四川省中医管理局重点科研基金(200239)
- 作品数：10 被引量：96H指数：5
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- 缺氧诱导因子-1α在新生儿窒息后缺氧／复氧肾脏人近曲肾小管上皮细胞损伤中的表达及丹参干预效果被引量：6
- 2008年
- 目的探讨缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)在新生儿窒息后缺氧/复氧肾脏损伤中的表达及丹参的干预作用。方法以人近曲肾小管上皮细胞(HK-2)为研究对象,随机分为实验对照组、模型组、丹参组。采用液体石蜡覆盖法建立新生儿窒息后肾脏缺氧后复氧模型,每组都选择缺氧1、4、8、12、24h,缺氧后复氧1、4、8、12、24h,用链霉亲和素-生物素-过氧化物酶法(SABC)测定HIF-1α的阳性率。组间比较采用单因素方差分析。结果经免疫组织化学检测,HIF-1α主要表达于HK-2细胞核。在常氧下,HIF-1α有阳性表达,但阳性率低。在缺氧1h,HIF-1α即有明显增高,随着缺氧时间的延长,阳性率渐升高,缺氧24h达最高峰;复氧后HIF-1α的表达仍升高,复氧4h达最高峰,随后逐渐下降,在复氧后24h达最低水平。与模型组相比,丹参组各个时间点的HIF-1α表达阳性率明显降低(Pa<0.01)。结论HIF-1α的表达增加是机体的一种内源性保护机制。丹参可使HIF-1α的表达下降。
- 郭琳董文斌王明勇邓存良
- 关键词：丹参人近曲肾小管上皮细胞
- 新生儿窒息后血清诱导人肾小管细胞粘附中性粒细胞的作用及机制被引量：2
- 2008年
- 目的研究新生儿窒息后血清诱导的人肾小管细胞粘附中性粒细胞的作用及机制。方法以HK-2细胞株为研究对象,用含20%的窒息后血清作为诱导因素。实验分空白对照组、窒息组(窒息后1,3,7d组)和吡咯烷二硫氨基甲酸(PDTC)干预组。分别检测各组细胞悬液中髓过氧化物酶(MPO)活性;检测HK-2细胞膜ICAM-1和细胞核内NF-κB的表达。结果窒息后1d血清组细胞悬液MPO值显著高于各PDTC干预组、对照组及窒息后3,7d血清组(P<0.01)。窒息后1d血清组HK-2细胞表面ICAM-1表达和HK-2细胞核NF-κB表达亦显著高于各PDTC干预组、对照组及窒息后3,7d血清组(P<0.01)。结论窒息后血清可以诱导肾小管上皮细胞活化进而粘附中性粒细胞,其作用机制可能涉及到窒息后血清活化了NF-κB,从而使肾小管上皮细胞膜表面ICAM-1表达增加,进而粘附中性粒细胞。
- 付慧董文斌龙汉安邓存良王明勇许开桂
- 关键词：新生儿窒息血清肾小管上皮细胞中性粒细胞细胞间粘附因子
- 丹参在缺血/再灌注损伤中的保护机制被引量：47
- 2005年
- 李梦妮董文斌
- 关键词：丹参INJURY组织器官损害病理现象
- 缺氧-复氧诱导HK-2细胞黏附窒息新生儿中性粒细胞的作用机制被引量：5
- 2006年
- 目的:探讨在缺氧/复氧(hypoxia/reoxygenation,H/R)情况下,人近曲肾小管上皮细胞(HK-2)对窒息新生儿中性粒细胞黏附作用的影响及其胞内信号传导机制。方法:以人近曲肾小管上皮细胞(HK-2)为研究对象,实验共分为6个组:缺氧4、12、24h组和缺氧24h后复氧4、12、24h组,每个实验组均设立空白对照组和吡咯烷二硫氨基甲酸(PDTC)干预组。采用液体石蜡覆盖法造成缺氧环境,分别对上述各组用生化法检测培养上清中乳酸脱氢酶(LDH)含量、测细胞悬液中髓过氧化物酶(MPO)活性,判断肾小管上皮细胞介导窒息新生儿中性粒细胞的黏附能力;免疫组化法检测HK-2细胞ICAM-1的表达。结果:与对照组相比,HK-2细胞经过缺氧/复氧处理后,LDH含量升高,MPO活性增加,细胞膜表面的ICAM-1表达明显增高,在缺氧24h达高峰,具有统计学意义(P<0.05),而PDTC干预组上述指标,无统计学意义(P>0.05)。结论:缺氧/复氧可刺激人近曲肾小管上皮细胞诱导窒息新生儿中性粒细胞黏附作用,其胞内信号机制可能涉及到NF-κB活化,进而诱导小管上皮细胞表面ICAM-1表达和合成增多。
