国家自然科学基金(30270647)
- 作品数：3 被引量：3H指数：1
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- 人肝癌高增殖率细胞筛选及致瘤特性分析
- 2010年
- 目的分离培养人肝癌组织中的高增殖率细胞并观察其生物学特性。方法无菌采集人肝细胞癌组织,切成1mm×1mm×1mm组织块并置于裸鼠肾包膜下生长3w;相同方法反复体内传代3次后,将组织块剪碎,胶原酶消化分离为单细胞悬液,接种于培养瓶中,用阿霉素(Adm)5mg/L处理72h获得抗药细胞。通过体外培养和体内生长观察该细胞的生长规律;用免疫细胞化学染色观察其表达C-kit、CD133和甲胎蛋白(AFP)的情况。结果原代肝癌细胞直接分离培养生长较缓慢,经体内传代3次后,分离培养获得生长良好细胞,再经抗肿瘤药物阿霉素共培养后,获得耐Adm细胞。经体内生长特性观察发现,Adm筛选后,相同数量细胞的致瘤生长速度升高。经免疫组化染色分析发现,筛选后的细胞表达C-kit、AFP、CD133。结论通过组织块体内传代、体外抗癌药物筛选,初步获得表达肝干细胞标志性抗原的高致瘤性细胞。
- 潘兴华魏洪林郭中敏庞荣清蔡学敏
- 关键词：肝癌致瘤性
- 端粒酶催化亚基基因在小鼠胚胎发育早期的转录活性
- 2005年
- 用RT-PCR引物分别扩增成年昆明(KM) 小鼠睾丸、脾脏、肾脏、肝脏和胸腺组织的总RNA发现,端粒酶催化亚基基因tert在这些组织中都有转录,目标产物正确组装到PMD 18-T载体后测序,结果与已知cDNA序列一致. PMSG/hCG超数排卵方法获得KM小鼠成熟卵母细胞和CZB溶液体外培养的胚胎(KM ♀×KM♂),用酸性Tyrode蒺s溶液消化透明带后,采用巢式RT-PCR,同时分析tert基因和持家基因hprt的转录发现,对于单个样品来说, 全部卵母细胞(15 h-post hCG,10/10) 都存在hprt转录本,其中,只有40%(4/10) 还同时存在tert转录本. 原核形成初期(20 h-post hCG,6/6) 和原核晚期(30 h post-hCG,8/8) 的受精卵,以及发育至2-C早期的胚胎(35 h-post hCG,7/7) 都不转录tert基因,只有hprtmRNA存在;2-C晚期(50 h-post hCG)时,两个基因同时转录(4/8)和一个基因单独转录(4/8)的胚胎各占50%;从4-C阶段(65 h-post hCG,4/4)开始,包括8-C阶段(75 h-post hCG,4/4),桑椹胚阶段(93 h-post hCG,4/4),直至囊胚阶段(118 h-post hCG,4/4),所有的胚胎都同时转录tert和hprt基因,而且转录水平明显升高. 以20枚胚胎量为模板进行RT-PCR发现,原核早期,原核晚期的胚胎中仍然没有tert基因转录,只有hprtmRNA,但是,在2-C早期胚胎中同时检测到了hprt和tert两种mRNA. ?
- 王宇姚慧安晓荣陈永福苟克勉
- 关键词：胚胎HPRT基因端粒酶
- 成年体细胞克隆的绵羊
- 分别以体外培养并且用0.5%FBS饲养的美利奴成年母羊的颗粒细胞和Dorset成年绵羊的耳朵细胞为供体,与体外成熟的去核卵母细胞融合后,Ionomycin/6-DMAP激活的重构胚胎用SOF溶液培养7天后.结果颗粒细胞组...
- 苟克勉安晓荣关宏侯健陈永福
- 关键词：体细胞核移植玻璃化胚胎移植
- 文献传递
