国家自然科学基金(30270667)
- 作品数：3 被引量：5H指数：2
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- 相关机构：第四军医大学西京医院第四军医大学更多>>
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- 外源性APMCF1基因转染对人肝癌细胞系细胞生长和细胞周期的影响被引量：1
- 2005年
- 目的:探讨外源性APMCF1基因对人肝癌细胞系(HHCC)细胞生长和细胞周期的影响。方法:将人全长APMCF1基因经脂质体包裹转染肝细胞肝癌HHCC细胞,经G418筛选获得转基因癌细胞克隆,采用半定量RT-PCR方法检测APMCF1的表达情况。通过单四唑(MTT)比色,绘制生长曲线,观察APMCF1基因对HHCC细胞生长的影响,流式细胞仪检测HHCC细胞周期的变化。结果:半定量RT-PCR结果显示,APMCF1基因被成功地转染至HHCC细胞。稳定表达外源性APMCF1基因的HHCC细胞生长速度明显慢于亲代细胞;细胞周期发生明显改变,G1期细胞比例明显增多,S期细胞比例明显减少。结论:外源性APMCF1基因对HHCC细胞生长和细胞周期有明显的抑制作用,可能是一个细胞周期调节基因。
- 李擒龙王文亮晏伟成胜权王文勇张志培
- 关键词：肝细胞肝癌细胞周期
- 一个新的人信号识别微粒受体基因APMCF1的克隆、表达和抗体制备被引量：2
- 2003年
- 目的 :克隆人类新基因APMCF1 ,原核表达并制备其特异性多克隆抗体 .方法 :运用 5′末端快速扩增方法 ,结合Genbank数据库进行电子拼接 ,完善APMCF1的 5′端序列 ;利用RT PCR方法 ,扩增出APMCF1的蛋白编码cDNA序列 ,克隆入pGEX KG中 ,构建APMCF1的原核表达载体 ,在大肠杆菌中诱导表达后获得了GST APMCF1融合蛋白 ,以此融合蛋白为免疫原制备兔抗血清 ,用Westernblot鉴定抗体特异性 .结果 :通过RACE及电子拼接 ,完善了APMCF1的 5′端序列 ,其cDNA长度为 1 74 5bp,与鼠信号识别微粒受体 β亚基序列同源性较高 ,染色体定位于 3q2 2 .2 ;克隆了APMCF1 81 6bp的开放读框序列并表达了GST APMCF1融合蛋白 .制备了特异性兔抗GST APMCF1多克隆抗体 .结论 :APMCF1可能是编码人类信号识别微粒受体β亚基的基因 .该分子多克隆抗体的初步制备 。
- 晏伟王文亮张萍费玲玲
- 关键词：克隆原核表达多克隆抗体
- RNAi技术对APMCF1基因表达的抑制作用及其对HepG2细胞的影响被引量：2
- 2006年
- 目的:采用RNAi抑制APMCF1基因表达,并观察其对HepG2细胞生长和细胞周期的影响。方法:根据APMCF1基因序列及其二级结构特征,设计并合成针对APMCF1基因的siRNA寡核苷酸,经退火形成双链后克隆入pSUNeo载体,并采用脂质体介导法将其稳定转染至人肝癌细胞系HepG2,RT-PCR检测siRNA对靶基因mRNA的抑制效果,然后采用MTT实验、流式细胞仪等对细胞的生长及细胞周期进行观察。结果:HepG2细胞的APMCF1基因表达被成功的抑制。APMCF1基因表达受抑制的HepG2细胞的生长速度加快;细胞周期发生改变,G1期细胞比例减少,S期细胞比例增多,差异具有显著性。结论:HepG2细胞的APMCF1基因表达被成功的抑制。APMCF1基因对HepG2细胞的生长和细胞周期有明显的调节作用,可能是一个侯选的细胞周期调节基因。
- 李擒龙晏伟成胜权王文勇张志培王丽张静王文亮
- 关键词：RNAI肝细胞肝癌细胞生长细胞周期
