应被引量：1
- 2003年
- 目的 :比较跨膜型和分泌型TNF α在体内的抗瘤效应。方法 :将 3种TNF α基因 (分泌型TNF α突变体 ,S TN Fm、跨膜型TNF α突变体 ,TM TNFm和野生型TNF α,Wt TNF)通过逆转录病毒载体转染成纤维细胞NIH/3T3 ;并用Southern印迹、RT PCR、流式细胞仪和生物活性检测等方法 ,从基因的整合、RNA转录、蛋白的表达及其生物学活性 4个方面对转染细胞进行检测鉴定。在小鼠接种肿瘤细胞的第 3天 ,于接种部位分别皮下注射表达TNF α及其突变体的NIH3T3细胞 ,效 /靶比为5∶1或 1∶1 ,观察这 3种TNF α的体内抗瘤效应。结果 :NIH3T3转染细胞可表达高水平的TNFα及其突变体。在体外 ,NIH3T3/TM TNFm的固定细胞、NIH3T3/S TNFm的上清、NIH3T3/Wt TNF的固定细胞和上清均可有效杀伤肿瘤细胞H2 2。在体内 ,当效 /靶比为 5∶1时 ,注射NIH3T3/TM TNFm的抑瘤效果最强 ;而当效 /靶比为 1∶1时 ,则NIH3T3/S TNFm的疗效最好。此外 ,在过继治疗期间未见明显副作用。结论 :上述结果提示跨膜型和分泌型TNF α均可在体内有效杀瘤 ;但如效 /靶比适当 ,TM TNF α显示的杀瘤效应较S TNF
- 李清芬李莉李卓娅龚非力冯玮姜晓丹徐勇熊平
- 关键词：跨膜型TNF-Α分泌型TNF-Α逆转录病毒载体抗瘤效应
- 跨膜型TNF-α生物学活性的膜依赖性
- 1998年
- 跨膜型TNF-α(TM-TNF-α)是激活的单核/巨噬细胞表达在胞膜上的完整蛋白分子。为了确定TM-TNF与细胞膜的关系,本文借助体外转录翻译系统及微粒体膜结构,建立了表达在微粒体膜上的TM-TNF以及无膜的裸26kD TNF。比较这两种体外表达产物对靶细胞的细胞毒效应,结果表明,只有在微粒体存在时所合成的26kD TNF具有细胞毒活性;而无微粒体存在所合成的裸26kD TNF不显示杀瘤效应。进一步用间接免疫荧光技术观察它们与HL60靶细胞胞膜上TNFR的结合情况,结果显示,结合在微粒体膜上的TM-TNF能与TNFR有效结合,而裸26kD TNF与TNFR则不能有效结合。提示TM-TNF只有“锚定”在细胞膜上,才能利于其空间构型的展示,发挥生物学效应;而一旦与膜分离,则不能与TNFR有效地结合,故丧失了其生物学活性。
- 曾劲杨李卓娅龚非力姜晓丹
- 关键词：跨膜型TNF-Α细胞毒活性
- 人可溶性TNF受体(sTNFRI)在大肠杆菌中的表达及其活性鉴定被引量：3
- 2002年
- 目的 :构建人可溶性TNF受体I(sTNFRI)基因表达载体 ,并在大肠杆菌中高效表达。方法 :用RT PCR扩增编码人TNFRI胞外段基因片段 ,将其插入到表达载体pET 2 8a ,并转入大肠杆菌进行表达。结果 :在IPTG诱导下 ,转入外源基因的大肠杆菌BL 2 1可高效表达sTNFRI蛋白 ,SDS PAGE显示在 2 7kD处有一特异表达条带 ,其表达量占菌体蛋白总量的 31%。纯化的sTNFRI可有效封闭TNF对L92 9细胞的胞毒效应 ;间接免疫荧光显示它可特异性抑制TNF与靶细胞TNFR的结合。结论 :通过基因工程技术获得了人sTNFRI重组蛋白。
- 叶飞李卓娅尹丙姣龚非力姜晓丹冯玮徐勇熊平
- 关键词：大肠杆菌活性鉴定
- bcl-2与FAS在NO介导的肝细胞凋亡中的作用被引量：8
- 2002年
- 目的 探讨bcl 2与FAS在NO介导的重型肝炎肝细胞凋亡中的作用。方法 雌性Balb/C小鼠 2 4只随机分为A、B、C、D 4组 ,每组 6只 ,分别为正常对照组、模型组、L Arg干预组 (NO供体干预 )、L NAME干预组 (NOS抑制剂干预 )。各组动物均于用药后 6h处死 ,留取血清、肝组织。用Griess法测定血清NO代谢产物NO-2 ,TUNEL原位检测肝细胞凋亡状况并计算凋亡指数 ,免疫组织化学法检测各组肝组织Fas表达及原位杂交技术检测各组肝组织bcl 2mRNA的表达。结果 1.应用NO合成干预因素后 ,C组及D组NO-2 水平分别较B组升高及降低。 2 .正常肝组织经TUNEL检测未见凋亡细胞 ,其凋亡指数为 0。B组存在肝细胞凋亡现象 ,凋亡指数为 16 2 7% ,C组凋亡指数上升 (2 4 5 2 % ) ,而D组凋亡指数下降 (7 92 ) % ,组间比较有显著性差异 ,P值 <0 0 1。 3.正常肝细胞内未见Fas蛋白及bcl 2mRNA表达。B组Fas表达较广泛 ,C及D组Fas表达呈不同程度的增强和减弱 ;组间比较差异有显著性 ,P值 <0 0 1。B组及C组均未见bcl 2mRNA杂交信号 ,仅D组见肝细胞内出现杂交信号。结论 高水平的NO具有明显的促进肝细胞凋亡的作用。NO对于肝细胞的损伤可以通过介导凋亡的方式实现。NO在介导肝细胞凋亡的过程中 ,启动了FAS凋亡途径 ,而抑制NO的过量产生可?
- 夏秦李卓娅
- 关键词：NO肝细胞凋亡FAS
