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DS-201对hRIFs体外增殖及cyclinD1基因表达的影响被引量：3: 2006年; 体外培养鉴定人肾间质纤维化来源的成纤维细胞(hR IF s),用四甲基偶氮唑(M TT)法检测对照组与不同浓度丹参酮ⅡA磺酸钠(DS-201)组hR IF s的增殖活性;用免疫细胞化学SP法和图像分析技术检测各组细胞周期素D 1(cyclinD 1)基因的表达。随药物浓度升高和作用时间延长,DS-201对hR IF s增殖活性抑制作用逐渐增强,其机制可能与DS-201抑制hR IF s中cyclinD 1基因表达,延长细胞周期有关。; 孙兴旺曹灵于国华张弦郭庆喜王巍唐学清郭勇; 关键词：细胞周期蛋白D1

梗阻性肾病成纤维细胞体外增殖规律的初步实验研究: 2007年; [目的]初步探讨梗阻性肾病人肾间质成纤维细胞体外培养的增殖规律。[方法]取慢性梗阻性肾病(UUO)患者手术切除标本取材,体外培养1～7代细胞,在不同时间点,用相差倒置显微镜观察细胞形态变化;通过免疫细胞化学方法对体外培养细胞进行鉴定;用MTT比色法检测体外培养第3代成纤维细胞的吸光光度值。[结果]原代培养5～7 d后,组织块周围开始长出数目不等的立方形或长梭形细胞;大约2～3周后,以占绝对优势的长梭形细胞可铺满瓶底。第2～5代细胞形态较为均一,多呈长梭形,胞浆丰富,核1～2个不等,偶见核仁,细胞呈栅栏状排列,周围有长短不一的轴状突起,并有无定性成分分布于4周。第6、7代细胞形态变化较大,细胞多数呈圆形或椭圆形,长梭形细胞数量减少,部分细胞形态不规则,胞内出现空泡和(或)颗粒状物质等细胞衰老、变性的形态改变。免疫细胞化学检测第2代细胞表达波形蛋白(vimentin)强阳性,角蛋白(keratin)散在灶性个别细胞弱阳性;第3～6代细胞均表达波形蛋白强阳性,结蛋白(desmin)和角蛋白阴性。传3代细胞MTT结果显示第3～5 d增殖速度最快,d 7细胞数量达到高峰,d 9后细胞生长相对稳定。[结论](1)用组织块培养法在体外顺利培养出梗阻性肾病来源的hRIFs。(2)传3～5代hRIFs纯度高、活性佳,于接种培养后3～5 d进入对数增长期,体外实验研究选择该时期的hRIFs较好。; 孙兴旺曹灵于国华张弦王巍郭庆喜陈宣世; 关键词：梗阻性肾病成纤维细胞体外培养增殖

丹参酮ⅡA磺酸钠对人肾间质成纤维细胞体外增殖和形态的影响被引量：4: 2009年; 目的探讨丹参酮ⅡA磺酸钠(sodium tanshinoneⅡ-A sulfonate,DS-201)对肾间质纤维化来源的人肾间质成纤维细胞(human renal interstitial fibroblast,HRIF)体外增殖和形态的影响。方法组织块体外培养HRIF,MTT比色法分别检测对照组及不同浓度DS-201组(0.5mg/ml、1.00mg/ml和2.00mg/ml)HRIF,在体外培养第1、3、5、7、9d的吸光光度值,并计算各实验组抑制率的均值(average of inhibition rate,IRA);倒置相差显微镜观察对照组及DS-201作用下HRIF形态的改变。结果随培养时间的延长和DS-201药物浓度的升高,IRA值升高。用药后HRIF形态由均一的梭形变成圆形或细长不规则条状。结论DS-201对HRIF体外增殖具有时间和浓度依赖性的抑制作用,并使体外培养的HRIF出现形态异常。; 于国华孔令玲黄飞孔祥梅曲桂梅姚卫东孙兴旺; 关键词：肾间质纤维化成纤维细胞增殖

丹参酮ⅡA磺酸钠抑制人肾间质成纤维细胞体外增殖过程中PCNA和Cyclin E的表达被引量：1: 2009年; 于国华孔令玲黄飞孔祥梅曲桂梅姚卫东孙兴旺; 关键词：人肾间质成纤维细胞 PCNA 体外干预增殖过程肾脏间质纤维化

