国家自然科学基金(81100395)
- 作品数：6 被引量：12H指数：2
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- 血清蛋白磷酸酯酶2A水平与卵巢癌患病的相关性研究被引量：3
- 2019年
- 目的在血清学水平探讨卵巢癌患者蛋白磷酸酯酶2A(protein phosphatase,PP2A)蛋白表达水平及其与卵巢癌肿瘤标志物糖链抗原125(sugar chain antigen 125,CA125)和人附睾蛋白4(human epididymal protein 4,HE4)水平的相关性。方法分别选取正常对照组30例,卵巢囊肿15例,卵巢癌患者20例进行研究。采用酶联免疫吸附实验(ELISA)检测血清PP2A蛋白表达水平。结果与正常对照组相比,卵巢囊肿组血清PP2A水平下降,差异有统计学意义(P<0.05),同时PP2A酶活性下调,PP2A活性仅为正常对照组的80%,差异有统计学意义(P<0.05);卵巢癌组血清PP2A水平下降明显,差异有统计学意义(P<0.01),同时酶活性显著下调,PP2A酶活性仅为正常组的65%,差异有统计学意义(P<0.01)。与卵巢囊肿组相比,卵巢癌组血清PP2A水平下调,差异有统计学意义(P<0.05),酶活性水平下调,差异有统计学意义(P<0.05)。进一步做血清PP2A水平与肿瘤标志物相关性分析,结果显示无论是卵巢囊肿组还是卵巢癌组PP2A与CA125及HE4均无相关性,仅卵巢癌组中CA125和HE4呈正相关(P<0.01)。结论卵巢癌患者血清中PP2A蛋白表达水平显著下降,血清中PP2A水平与CA125及HE4均无相关性,提示血清中PP2A水平可能为卵巢癌独立的危险因素,检测患者血清PP2A水平可早期预测卵巢癌。
- 申复进郑红云刘双王海博许学先
- 关键词：卵巢癌糖链抗原125
- 膀胱无细胞基质复合阴道平滑肌细胞修复兔阴道缺损被引量：2
- 2012年
- 目的探讨膀胱无细胞基质（BACM）复合阴道平滑肌细胞修复兔阴道缺损的可行性，寻求理想的阴道修复材料。方法将24只成年新西兰雌兔按随机数字表法分3组，每组8只，A组用于制备BACM和阴道无细胞基质（VACM），分别在B、c两组新西兰兔获取1cm^2阴道前壁组织，分离培养兔阴道平滑肌细胞，免疫组化染色鉴定。以1×10^7个细胞／cm。种植于BACM和VACM上，体外培养5d后形成VACM-平滑肌细胞复合物[对照组（C组）]和BACM-平滑肌细胞复合物[实验组（c组）]，用于修复兔中段阴道缺损，于移植后3、6、12周观察阴道修复情况。结果制备的BACM和VACM均为白色透明状，HE染色和扫描电镜观察为规则排列的网状胶原纤维，无细胞碎片；体外培养的阴道平滑肌细胞为梭形，呈典型的“峰和谷”样，免疫组化染色示仪-肌动蛋白阳性，种植到BACM和VACM上5h后，均可见部分细胞黏附于无细胞基质上，随时间推移，细胞逐渐增多并伸展成梭形，实验组和对照组移植后3周均可见基质表面已形成完整的上皮层，部分平滑肌细胞长入，移植后6周形成多层复合上皮，平滑肌束明显增多，移植后12周其组织结构与正常阴道组织结构相似，阴道造影证实修复部位阴道宽敞，未见明显狭窄和瘢痕形成，两组组织修复再生情况一致。结论BACM和VACM复合阴道平滑肌细胞修复阴道缺损的组织再生规律基本相同，但BACM来源广泛，具有良好的组织相容性，是一种较好的修复阴道缺损的支架材料。