- 杜逸亭董文斌余鸿邓存良王明勇杭永伦许开桂
- 关键词：缺氧肾小管细胞间黏附分子-1核因子-ΚB新生儿
- 复方丹参注射液减轻缺氧/复氧性HK-2细胞损伤的作用及机制被引量：11
- 2007年
- 目的探讨丹参注射液减轻缺氧-复氧性人肾近曲小管上皮细胞(HK-2)细胞损伤的作用机制。方法以人近曲肾小管上皮细胞为研究对象,采用液体石蜡覆盖法建立缺氧/复氧模型。实验分为3组:对照组、损伤组和丹参组,每个组均设立7个时间点:缺氧4,12,24h和缺氧24h后复氧4,12,24,48h,其中丹参组设立4个浓度亚组(生药浓度):0.05%,0.10%,0.15%,0.20%。在倒置相差显微镜下观察细胞的形态学改变,MTT法进行活细胞计数,生化法检测培养上清液中乳酸脱氢酶(LDH)含量,放射免疫法检测肿瘤坏死因子α(TNF-α)的含量。结果缺氧处理后,损伤组在各时间点细胞数量均明显降低,在缺氧24h达最低值;与损伤组比较,在丹参各组中,HK-2细胞数量较多,其中以0.10%丹参组细胞数量在各时间点均为最高。与对照组比较,损伤组LDH,TNF-α水平升高,在缺氧24h-复氧4h达最高值;与损伤组相比,丹参组在缺氧/复氧过程各时间点中LDH,TNF-α水平降低。结论复方丹参注射液对HK-2细胞缺氧-复氧性损伤具有保护作用,作用机制可能与丹参注射液抑制炎症细胞因子的产生有关。
- 李梦妮董文斌曹敏邓存良王明勇
- 关键词：丹参HK-2细胞
- 人近曲肾小管上皮细胞缺氧/复氧损伤模型的建立被引量：19
- 2005年
- 目的建立一种新的人近曲肾小管上皮细胞HK2缺氧/复氧损伤模型。方法本实验使用人近曲HK2。实验分为缺氧4、12和24h及缺氧24h后复氧4、12和24h组,每个实验组均设立空白对照组。采用经高温灭菌的液体石蜡覆盖法造成缺氧环境;苔盼兰摄取法进行细胞计数及检测细胞存活率,生化法检测培养基中的乳酸脱氢酶(LDH)含量。结果人肾小管上皮细胞经过缺氧/复氧处理后,苔盼兰摄取率显著提高,细胞存活率显著下降,LDH含量升高。说明缺血再灌注损伤导致了细胞膜的完整性破坏,甚至细胞发生了不可逆转的损伤。结论采用液体石蜡覆盖法建立人近曲肾小管上皮细胞缺氧/复氧损伤模型,较其他制模方法操作简单、易行、可靠。
- 杜逸亭董文斌王明勇航永伦
- 关键词：上皮细胞液体石蜡
- 黄芪注射液对新生儿窒息后血清诱导人近曲肾小管上皮细胞损伤的保护作用被引量：5
- 2008年
- 目的探讨黄芪注射液对新生儿窒息后血清攻击人近曲肾小管上皮细胞（HK-2）损伤模型的保护作用。方法以人HK-2为研究对象。实验共分为对照组、模型组和黄芪干预组。黄芪干预组设立5个质量浓度亚组，预处理24h。以200mL／L窒息血清作为攻击因素，观察不同质量浓度黄芪干预组间细胞形态学变化，LDH漏出率和细胞活力情况[四甲基偶氮唑盐比色法（MTT法）]。结果与对照组比较，模型组细胞形态发生改变，LDH漏出率增加、细胞活力降低，均具有显著性差异（Pa〈0．05）；与模型组比较，黄芪干预组细胞形态得到明显改善，LDH漏出率降低、细胞活力增加，均具有显著性差异（Pa〈0．05），5～40mg／L保护效应逐渐增加，40mg／L时保护效果最强，〉40mg／L时保护效应反而下降。结论黄芪注射液具有减轻窒息血清所致HK-2细胞损伤的作用。
- 熊涛董文斌王明勇邓存良
- 关键词：窒息肾损伤
- 银杏叶提取物对窒息后血清诱导人近曲肾小管上皮细胞损伤的影响被引量：1
