国家自然科学基金(81100376) 作品数:5 被引量:25 H指数:3 相关作者: 廖爱军 刘卓刚 杨威 赵成海 王晓彬 更多>> 相关机构: 中国医科大学 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 辽宁省科学技术计划项目 更多>> 相关领域: 医药卫生 文化科学 更多>>
SFRP5在白血病细胞中基因甲基化状态及蛋白表达分析 被引量:1 2012年 目的检测白血病患者标本及细胞系中分泌型卷曲相关蛋白5(SFRP5)基因启动子区域的甲基化状态及蛋白表达情况。方法甲基化特异性PCR(MSP)检测白血病患者及细胞系中SFRP5基因启动子区甲基化状态,亚硫酸盐测序PCR(BSP)方法检测KG1a细胞中SFRP5基因甲基化状态,Western blot方法检测SFRP5蛋白在白血病患者及细胞系中的表达。结果 12例白血病患者标本中有7例发生了SFRP5基因甲基化,6例正常对照标本均未发生SFRP5基因甲基化。4种白血病细胞系(HL-60、Raji、U937、KG1a)中均发生SFRP5基因甲基化。KG1a细胞中SFRP5基因启动子区-394 bp到+99 bp位点的CpG总甲基化频率为82.5%。白血病患者标本中有7例存在SFRP5蛋白表达,6例正常标本存在SFRP5蛋白表达,4种白血病细胞系中未检测到SFRP5蛋白表达。使用去甲基化试剂DAC处理4种白血病细胞系,结果均恢复SFRP5蛋白表达。结论白血病细胞中存在SFRP5基因启动子区甲基化,并导致SFRP5蛋白表达缺失或下调。 王慧涵 张国君 姚鲲 杨威 廖爱军 赵成海 刘卓刚关键词:白血病 基因甲基化 SFRP5基因甲基化通过激活Wnt/β-catenin通路调节白血病细胞MDR1/P-gp的表达 被引量:7 2013年 目的:研究分泌型卷曲相关蛋白5(SFRP5)基因甲基化对耐药白血病细胞多药耐药蛋白1/P-糖蛋白(MDR1/P-gp)表达的调节及其可能的信号通路。方法:采用甲基化特异性PCR(MSP)检测白血病患者及白血病细胞系中SFRP5基因启动子区甲基化状态。采用Western blotting检测非磷酸化β-catenin(NP-β-catenin)在SFRP5基因甲基化白血病患者及细胞系中表达。使用去甲基化试剂5-氮杂-2'-脱氧胞嘧啶(DAC)恢复SFRP5表达,采用RT-PCR和real-time PCR检测处理前后MDR1 mRNA表达,采用Western blotting检测P-gp表达。结果:5/12例白血病患者标本及4种白血病细胞系存在SFRP5基因完全甲基化。在5例患者标本中,有3例(L2、L7和L8)NP-β-catenin水平高于其它标本,在4种白血病细胞系中,KG1a中NP-β-catenin水平高于另外3个细胞系。存在NP-β-catenin高水平表达的3例患者(L2、L7和L8)中检出MDR1 mRNA及P-gp表达。在4种细胞系中,KG1a存在MDR1 mRNA及P-gp表达。使用去甲基化试剂DAC处理L2、L7、L8患者标本和KG1a细胞,恢复SFRP5表达,L2、L7、L8和KG1a中MDR1 mRNA水平均显著下降(P<0.01),P-gp表达水平亦被下调。结论:SFRP5基因甲基化可导致Wnt/β-catenin信号通路被激活,活化的β-catenin激活下游靶基因MDR1转录,编码的药物外排泵P-gp表达增加,促进白血病多药耐药的形成。 王慧涵 胡荣 李迎春 赵成海 杨威 廖爱军 刘卓刚关键词:P-糖蛋白 WNT/Β-CATENIN信号通路 基于微信公众平台的PBL教学在留学生血液疾病教学中的应用 被引量:10 2016年 目的观察基于微信公众平台的以问题为导向(PBL)教学模式在留学生血液系统疾病中的教学效果。方法以临床医学专业的24名留学生为研究对象,随机分为两组,分别接受传统方式教学和微信平台下的PBL教学方式。微信平台下进行理论考试及问卷调查评估教学效果。结果两组教学方式下的理论考试成绩分别为:传统教学组(6.30±1.02)分,PBL组(8.90±0.95)分。教学满意度调查结果为:传统教学组(5.60±0.68)分,PBL组(9.10±0.95)分。教学兴趣度调查结果为:传统教学组(5.00±1.12)分,PBL组(7.90±1.31)分。组间对比,P<0.05,两组教学方式的教学效果差异有统计学意义。结论基于微信平台的PBL教学效果优于传统授课方式。 王慧涵 王晓彬关键词:留学生 血液系统疾病 PBL联合FCM模式在留学生血液疾病教学中的应用 被引量:5 2016年 目的观察以问题为导向(PBL)联合翻转课堂(FCM)教学模式在留学生血液系统疾病中的教学效果。方法以临床医学专业大学三年级30名留学生为研究对象,电脑随机分为两组,分别接受传统方式教学组和PBL联合FCM教学组。课后通过理论考试及问卷调差,评估教学效果。结果 PBL联合FCM组与传统教学组相比理论考试成绩分别为(87.3±25.1)分及(67.7±18.2)分、教学满意度分别为(90.6±18.3)分及(65.2±8.9)分,兴趣度分别为(69.2±24.8)及(40.6±19.6)分,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 PBL联合FCM教学方式在留学生血液系统疾病授课中能够达到更好的教学效果。 王慧涵 廖爱军关键词:留学生 血液系统疾病 SFRP5逆转白血病多药耐药性的研究 被引量:2 2013年 目的:研究分泌型卷曲相关蛋白5(secreted frizzled related protein 5,SFRP5)对P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)介导的白血病多药耐药性的作用。方法:采用转基因方法构建过表达SFRP5的KG1a/SFRP5细胞,real-time PCR检测MDR1 mRNA表达,Western blot检测细胞P-gp表达。免疫荧光显微镜观察细胞膜表面P-gp表达。流式细胞仪检测细胞内药物浓度。MTT方法检测细胞耐药性。结果:与KG1a细胞及表达绿色荧光蛋白的KG1a/eGFP细胞相比,KG1a/SFRP5细胞中MDR1 mRNA水平显著下降(P<0.01),总P-gp表达水平亦被下调,细胞膜表面P-gp荧光强度减弱,细胞内的罗丹明浓度显著升高(P<0.01),对ADR的IC50显著降低(P<0.01),细胞耐药性下降。结论:SFRP5蛋白表达可以下调MDR1转录及P-gp表达,增加细胞内药物浓度,逆转白血病多药耐药。 王慧涵 吴斌 张嵘 刘卓刚 杨威 廖爱军 赵成海关键词:白血病