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存活素siRNA表达质粒对化疗药物抑癌作用的影响: 2010年; 目的探讨存活素si RNA表达质粒(mU6/survivin质粒)对化疗药物抑癌作用的影响。方法采用MTT法检测mU6/survivin质粒与多种常规肿瘤化疗药物对乳腺癌MCF-7细胞增殖的联合作用。结果比较单纯化疗药物作用组的各相应浓度点,si RNA表达质粒mU6/survivin与化疗药物顺铂、环磷酰胺、5-氟尿嘧啶或秋水仙碱合用组对肿瘤细胞MCF-7的细胞增殖抑制率均明显提高,差异均有统计学意义(P<0.01);对靶向DNA药物如顺铂、环磷酰胺和5-氟尿嘧啶的抗癌性能具有显著的协同增强作用(二者合用效应Q值均>1),但对靶向微管的药物秋水仙碱没有相加作用(Q值<1)。结论在解除肿瘤细胞中存活素功能的基础上进行药物化疗,可能是肿瘤治疗的一个新的可行方向。; 李莉萍罗超权张志珍梁念慈; 关键词：存活素 SIRNA 质粒化疗药物

辛伐他汀对人高转移卵巢癌细胞HO-8910PM增殖的抑制作用被引量：1: 2008年; 目的研究辛伐他汀(SIM)对人高转移卵巢癌细胞HO-8910PM体外增殖的抑制作用。方法MTT法检测SIM对HO-8910PM细胞增殖的抑制作用;流式细胞术分析SIM对细胞周期的影响;Hoechst 33258荧光染色观察细胞凋亡的形态学改变。结果SIM抑制HO-8910PM细胞的增殖,细胞被阻滞在G0/G1期;荧光染色法显示经SIM作用后细胞出现变形,染色质浓缩,产生凋亡小体。结论SIM在体外能有效地抑制癌细胞的增殖,其作用可能是通过诱导其凋亡产生的。; 符伟玉兰柳波陈杰梁念慈; 关键词：辛伐他汀卵巢癌细胞增殖

survivin shRNA重组腺病毒的构建及其对人肺癌细胞A549的作用被引量：3: 2009年; 目的构建携带人生存素survivin短发夹RNA(shorthairpin RNA,shRNA)表达载体的重组腺病毒,以此介导小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)药物对人A549细胞肺癌的治疗,为下一步动物实验研究提供基础。方法将前期实验中构建并筛选的重组质粒pShutte-survivin与携带LacZ标签的腺病毒骨架质粒共转染HEK-293T细胞,经同源重组产生重组腺病毒Ad-survivin;经PCR鉴定并测定病毒滴度;β-gal染色检测病毒对人肺癌细胞A549的感染效率;MTT实验和流式细胞术检测其对A549细胞的作用;半定量RT-PCR检测RNAi效果;Hoechst染色观察凋亡情况。结果PCR证实重组腺病毒Ad-survivin构建成功;β-gal染色表明感染效率明显;A549细胞增殖受到抑制并阻滞于G2/M期;survivin mR-NA的表达受到抑制;荧光染色发现有凋亡细胞。结论成功构建人survivin基因shRNA表达载体的重组腺病毒,下调survivin表达后能诱导A549细胞凋亡,为研究肺癌RNAi途径的基因治疗奠定基础。; 谢富华王润秀李昌武覃燕梅梁念慈; 关键词：SURVIVIN 重组腺病毒 RNAI

BALB/C小鼠乳腺癌移植模型的研究被引量：1: 2008年; 目的:建立人乳腺癌裸鼠移植模型,为RNA干扰介导基因治疗的体内研究打下基础。方法:采用雌激素受体阳性的MCF-7人乳腺癌细胞株,接种于20只裸小鼠右侧胸壁乳垫下,移植细胞总数为1×106/只。观察肿块生长情况,至30天牺牲荷瘤鼠,切除肿块作病理切片。结果:接种后第10天在接种部位可见结节,肿瘤移植成功率(成瘤率)为95%(19/20)。切除肿块病理学检查为浸润性导管癌。结论:该方法建立的人乳腺癌裸鼠移植模型,成功率高,肿瘤符合人乳腺癌特性,为研究人乳腺癌提供了重要工具。; 谢富华王润秀李昌武梁念慈; 关键词：乳腺肿瘤动物模型裸鼠

