NSFC-广东联合基金(U1032002)
- 作品数：9 被引量：30H指数：3
- 相关作者：单鸿朱康顺李丹王劲沈敏更多>>
- 相关机构：中山大学附属第三医院中山大学更多>>
- 发文基金：NSFC-广东联合基金国家自然科学基金卫生部临床学科重点项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 过表达肝细胞核因子4alpha对人骨髓间充质干细胞向肝样细胞分化的作用被引量：2
- 2014年
- 目的应用转基因技术将肝细胞核因子4alpha(HNF-4α)转导入人骨髓间充质干细胞(MSCs)内,使其连续过表达HNF-4α并促进MSCs向肝样细胞分化。方法 HNF-4α基因通过慢病毒表达载体pLV/Final-puro-hHNF4α-hrGFP转入人MSCs(UE7T-13细胞)内,用流式细胞分析法检测及分选后,收集hrGFP阳性的UE7T-13细胞进行扩增。体外成肝诱导一周后,免疫荧光染色检测过表达HNF-4α基因的UE7T-13细胞(E7-hHNF-4α细胞)的白蛋白(ALB)和细胞角蛋白(CK18)的表达情况,糖原染色检测UE7T-13细胞及E7-hHNF-4α细胞的糖原储存功能。结果建立稳定、过表达hHNF-4α基因的E7-hHNF-4α细胞,持续过表达HNF-4α促进MSCs向肝样细胞分化,经过7天体外成肝诱导,E7-hHNF-4α细胞具有成熟肝样细胞表达ALB和CK18蛋白及糖原储存功能。结论利用Gateway技术可将HNF-4α高效转导入人MSCs细胞中,并有效促进MSCs向肝样细胞分化。
- 谢佩怡胡晓俊陈俊伟孟晓春朱康顺单鸿
- 关键词：肝细胞核因子4Α间质干细胞细胞分化
- 远红荧光蛋白报告基因mKate2对肝癌细胞的标记及荧光成像被引量：5
- 2011年
- 目的 制备远红荧光蛋白报告基因mKate2慢病毒,用于标记人肝癌细胞株HepG2,并进行体外的细胞荧光成像,为肿瘤的活体荧光成像示踪提供基础.方法 以pmKate2-N质粒为模板,将mKate2基因克隆到慢病毒表达载体pLenti6.3/V5-DEST;pLenti6.3-mKate2表达质粒和包装质粒共转染293T细胞进行病毒包装,并测定慢病毒的活性滴度;mKate2慢病毒以病毒感染复数（MOI）=6感染HepG2 96 h后,通过荧光显微镜观察和流式细胞分析法（FACS）检测感染效率;收集2×106个mKate2-HepG2细胞,通过光学成像系统进行荧光成像,确定最佳成像参数.结果 测序结果显示,mKate2基因序列正确,无突变或缺失;mKate2慢病毒的活性滴度为1.6×106TU/ml;mKate2慢病毒感染HepG2 96 h后,荧光显微镜下观察到大量红色荧光蛋白的表达,FACS检测显示mKate2的阳性率为93.8%±0.4%;激发光（530±15）nm和发射光（710±28）am为对mKate2-HepG2细胞进行荧光成像的最佳参数.结论 慢病毒能够介导远红荧光蛋白报告基因mKate2对人肝癌细胞株HepG2的高效标记,并且mKate2标记的HepG2能够进行体外细胞荧光成像,可以用于下一步的活体肿瘤示踪研究.
