北京市自然科学基金(7072080)
- 作品数：14 被引量：49H指数：4
- 相关作者：丁洁范青锋苗静刘淑芳管娜更多>>
- 相关机构：北京大学第一医院北京大学第三医院更多>>
- 发文基金：北京市自然科学基金国家自然科学基金“十一五”国家科技支撑计划更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 激素耐药性肾病伴泌尿生殖器异常患儿的临床特点及形WT1基因分析被引量：5
- 2008年
- 目的分析激素耐药性肾病伴泌尿生殖器异常患儿的临床特点、WT1基因及足细胞分子表达，提高对WT1基因突变在该类疾病的重要致病作用的认识。方法收集3例激素耐药性肾病伴有或怀疑有泌尿生殖器异常的患儿。采用PCR及RT—PCR的方法分析WT1基因及＋KTS（赖氨酸-苏氨酸-丝氨酸）／-KTS比例；采用间接免疫荧光及免疫组化的方法进行足细胞分子（nephrin，podocin，α-acfinin4，WT1及CD2AP）表达。结果3例患儿发病年龄分别为6个月、1岁及10岁；2例为男性伴泌尿外生殖器异常，1例为男性假两性畸形；临床均表现激素耐药肾病，2例肾脏病理为局灶节段性肾小球硬化。2例检测到WT1突变，即WT1 IVS9＋5G〉A和WT1外显子91186G〉A杂合突变。足细胞分子在WT1突变肾组织表达发生改变；1例无WT1表达，1例WT1在足细胞细胞核内的分布与正常对照不同。结论对于激素耐药性肾病的女性患者或伴有泌尿生殖器异常的男性患者应行染色体核型和WT1基因分析。WT1突变除可能引起＋KTS／-KTS比例异常，还伴有足细胞分子表达异常，从而导致蛋白尿的形成和（或）发展。
- 李建国赵丹丁洁肖慧捷范青锋管娜陈彦张宏文
- 关键词：肾病综合征激素耐药WT1足细胞
- 瞬时受体电位阳离子通道蛋白6过表达致足细胞足突形态改变的形态计量学分析被引量：4
- 2010年
- 目的:定量研究足细胞过表达瞬时受体电位阳离子通道蛋白6(TRPC6)引起足细胞足突形态变化的特征。方法:建立足细胞过表达TRPC6的细胞模型,设立正常对照组(Con)、转染空载体组(GFP)和过表达TRPC6组(OverTRP),并分别给予TRPC6离子通道特异性激动剂OAG和阻断剂U73122处理足细胞;免疫荧光染色后采用激光扫描共聚焦显微镜摄片,图像分析仪进行分析,并应用形态计量学的方法,分别检测足细胞足突的表面积密度、突触长径和足突平均宽度,以研究TRPC6通道蛋白高表达所引起的小鼠足细胞足突的形态变化。结果:共聚焦成像分析结果可见,足细胞过表达TRPC6后,足突表现出回缩的形态特点。形态计量学的结果进一步表明,过表达TRPC6的足细胞足突表面积密度减小(OverTRP:500.97±98.25vsCon:915.5±130.83,P<0.05)、突触长径缩短(OverTRP:58.32±5.41vsCon:91.41±9.13,P<0.05)、平均宽度缩短(OverTRP:7.97±2.64vsCon:12.43±1.47,P<0.05),与对照组比较统计学差异均有显著性(P<0.05);其中过表达组突触长径与对照组比较差异最为显著(P<0.05)。结论:足细胞离子通道蛋白TRPC6的过表达,可诱导足细胞足突形态发生改变,表现为足突回缩,可能是参与蛋白尿发生的形态学基础,为今后对该通道蛋白功能与相关分子间作用的研究提供了实验形态依据。
- 姜丽娜丁洁管娜苗鸿才冯泉城苗静范青锋
- 关键词：足细胞形态计量学
- 瞬时受体电位阳离子通道蛋白6在肾脏的表达被引量：4
- 2007年
- 目的探讨瞬时受体电位阳离子通道蛋白6(TRPC6)在正常人、小鼠和大鼠肾组织及小鼠足细胞系(MPC5)的表达和分布,为研究TRPC6在肾脏的功能及其与足细胞分子间的关系奠定基础。方法1.应用免疫组织化学方法观察TRPC6在正常人、小鼠和大鼠肾组织及MPC5分布。2.通过反转录酶-聚合酶链反应(RT-PCR)检测TRPC6在小鼠肾组织和MPC5表达。3.应用免疫蛋白印迹检测TRPC6在正常人、小鼠和MPC5表达。结果1.TRPC6在正常人肾小球呈弱表达,在肾小管和肾血管表达较强,在小鼠和大鼠主要沿肾小球毛细血管袢和系膜区分布,肾间质也有少许表达。TRPC6在MPC5的荧光染色为阳性,在分化态细胞主要分布于胞膜表面。2.在小鼠肾组织及MPC5均检测到特异性TRPC6的PCR产物条带。3.在正常人、小鼠肾组织及MPC5均检测到特异性的相对分子质量为106的TRPC6蛋白条带。结论TRPC6在正常人、小鼠和大鼠肾小球均有表达,在mRNA及蛋白水平均证实MPC5能表达TRPC6,为从离子通道的角度利用MPC5探讨蛋白尿发生的分子机制奠定基础。
- 范青锋邢燕刘淑芳张涵丁洁
- 关键词：肾脏足细胞
- 细胞周期调节蛋白在肾小球足细胞损伤中的作用被引量：3
- 2009年
