国家高技术研究发展计划(2007AA02Z227)
- 作品数：2 被引量：3H指数：1
- 相关作者：韦旭钦韦宇拓杜丽琴黄日波陈云来更多>>
- 相关机构：广西大学广西科学院更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：生物学更多>>
- 基于非理性设计的肺炎克雷伯氏杆菌甘油脱水酶的分子定向进化被引量：3
- 2014年
- 1,3-丙二醇是一种具有广泛应用前景和巨大市场潜力的平台化合物。在生物体转化甘油合成1,3-丙二醇的代谢途径中,甘油脱水酶是代谢途径的限速酶,然而自然界中的甘油脱水酶却存在着诸多的不足。本研究采用易错PCR技术对来源于肺炎克雷伯氏杆菌的甘油脱水酶进行非理性设计的分子定向进化,通过高通量筛选方法筛选获得了一个酶学性质得到了改善的突变酶γ-F97G。当以甘油作为酶催化的底物时,突变酶的酶比活力为(583.8±49.4)U/mg,相比较野生型的酶比活力提高了约94%;当以1,2-丙二醇作为酶催化底物时,突变酶的酶比活力为(147.9±5.5)U/mg,相比较野生型的酶比活力提高了约72%。经分析酶蛋白的三维结构后发现酶蛋白发生突变的位点属于远距离突变位点,实验结果表明远距离突变有时同样是一条优化和改善酶的酶学性质的好途径。
- 陈云来韦旭钦杜丽琴韦宇拓黄日波
- 关键词：1,3-丙二醇甘油脱水酶分子定向进化
- 宏基因组中不依赖辅酶B12甘油脱水酶基因的筛选和表达
- 2013年
- 通过特定的引物,以土壤宏基因组DNA为模板,采用PCR技术扩增获得3.3 kb的DNA片段,该片段连接于pSE380载体构建重组质粒pSE380-dhaB12用于测序和表达。序列分析表明,该DNA片段编码的氨基酸序列与已报导的丁酸梭菌不依赖辅酶B12甘油脱水酶的相似性达99%。通过IPTG诱导,dhaB12基因在大肠杆菌中表达成功,SDS-PAGE分析表明有88 kD和34 kD两条蛋白质条带,在没有辅酶B12存在的情况下,所表达的酶具有明显的甘油脱水酶活性。
- 韦旭钦陈云来吴杰群韦宇拓杜丽琴黄日波
- 关键词：宏基因组甘油脱水酶