- 李丹沈敏张波李征然庞鹏飞朱康顺王劲黄明声孟晓春单鸿
- 关键词：肝肿瘤
- 320排动态容积CT血管造影对眼动脉起源的观察被引量：3
- 2013年
- 【目的】探讨异常起源眼动脉的320排动态容积CT血管造影表现及临床意义。【方法】对66例患者眼动脉进行320排动态容积CT血管造影,对图像进行三维重建,观察眼动脉的起源和变异。【结果】66例患者.共124侧眼动脉均清晰显示。起源于颈内动脉有120侧,分别起源于颈内动脉终段、床突上段、前膝段、海绵窦段和岩骨段。起源于脑膜中动脉有4侧。多平面重建、曲面重建、最大密度投影法及容积再现4种重建方法显示眼动脉起源部位的能力近似,均能较好地显示眼动脉根部与颈内动脉之间的关系。【结论】320排动态容积CT血管造影能够显示眼动脉的起源和变异,为影像诊断和介入治疗以及眼科、显微外科、神经外科等手术方案的制定提供解剖学依据。
- 郭若汨李庆玲李全喜骆众星朱叶青梁莹莹单鸿
- 关键词：眼动脉血管造影术
- 320排CT半自动法测量肝脏体积指数在肝硬化中的应用价值被引量：6
- 2011年
- 目的探讨320排CT半自动法测量肝脏体积(LV)指数在肝硬化中的应用价值。方法使用320排螺旋CT半自动法测量肝硬化组20例和对照组20名的LV,并根据公式计算LV指数。绘制LV指数和LV测量值的ROC曲线,对肝硬化组的LV指数、LV测量值与肝功能血清学指标以及肝功能Child-Pugh评分分别进行相关分析。结果肝硬化组的LV测量值为(997.31±293.37)cm3,LV指数为0.76±0.20;对照组的LV测量值为(1104.66±153.15)cm3,LV指数为0.88±0.11。LV测量值ROC曲线下的面积为0.68,LV指数ROC曲线下的面积为0.77。LV指数与肝功能Child-Pugh评分显著负相关(r=-0.54,P<0.05)。结论 LV指数能更好地反映肝硬化患者LV减小的程度,具有较高的敏感度和特异度,可用于辅助诊断肝硬化。
- 胡冰杨洋邹艳沈敏邝思驰王亮王劲单鸿
- 关键词：肝硬化肝脏体积
- 320排动态容积CT血管造影对评估糖尿病眼动脉硬化的应用被引量：7
- 2014年
- 【目的】探讨320排动态容积CT血管造影对评估糖尿病眼动脉硬化的临床价值。【方法】对30例非糖尿病患者和22例糖尿病患者进行320排动态容积CT血管造影检查,对所有扫描原始数据行最大密度投影(MIP)、容积再现(VR)、多平面重建(MRP)及曲面重建(CPR),观察眼动脉的管腔情况。【结果】320排动态容积CT血管造影检查可以清晰显示眼动脉形态、走行,以及病变的部位、情况。22例糖尿病患者血管呈不同程度粥样硬化表现。其中颅内段轻度狭窄6侧,中度狭窄4侧;视神经管内段轻度狭窄2侧,中度狭窄4侧;眶内段轻度6侧,中度狭窄2侧。斑块性质以钙化斑块或混合斑块为主。【结论】320排动态容积CT血管造影可以对糖尿病眼动脉硬化进行无创、准确、快捷的评估,具有重要的临床价值。
- 李庆玲郭若汨李全喜骆众星张建生陈燕铭单鸿
- 关键词：糖尿病动脉硬化血管造影术
- Luciferase2/mKate2双报告基因对小鼠骨髓间充质干细胞的标记及活体光学成像研究被引量：3
- 2014年
- 【目的】Luciferase2/mKate2双报告基因标记小鼠骨髓间充质干细胞(mMSC),并进行活体生物发光和荧光双模态光学成像研究。【方法】全骨髓细胞贴壁分离法提取mMSC,进行细胞表面标志物和多向分化潜能的鉴定;CMVLuciferase2-mKate2慢病毒感染mMSC,根据细胞内远红荧光蛋白mKate2的表达水平评估转染效率并利用流式细胞仪进行纯化筛选;对筛选后的mMSC(mMSC-CMV-Luc2-mKate2,mKate2+>95%)进行活体生物发光和荧光双模态光学成像。【结果】成功分离mMSC;表型分析结果显示mMSC高表达Sca-1(94.5%)、CD44(99.6%),低表达CD11b(0.092%)、CD45(0.11%);mMSC具有成脂和成骨分化能力。