上海市科学技术委员会基础研究重点项目(043919313)
- 作品数：3 被引量：21H指数：3
- 相关作者：郭美丽张军东张汉明张阵阵冯娜更多>>
- 相关机构：第二军医大学药理学教研室更多>>
- 发文基金：上海市科学技术委员会基础研究重点项目国家自然科学基金国家中医药管理局课题更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 红花cDNA-AFLP反应体系的优化研究被引量：6
- 2008年
- 目的为构建红花的遗传连锁图谱和功能基因的研究,探讨影响红花cDNA扩增片段长度多态性(cDNA amplified fragment length polymorphism,cDNA-AFLP)的各种因素,建立并优化红花cDNA-AFLP反应体系。方法以红花新鲜花瓣为材料,针对其内含物特殊性对Trizol法加以改进提取RNA,采用无RNase H活性的鼠源反转录酶(M-MLV RTase)结合置换合成法反转录双链cDNA;两步法酶切与连接,优化酶切时间;连接产物和预扩产物分别设置不同稀释倍数扩增并对选扩反应体系略微调整后,用6%的聚丙烯酰胺凝胶(PAGE)电泳分离,银染检测。结果改进Trizol法得到的红花总RNA样品较为完整,纯度较高,可直接用于双链的合成;经无RNase H活性反转录酶结合置换合成法得到高质量的cDNA模板。建立优化后的红花cDNA-AFLP体系为:250ng cDNA 37℃6 h经限制性内切酶MseI和EcoRI完全酶切,16℃连接12 h;连接产物最佳稀释倍数为10倍;预扩产物稀释为150倍;PAGE电泳得到清晰、稳定、分辨率较高的多态性条带。结论本研究建立的反应体系适用于红花功能基因的cDNA-AFLP研究。
- 冯娜郭美丽张汉明
- 关键词：红花CDNA-AFLP
- 红花RAPD和AFLP分子标记技术多态性效率比较被引量：10
- 2007年
- 目的探讨RAPD和AFLP这两种分子标记技术应用于红花不同品系多态性效率的比较。方法以河南无刺大红袍和若羌有刺白两个红花品系为材料，应用100条RAPD引物、64对AFLP引物，对两品系进行多态性筛选，初步确定反映品系间差异的引物。结果筛选到RAPD特异性引物共5条，分别为AA52726、AA52729、AA52739、AA52766、AA52785，在两品系间扩增到稳定的差异片段；筛选到AFLP特异性引物共7对，分别为AF26356、AF26372、AF26385、AF26311、AF26396、AF26327、AF26343，在两品系间扩增到稳定的差异片段。结果表明，平均每条RAPD引物可以扩增出红花基因组片段数目4～10条，多态性选出率为O．20％；平均每对AFLP引物可以扩增出红花基因组片段数目为50～80条，多态性选出率为O．31％。就每条（对）引物平均可以扩增出多态性条带的数目而言，RAPD引物为1～2条，AFLP引物组合则4～5条，AFLP的检测效率明显高于RAPD。结论在红花的分子标记研究中，AFLP较RAPD为更有效的分子标记。
- 张阵阵郭美丽张军东张汉明
- 关键词：红花RAPDAFLP分子标记
- 红花基因组扩增片段长度多态性反应体系的建立和优化被引量：6
- 2006年
- 目的:探讨影响红花扩增片段长度多态性(amp lified fragm ent length polymorph ism,AFLP)的各种因素,建立并优化红花AFLP反应体系,为研究红花品质性状的遗传基础及建立分子辅助标记育种的技术平台奠定基础。方法:CTAB法提取红花基因组DNA,用Beckm an紫外可见分光光度计测定样品DNA浓度与纯度质量(D值);检测后分别进行一步法酶切与连接,或两步法酶切与连接,以检测哪种方法更适合;酶切连接产物设置不同的稀释倍数(5倍、10倍、15倍、20倍、25倍和30倍)进行预扩增,预扩增产物设置不同稀释倍数(10倍、25倍、50倍、75倍、100倍、150倍和200倍)进行选择性扩增;选择性扩增产物95℃变性8 m in后,用6%的聚丙烯酰胺凝胶电泳分离,银染检测。结果:本研究建立适用于红花的AFLP体系:用乙醇沉淀DNA,建立的模板不含PCR反应抑制剂及其他酶反应抑制剂,可被限制性内切酶M seⅠ和EcoRⅠ完全酶切;确定两步法进行酶切、连接,酶切时间为37℃3 h,连接16℃过夜,缓冲液采用NEB公司Buffer 2;预扩增产物最佳稀释倍数为25倍;选择性扩增最佳稀释倍数为75倍;上述建立的AFLP反应体系,PAGE电泳中主带清晰,没有降解。结论:本研究建立的反应体系适用于红花基因组DNA的AFLP研究。
- 张阵阵郭美丽张军东
- 关键词：红花基因组植物扩增片段长度多态性
