安徽省高校省级自然科学研究项目(2004kj218)
- 作品数：3 被引量：9H指数：1
- 相关作者：汤仁树王明丽赵俊王兴满俞海洋更多>>
- 相关机构：安徽医科大学更多>>
- 发文基金：安徽省高校省级自然科学研究项目安徽省科技攻关计划国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生更多>>
- HCMV pp65 DNA疫苗的纯化与检定
- 2010年
- 目的研究HCMV pp65 DNA疫苗（pcDNA3.1-pp65）的纯化工艺,并建立质控标准。方法对工程菌（DH5α/pcDNA3.1-pp65）的高效发酵菌体采用碱裂解法进行质粒初提;三步柱层析（依次为分子筛层析、亲和层析、阴离子层析）对质粒进行纯化,检测质粒含量、超螺旋比例、内毒素等,最后对终产品质粒溶液进行全面质量检定。结果质粒初提液通过分子筛层析后,去除了大量RNA、宿主DNA、内毒素等,再经亲和柱纯化后获得了高比例的超螺旋质粒DNA,达95%,经阴离子柱层析有效去除内毒素,质粒得率为0.8-0.95 mg/g菌,质粒总回收率达72.7%。三批终产品全面质量检定均符合规定。结论建立了稳定的HCMV pp65 DNA疫苗（pcDNA3.1-pp65）纯化工艺及质量控制标准,为进一步研究奠定了重要基础。
- 王兴满汤仁树赵俊陈敬贤王明丽
- 关键词：HCMVPP65DNA疫苗质粒纯化
- 两种细胞株滴定重组猪α干扰素效价的比较研究被引量：1
- 2009年
- 采用水泡性口炎病毒(VSV)作为攻击病毒,以微量细胞病变抑制法对同批次不同浓度的8组重组猪α干扰素(rPoIFN-α)样品进行了效价检测,以中国药品生物制品检定所指定使用的标化重组人α干扰素为效价滴定的参比标准,对在牛肾细胞(MDBK)株和人喉癌上皮细胞(HEp-2)株所得结果进行比较,并对细胞与待测样品按"一步法"和先加细胞,待细胞长满单层再加待测样品的"两步法"所得的rPoIFN-α抗病毒效价进行比较。结果表明:MDBK细胞株与HEp-2细胞株对于rPoIFN-α抗病毒活性检测结果无显著性差异,均可用于rPoIFN-α抗病毒活性的检测,重组人α干扰素滴定系统可用于rPoIFN-α效价检测。两种加样方法所得结果基本相同,推荐使用"一步法"。
- 王兴满汤仁树俞海洋赵俊王明丽
- 关键词：重组猪Α干扰素效价HEP-2细胞
- 重组猪α干扰素理化性状及其体外抗病毒活性研究被引量：8
- 2010年
- [目的]研究重组猪α干扰素(rPoIFN-α)半成品理化性状并对其体外抗病毒活性进行测试与鉴定。[方法]用HEp-2/VSV体系对3批rPoIFN-α蛋白进行抗病毒活性检测,以重组人IFN-α为参比品,测定干扰素效价;用0.25%胰蛋白酶HCl以及鼠抗猪α干扰素单克隆抗体作用已知效价的rPoIFN-α半成品,并检测各批次抗病毒活性,对rPoIFN-α理化性状进行评价;在猪肾细胞株(PK-15)上检测rPoIFN-α对猪细小病毒(PPV)和猪伪狂犬病毒(PRV)的致细胞病变抑制效应,观察rPoIFN-α的体外抗病毒活性。[结果]HEp-2/VSV体系滴定rPoIFN-α半成品效价可达1.5×105IU/ml,比活性达1.1×106IU/mg;rPoIFN-α经0.25%胰蛋白酶37℃作用1h,效价残留率低于1%,经HCl(pH=2.0)处理72h效价残留率高达95%以上,经56℃处理30min效价残留率高于47%,经鼠抗猪α干扰素单克隆抗体37℃作用1h后效价残留率约为1%;体外抗病毒试验表明,用50和500IU/mlrPoIFN-α可分别抑制PRV和PPV对PK-15细胞株致细胞病变效应。[结论]rPoIFN-α具有IFN-α的基本理化性状,其在体外可分别抑制PRV、PPV对PK-15细胞株致细胞病变效应,但剂量有差别。
- 汤仁树赵俊王明丽
- 关键词：猪Α干扰素理化性状抗病毒活性