CMV-Luciferase2-mKate2慢病毒感染mMSC 96 h后,细胞内mKate2的荧光表达率为22.97%,经流式细胞仪筛选后mKate2表达率大于95%。对筛选后的mMSC进行活体生物发光成像和荧光成像可探测光信号,光信号强度与细胞数量呈明显线性正相关(生物发光成像为R2=0.9893;荧光成像为R2=0.9226)。【结论】CMVLuciferase2-mKate2慢病毒转染mMSC可稳定表达双报告基因Luciferase2和mKate2,体外可根据细胞内mKate2的表达水平间接评估转染效率、进行细胞筛选,活体内可同时进行生物发光成像和荧光成像,为mMSC体内移植后生物学行为的研究提供了良好、无创的定量示踪手段。
- 刘静静胡晓俊李征然李丹颜荣华覃杰王劲单鸿
- 关键词：骨髓间充质干细胞示踪生物发光成像
- 人永生化骨髓间充质干细胞移植后在肝损伤裸鼠体内的活体光学示踪被引量：1
- 2014年
- 目的:探讨生物发光成像用于细胞移植后的活体示踪和定量研究的可行性。方法:构建CMVluciferase2-mkate2片段的慢病毒载体,感染永生化人骨髓间充质干细胞(UE7T-13),体外和活体验证双光学报告基因标记细胞的荧光表达及生物发光成像。结果:(1)成功建立稳定表达红色荧光蛋白(mKate2)和荧光素酶(Luc2)活性的UE7T-13细胞系。(2)慢病毒感染后的UE7T-13细胞其多向分化能力未受影响;(3)双光学报告基因标记细胞的体外和活体生物发光成像,可用于裸鼠肝脏移植细胞后的活体示踪。结论:慢病毒pLENTi-CMV-luc2-mKate2感染后的永生化人骨髓间充质干细胞(UE7T-13)稳定表达红色荧光蛋白(mKate2)和萤火虫荧光素酶(Luc2)活性,可用于裸鼠干细胞移植后活体示踪研究。
- 李征然唐文杰李丹胡晓俊单鸿
- 关键词：慢病毒载体生物发光成像活体示踪
- 多功能靶向纳米载体的制备及其对神经母细胞瘤的靶向性和MRI示踪性观察被引量：2
- 2012年
- 目的制备集靶向siRNA传递及MRI显像功能于一体的多功能靶向纳米载体,并验证其对神经母细胞瘤的靶向性及MRI示踪性。方法制备PEG-PEI-SPION,scAbGD2-PEG-PEI-SPION并检测其基本特性。利用凝胶阻滞检测纳米载体与siRNA的复合能力;以CLSM及MRI验证纳米载体的靶向性。结果 PEG-PEI-SPION,scAbGD2-PEG-PEI-SPION平均粒径分别为(60.0±2.3)nm及(90.0±7.8)nm。氮磷比(N/P)≥2.2时siRNA与PEG-PEI-SPION,scAbGD2-PEG-PEI-SPION完全复合。CLSM实验及MRI结果证实scAbGD2-PEG-PEI-SPION具有靶向性。结论 scAbGD2-PEG-PEI-SPION对神经母细胞瘤具有靶向传递siRNA及MRI显影的功能。
- 沈敏巩发明朱康顺庞鹏飞帅心涛单鸿
- 关键词：磁共振成像神经母细胞瘤肿瘤靶向非病毒载体
- 用于分子影像学研究的双融合报告基因表达载体的构建及功能验证被引量：2
- 2011年
- 目的构建增强型绿色荧光蛋白（EGFP）和人转铁蛋白受体（TfR）双融合报告基因表达载体，并进行功能鉴定，为活体光学／磁共振双模式成像提供实验基础。方法将TfR基因克隆到pEGFP．C1载体，构建重组pEGFP-C1-TfR质粒。pEGFP-C1-TfR质粒转染293T细胞48h后，通过荧光显微镜观察EGFP的表达情况；通过RT-PCR检测TfR的表达情况；通过激光共聚焦扫描显微镜检测EGFP-TfR融合蛋白的亚细胞定位；通过Tf探针摄取和竞争实验检测EGFP-TfR融合蛋白的功能。结果测序结果显示，EGFP．TfR基因序列正确，无突变或缺失。重组质粒转染293T细胞后，荧光显微镜下观察到EGFP的表达；RT-PCR结果显示TfR高效表达；EGFP-TfR融合蛋白主要位于细胞膜，并能够特异介导Tf的内吞。结论EGFP-TfR双融合报告基因表达载体构建成功，并且能够高效表达发挥各自的功能，可以用于后续的活体光学／磁共振双模式成像。
- 李丹周斌张波覃杰朱康顺黄明声孟晓春单鸿
- 关键词：磁共振成像基因重组融合蛋白质类