建立NHEJ修复定量体系并检测拓扑异构酶抑制剂依托泊苷对NHEJ的影响被引量：3: 2015年; 目的建立含p I-SCEⅠ酶切位点的总的非同源末端连接(total non-homologous end joining,Total-NHEJ)和非经典末端连接(alternative end joining,A-EJ)修复底物的细胞株,设置特定的流式细胞术参数,定量检测依托泊苷(etoposide,VP-16)对非同源末端连接(Non-homologous end joining,NHEJ)修复的影响。方法本实验通过脂质体转染含修复底物的质粒,嘌呤霉素筛选,构建起NHEJ修复系统的稳定细胞株;运用流式细胞术和PCR技术对所构建的细胞株的基因组DNA进行分析与鉴定;运用细胞免疫荧光及基因组DNA琼脂糖凝胶电泳检测VP-16诱导的DNA双链断裂(DNA double strand break,DSB)损伤,运用流式细胞术定量检测VP-16对NHEJ修复的影响。结果在所筛选的细胞中的各得到2株阳性细胞株Total-NHEJ和2株阳性细胞株A-EJ。VP-16作用浓度和时间的增加,Total-NHEJ和A-EJ修复效率增加。结论 VP-16诱导DNA损伤的同时,促进总NHEJ修复和A-EJ修复,修复呈现剂量和时间依赖性,但随着浓度和作用时间的增加,VP-16致DSB的损伤能力超过修复能力。; 李莉萍吴晓丹孙有湘陈利俊; 关键词：稳定转染依托泊苷

hIAP-2 siRNA表达质粒的构建及其对乳腺癌细胞MCF-7的作用被引量：7: 2006年; 目的:构建人凋亡抑制蛋白2(hIAP-2)基因的小分子干扰RNA(siRNA)的表达质粒,并检测其对乳腺癌细胞MCF-7的作用。方法:利用含U6启动子的mU6pro载体构建hIAP-2 siRNA表达质粒,RT-PCR和Western印迹法检验其对MCF-7细胞的RNA干扰(RNAi)效果。用MTT法分析其对细胞增殖,流式细胞仪检测其对细胞周期,以及Hoechst染色法观察其对细胞形态的影响。同时,用胱天蛋白酶-3(caspase-3)Ac-DEVD-pNA底物法检测caspase-3活性的变化,Western印迹法检测一些相关蛋白质的表达变化。结果:hIAP-2 siRNA表达质粒高效而特异地剔降MCF-7细胞中hIAP-2的表达,抑制肿瘤细胞增殖(P<0.01),阻断MCF-7细胞在G1期。随着hIAP-2基因被沉默,MCF-7细胞变得多核化和巨核化,caspase-3酶原表达升高并被激活(P<0.01)。此外,IκBα和p21waf1蛋白表达升高,NF-κB(p65)则降低,Cyt C维持不变。结论:RNA干扰hIAP-2对MCF-7细胞增殖和细胞周期调控有重要影响,细胞裂亡可能是导致其细胞死亡的主要原因,DNA受损后其细胞周期阻滞在G1期可能与上调p21waf1有关。; 李莉萍梁念慈罗超权; 关键词：SIRNA 乳腺肿瘤

洛伐他汀对高转移卵巢癌细胞HO-8910PM细胞周期和增殖的影响被引量：2: 2008年; 目的探讨洛伐他汀对人高转移卵巢癌细胞HO-8910PM细胞周期和增殖的影响。方法以MTT法检测洛伐他汀对HO-8910PM细胞增殖的影响;流式细胞术分析洛伐他汀对HO-8910PM细胞周期的影响;Hoechst 33258荧光染色观察细胞凋亡的形态学改变。结果洛伐他汀对HO-8910PM细胞增殖有明显的抑制作用,并使G0/G1期细胞增多,G2/M、S期细胞减少,32μmol/L用药48h有指示细胞凋亡的亚G1期"凋亡峰"出现。结论洛伐他汀阻滞HO-8910PM细胞于G0/G1期,并能有效抑制癌细胞的体外增殖,以上作用均有剂量和时间依赖性。; 张建和符伟玉覃燕梅梁念慈; 关键词：洛伐他汀卵巢癌细胞增殖细胞周期

携带人生存素基因短发夹RNA表达载体重组腺病毒的构建及其生物学作用: 2008年; 目的构建携带人生存素(survivin)基因短发夹RNA(shRNA)表达载体的重组腺病毒。方法构建并筛选重组质粒pShuttles-urvivin,将其与腺病毒骨架质粒共转染HEK-293细胞,经同源重组产生腺病毒;PCR鉴定并测定病毒滴度;β-半乳糖染色检测病毒对人乳腺癌细胞MCF-7的感染效率;流式细胞术、RT-PCR和W estern免疫印迹法检测其生物学功能。结果经PCR鉴定重组腺病毒构建成功;48 h后感染率达75%以上;腺病毒感染MCF-7细胞后48 h,生存素mRNA和蛋白的表达均受到抑制;腺病毒感染MCF-7细胞后,细胞分裂受阻于G2/M期,在48和72 h有凋亡峰出现。结论成功构建人生存素基因shRNA表达载体的重组腺病毒。; 谢富华王润秀覃燕梅李莉萍梁念慈; 关键词：生存素

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广东省中医药管理局基金(1050051)

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