- 申复进洛若愚张蔚梁华蒋艳萍
- 关键词：膀胱肌细胞平滑肌
- 叶酸受体阳性循环肿瘤细胞在卵巢癌辅助诊断和疗效监测中的应用价值被引量：3
- 2022年
- 目的探讨叶酸受体阳性循环肿瘤细胞(FR^(+)-CTC)在卵巢癌辅助诊断和疗效监测中的临床应用价值。方法回顾性选取31例卵巢癌患者纳入卵巢癌组,同时选取59例健康体检者纳入对照组。比较2组研究对象的外周血FR^(+)-CTC含量,观察不同临床特征卵巢癌患者的FR^(+)-CTC检测结果,比较FR^(+)-CTC与血清肿瘤标志物糖类抗原125(CA125)、人附睾蛋白4(HE4)对卵巢癌的诊断结果,并分析FR^(+)-CTC阳性、CA125阳性卵巢癌患者的分期情况。结果不同年龄、不同分期、不同组织分型、有无远处转移的卵巢癌患者FR^(+)-CTC阳性率比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。卵巢癌组患者治疗前后外周血FR^(+)-CTC含量均高于对照组体检者,差异有统计学意义(P<0.05);治疗后,卵巢癌组患者外周血FR^(+)-CTC含量低于治疗前,但差异无统计学意义(P>0.05)。外周血FR^(+)-CTC诊断卵巢癌的灵敏度为87.10%,分别高于CA125、HE4的灵敏度63.16%、52.38%,差异有统计学意义(χ^(2)=3.934、7.669,P=0.047、0.006),FR^(+)-CTC可作为卵巢癌的早期独立预测因子。Pearson相关性分析结果显示,FR^(+)-CTC与CA125、HE4均无相关性(r=0.280、0.384,P>0.05)。FR^(+)-CTC阳性卵巢癌患者中,Ⅲ~Ⅳ期者占比70.37%,高于Ⅰ~Ⅱ期者的29.63%,差异有统计学意义(P<0.05);CA125阳性卵巢癌患者中,Ⅲ~Ⅳ期者占比91.67%,高于Ⅰ~Ⅱ期者的8.33%,差异有统计学意义(P<0.05);FR^(+)-CTC阳性患者中Ⅰ~Ⅱ期者占比高于CA125阳性患者中Ⅰ~Ⅱ期者占比,差异有统计学意义(P<0.05)。结论卵巢癌患者外周血FR^(+)-CTC含量显著高于健康者,治疗后外周血FR^(+)-CTC含量有所下降,且FR^(+)-CTC对Ⅰ~Ⅱ期卵巢癌的诊断效果相较CA125更佳,提示外周血FR^(+)-CTC可用于卵巢癌的早期诊断和疗效监测。
- 汪莹申复进郑红云冯丹
- 关键词：循环肿瘤细胞叶酸受体卵巢癌
- 犬阴道上皮细胞和平滑肌细胞可在体外长期稳定培养被引量：1
- 2015年
- 背景:体外分离培养获得足够活性良好的种子细胞是构建阴道组织工程的关键。文献报道阴道上皮细胞体外纯化培养和传代较为困难,尤其是体外长期培养犬等大动物的阴道种子细胞尚未见报道。目的:建立体外稳定培养犬阴道上皮细胞和平滑肌细胞方法。方法:获取犬小块阴道组织,机械分离阴道黏膜上皮,Dispase酶和胰蛋白酶分步消化收集上皮细胞,接种于无血清角化细胞培养液中培养和传代;机械分离阴道平滑肌组织后采用Ⅱ型胶原酶消化获得平滑肌细胞,在含体积分数10%胎牛血清的DMEM培养液中连续培养传代。动态观察上皮细胞和平滑肌细胞生长增殖情况,分别采用特异性抗体行细胞免疫化学染色鉴定。结果与结论:原代培养的上皮细胞24-36 h后开始贴壁铺展,四五天后呈对数生长,七八天可达70%融合,为单一的上皮细胞,呈典型铺路石样,未见成纤维细胞混杂。每四五天可传代1次,连续传代六七次,细胞免疫化学染色角蛋白AEl/AE3抗体阳性。平滑肌细胞原代培养24 h后贴壁呈梭形,此后呈对数生长,4 d后融合呈典型的"峰和谷"样,每三四天可传代1次,连续传代七八次,细胞免疫化学染色示α-肌动蛋白染色阳性。结果证实,犬阴道上皮细胞和平滑肌细胞可在体外长期稳定培养,可为体外构建组织工程化阴道提供足够的种子细胞。