- 2009年
- 目的研究银杏叶提取物（EGb）对新生儿窒息后血清攻击人近曲肾小管上皮细胞（HK-2）损伤模型的影响。方法以人近曲肾小管上皮细胞（HK-2）为研究对象，200ml／L窒息血清作为攻击因素。实验共分为两阶段，均设对照组、模型组和EGb干预组（EGb预处理24h）。第一阶段EGb干预组设立5个质量浓度亚组。观察三组细胞形态学，乳酸脱氢酶（LDH）漏出率和细胞存活（MTT法）变化。第二阶段以第一阶段选出的EGb最适质量浓度预处理细胞，观察三组NF-κB p65蛋白（免疫组化）和抑制亚基I-κBα（western blot）的变化。结果与对照组相比，模型组细胞形态发生改变，LDH漏出率增加，细胞活力降低（P〈0．05）；与模型组比较，EGb预处理组细胞形态明显得到改善，LDH漏出率降低，细胞活力增加（P〈0．05），在5—50mg／L保护效应逐渐增加，50mg／L时保护效果最强，而〉50mg／L时保护效应反而下降。与对照组相比，模型组细胞NF-κB p65蛋白表达明显增加，I-κBα量减少（P〈0．05）；与模型组比较，EGb干预组细胞NF-κB p65蛋白表达明显减少，I-κBα量增加（P〈0．05）。结论EGb具有减轻窒息血清所致HK-2细胞损伤的作用，其作用可能与抑制窒息血清所致NF—κB激活有关。
- 熊涛董文斌王明勇邓存良
- 关键词：银杏叶提取物窒息血清肾损伤
- TNF-α含量的改变与肾小管细胞缺氧-复氧性损伤关系的研究被引量：10
- 2005年
- 目的:探讨TNF-α含量的改变与肾小管上皮细胞株(HK-2)缺氧-复氧性损伤的关系。方法:以HK-2细胞株作为研究材料,采用液体石蜡覆盖法建立缺氧损伤模型,分别在缺氧4、12、24h和复氧4、12、24h,采用放射免疫分析法(RIA)、生化法和台盼蓝拒染法,检测培养液中TNF-α的含量、乳酸脱氢酶(LDH)的活性、细胞计数及活细胞率的改变。结果:缺氧后4h,TNF-α的含量、LDH的活性开始升高,细胞总数及活细胞计数开始下降,并于缺氧后24h达高峰。TNF-α含量的改变与LDH活性的升高呈显著的正相关(r=0.89,P<0.05),与活细胞计数的下降呈显著的负相关(r=-0.91,P<0.05)。结论:肾小管缺氧-复氧后,TNF-α的产生增多,并参与了肾小管细胞损伤的过程。
- 董文斌杜逸亭陈跃航永伦陈枫邓存良
- 关键词：TNF-Α肾小管上皮细胞
- 丹参注射液抑制缺氧-复氧诱导HK-2细胞黏附窒息新生儿中性粒细胞的作用和机制被引量：1
- 2009年
- 目的:探讨丹参注射液抑制缺氧-复氧诱导HK-2细胞黏附窒息新生儿中性粒细胞的作用和其胞内信号传导机制。方法:以人近曲肾小管上皮细胞(HK-2)为研究对象。实验共分为6个组:缺氧4,12,24h组和缺氧24 h后复氧4,12,24 h组,每个实验组均设立空白对照组和丹参注射液干预组(丹参组)。采用液体石蜡覆盖法造成缺氧环境,分别对上述各组用生化法测细胞悬液中髓过氧化物酶(MPO)活性,判断肾小管上皮细胞介导窒息新生儿中性粒细胞的黏附能力;免疫组化法检测HK-2细胞ICAM-1和核因子(NF-κB p65)的表达。结果:与对照组相比,HK-2细胞经过缺氧/复氧处理后,MPO活性增加,细胞膜表面的ICAM-1表达和细胞核NFκ-B p65明显增高,具有显著差异(P<0.05);而丹参组上述指标对照组相比无显著差异(P>0.05)。结论:丹参注射液具有减轻缺氧-复氧诱导人近曲肾小管上皮细胞黏附窒息新生儿中性粒细胞的作用,其胞内信号机制可能涉及到抑制NFκ-B活化,进而抑制小管上皮细胞表面ICAM-1表达和合成。
- 雷小平董文斌李梦妮李清平龙汉安邓存良王明勇
- 关键词：丹参注射液肾小管细胞细胞间黏附分子-1新生儿