丹参酮Ⅱ-A磺酸钠对纤维化人肾间质成纤维细胞体外增殖及cyclin E蛋白表达的影响被引量：41: 2007年; 目的研究丹参酮Ⅱ-A磺酸钠(sodium tanshinoneⅡ-A sulfonate,DS-201)对人肾间质纤维化来源的成纤维细胞(human renal interstitial fibroblasts,hRIFs)体外增殖及细胞周期素E(cyclin E)基因表达的影响,探讨该药治疗肾间质纤维化的作用机制。方法体外培养并鉴定hRIFs;用四甲基偶氮唑(MTT)法检测对照组与不同DS-201浓度组hRIFs的增殖活性;用免疫细胞化学S-P法和图像分析技术检测对照组与不同DS-201浓度组hRIFs cyclin E基因的表达。结果随药物浓度的升高和作用时间的延长,抑制率逐渐升高,抑制作用逐渐增强,呈剂量依赖性和时间依赖性。用药组阳性细胞的平均光密度值在第3、5、7、9天显著低于对照组(P<0.05,P<0.01),第1天用药各组与对照组之间无统计学差异(P>0.05)。结论①DS-201对hRIFs体外增殖有显著抑制作用,可能是其治疗肾间质纤维化的机制之一。②DS-201抑制hRIFs体外增殖可能是通过抑制细胞中cyclin E基因的表达,阻滞细胞通过G1/S关卡,延长细胞周期实现的。; 孙兴旺曹灵于国华唐学清郭庆喜张弦王巍许凯; 关键词：纤维化成纤维细胞细胞周期素E

丹参酮ⅡA磺酸钠对肾间质成纤维细胞P16蛋白表达的影响被引量：1: 2013年; 目的:观察丹参酮ⅡA磺酸钠(sodium tanshinoneⅡA sulfonate,DS-201)对人肾间质成纤维细胞(human renal interstitial fibroblasts,hRIFs)体外增殖以及P16表达的影响,试阐明其在延缓肾间质纤维化过程中作用的具体环节,为中药丹参治疗肾间质纤维化(renal interstitial fibrosis,RIF)提供理论和实验依据。方法:用四甲基偶氮唑(MTT)法检测对照组与不同DS-201浓度组hRIFs的增殖活性。免疫细胞化学技术检测0 mg/ml、0.5 mg/ml、1.0 mg/ml、2.0 mg/ml DS-201孵育hRIFs 72 h后P16的表达。结果:与对照组相比,各DS-201组hRIFs细胞由均一的梭形变成椭圆形甚至圆形;随着用药浓度增高,hRIFs抑制率明显增高;P16表达增强,平均光密度值显著增加,组间差异有统计学意义(P<0.05)。结论:DS-201可能通过促进P16的表达从而抑制hRIFs通过G1/S关卡,使细胞阻滞于G0/G1期,进而抑制细胞增殖。; 郭庆喜蒲霞杨成万刘俊孙兴旺; 关键词：肾间质纤维化丹参酮IIA磺酸钠成纤维细胞 P16

丹参酮ⅡA磺酸钠对单侧输尿管梗阻病人肾间质成纤维细胞Cyclin D1蛋白表达的影响及意义被引量：1: 2007年; 目的:研究丹参酮ⅡA磺酸钠(sodium tanshinoneⅡ-A sulfonate,DS-201)对单侧输尿管梗阻(UUO)病人肾间质纤维化来源的成纤维细胞(hRIFs)体外增殖及细胞周期素D1(cyclin D1)蛋白表达的影响,探讨该药治疗肾间质纤维化的作用机制。方法:体外培养鉴定hRIFs;用四甲基偶氮唑(MTT)法检测对照组与不同DS-201浓度组hRIFs的增殖活性;用免疫细胞化学SABC法和图像分析技术检测对照组与不同DS-201浓度组hRIFs cyclin D1基因的表达。结果:随药物浓度的升高和作用时间的延长,抑制率逐渐升高,抑制作用逐渐增强,呈剂量依赖性和时间依赖性;用药组阳性细胞的光密度值在第3、5、7、9天显著低于对照组(P<0.05,P<0.01,﹚第1天各组之间无统计学差异(P>0.05)。结论:①DS-201对UUO病人hRIFs体外增殖有显著抑制作用,可能是其治疗肾间质纤维化的机制之一;②DS-201抑制UUO病人hRIFs体外增殖可能是通过抑制细胞中cy-clin D1基因表达,延长细胞周期实现的。; 孙兴旺曹灵于国华张弦郭庆喜郭勇; 关键词：UUO 肾间质成纤维细胞细胞周期素D1

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四川省中医管理局科研基金(200022)

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