- 申复进洛若愚梁华蒋艳萍曹来英
- 关键词：阴道上皮细胞肌细胞平滑肌平滑肌细胞国家自然科学基金
- 上调蛋白磷酸酯酶2A水平可显著抑制宫颈癌细胞迁移被引量：1
- 2018年
- 目的:探讨蛋白磷酸酯酶2A(PP2A)在宫颈癌迁移中的作用。方法:培养Hela宫颈癌细胞,通过药物或质粒转染干预PP2A水平。药物实验中将Hela细胞分为3组,即正常对照组(DMSO处理,n=6),DES组(10nM PP2A激动剂DES处理,n=6)和OA组(10nM PP2A抑制剂OA处理,n=6);质粒转染实验中将Hela细胞分为DsRed-vector组(n=6),DsRed-PP2Ac组(n=6)和DsRed-siPP2Ac组(n=6),按分组要求转染相应质粒。采用划痕实验观察各组不同时间点(药物0h、24h、48h;转染0h、48h)Hela细胞迁移情况并比较组间差异。结果:药物或基因上调PP2A可显著抑制宫颈癌细胞的迁移,而药物或基因下调PP2A水平则明显促进宫颈癌细胞的迁移。结论:PP2A在宫颈癌的发展中起重要的作用,该研究可为宫颈癌的发展提供新的分子机制,亦可为宫颈癌临床药物的开发提供新的靶点。
- 申复进郑红云廖淑梅许学先
- 关键词：宫颈癌细胞迁移
- 过表达人抗菌肽LL37腺病毒构建及转染阴道上皮细胞被引量：2
- 2016年
- 背景:LL-37作为唯一存在人体的抗微生物肽,不仅能促内皮细胞增殖,而且具有较强的促进血管生成能力,在组织修复初期的血管生成中起重要作用。目的:构建过表达人抗菌肽LL37基因的重组腺病毒,体外转染犬阴道上皮细胞,检测抗菌肽LL37的表达和分泌情况。方法:PCR法扩增LL37基因片段,构建融合绿色荧光蛋白(EGFP)和LL37的重组腺病毒表达质粒,限制性内切酶酶切和测序法鉴定构建的重组腺病毒表达质粒,采用HEK293包装后反复冻融扩增、纯化过表达LL37的腺病毒,终点稀释法检测腺病毒滴度。体外分离培养犬阴道上皮细胞,转染过表达LL37腺病毒,分别于转染后1,2,3,5和7 d采用荧光显微镜观察细胞转染情况,ELISA法测定细胞培养上清液中LL37的分泌表达情况。结果与结论:1限制性内切酶酶切鉴定与DNA测序证实成功构建了GV314-LL37腺病毒表达载体,包装纯化后腺病毒滴度达到3×109 pfu/m L;2犬阴道上皮细胞可在体外成功分离培养并稳定传代;3过表达LL37腺病毒可高效转染阴道上皮细胞,转染24 h后荧光显微镜下即可见绿色荧光蛋白表达,随时间延长表达逐渐增强,转染72 h时表达最强,转染效率达89%;4ELISA证实阴道上皮细胞转染过表达LL37腺病毒后表达分泌LL37,转染后细胞培养上清中LL37表达量显著高于空白组,表达呈时间依赖性,转染3 d表达最强,转染后7 d仍持续分泌表达;5结果说明,成功构建了过表达人抗菌肽LL37基因的重组腺病毒,转染犬阴道上皮细胞后高效表达分泌LL37,为构建具有抗感染能力和促血管生成的功能性组织工程化阴道奠定了基础。
- 申复进许学先周利梅
- 关键词：阴道上皮细胞阴道上皮细胞腺病毒转染国家自然科学基金