- 蛋白尿是肾脏疾病常见的临床表现之一，也是进展至肾衰竭的独立危险因素。肾小球滤过屏障结构或功能异常是蛋白尿发生的重要原因。裂孔隔膜（SD）靠近肾小球基底膜外侧，是毗邻足细胞足突之间相互交叉形成的一层膜性结构，其组成分子nephrin、podocin和CD2AP以及离子通道蛋白TRPC6的发现进一步证实SD在肾小球滤过屏障中起关键作用。
- 苗静范青锋丁洁
- 关键词：细胞周期调节蛋白肾小球滤过屏障NEPHRINPODOCIN肾小球基底膜CD2AP
- 邻苯三酚红钼络合法与双缩脲比色法测定嘌呤霉素肾病大鼠尿中总蛋白浓度的比较被引量：6
- 2009年
- 目的:探讨临床上新近推广的邻苯三酚红钼络合法与双缩脲比色法的相关性和偏倚,旨在评价其测定大鼠尿蛋白的可靠性,以建立一种快速、简便、可靠的大鼠尿蛋白测定方法。方法:收集15例正常对照大鼠以及35例不同时间点嘌呤霉素肾病大鼠24h尿液标本,采用双缩脲比色法和邻苯三酚红钼络合法进行尿总蛋白定量,结果分别采用Pearson相关、Passing-Bablok回归和Cusum方法检测回归偏倚,偏倚分析采用Bland-Altman法。结果:Pearson相关性分析结果显示,邻苯三酚红钼络合法测定值与双缩脲比色法测定值显著相关(r=0.9942,P<0.0001)。Passing-Bablok回归分析显示,邻苯三酚红钼络合法测定值与双缩脲比色法测定值的回归方程为Y=1.0922X-0.3771(Y表示双缩脲比色法,X表示邻苯三酚红钼络合法),线性回归的Cusum检验证实线性回归偏倚无统计学意义(P>0.05),Bland-Altman偏倚分析结果示,邻苯三酚红钼络合法与双缩脲比色法测定值的平均偏倚为-0.1。结论:邻苯三酚红钼络合法具有灵敏度高、重复性好、标本用量少、样品不需要预处理并适用于自动化分析的特点,推荐该法应用于尿量有限的大鼠尿液总蛋白的测定。
- 苗静王学晶徐国宾范青锋丁洁
- 关键词：肾病尿蛋白定量
- 足细胞表面血管内皮细胞生长因子受体
- 2008年
- 刘淑芳范青锋丁洁
- 关键词：足细胞内皮细胞生长因子受体
- 第7届国际足细胞会议概述被引量：3
- 2008年
- 第7届国际足细胞会议（International Podocyte Meeting）于2008年6月4日至6日在加拿大多伦多举行。来自10余个国家的近200名代表参加了此次盛会。我国南京军区总医院解放军肾脏病研究所的刘志红院士和北京大学第一医院儿科的范青锋医师出席了会议。多伦多大学Mount Sinai医院和Samuel Lunenfeld研究所的Susan E．Quaggin担任本次会议主席。多伦多大学医学部主任Catharine Whiteside女士致开幕词。本次大会就足细胞在肾小球疾病研究中的最新进展进行了交流，内容涵盖有关足细胞生物学的各个领域，旨在促进不同国家和地区间足细胞研究专家的合作与交流，以进一步理解足细胞在肾小球疾病蛋白尿发生机制中的重要作用。
- 范青锋
- 关键词：足细胞肾小球疾病细胞生物学
- 足细胞上血管紧张素受体的研究进展被引量：2
- 2008年
- 血管紧张素受体（ATR）属于细胞膜受体的一种，是肾素-血管紧张素系统（RAS）中重要的作用靶点，主要通过与血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）结合而发挥效应。目前研究发现AngⅡ的受体有ATIR和AT2R两型。在肾脏中ATIR分布广泛，其作用占主导地位，主要表现为刺激肾脏血管收缩和促进肾小管尿钠重吸收。AT2R则在胚胎中较为丰富，出生后AT2R的数量也逐渐下降到较低水平，在成人肾组织中，AT2R只占ATR的5％～10％。近年来随着对肾小球足细胞功能和结构研究的深入，发现在足细胞膜表面存在ATR。
- 刘淑芳范青锋丁洁
- 关键词：血管紧张素受体肾素-血管紧张素系统足细胞细胞膜受体作用靶点血管收缩
- 一岁内起病肾病患儿的临床及遗传学特点被引量：2
- 2009年
- 肾病综合征（NS）是儿科常见的肾脏疾病，其中1岁内起病肾病患儿属于早发肾病，与晚发肾病相比较，早发肾病具有一系列更加特殊的问题：在病因方面，由于肾穿刺困难，不容易获得相关的病理诊断；在治疗方面，使用激素和免疫抑制剂都会面临更多的副作用和并发症；在预后方面，较晚发肾病差。近年来，随着分子遗传学的进展，相继发现一系列与先天性／遗传性肾病相关的基因，
- 李建国肖慧捷丁洁
- 关键词：遗传学特点患儿免疫抑制剂分子遗传学遗传性肾病肾脏疾病
- 嘌呤霉素致足细胞损伤细胞模型的建立被引量：7
- 2008年
- 目的:建立小鼠足细胞损伤的细胞模型,为进一步从细胞、分子水平研究足细胞的生物学作用,以及足细胞特别是裂孔隔膜(slit diaphragm)分子在蛋白尿发生、发展中的分子机制提供稳定、可靠的足细胞损伤模型。方法:应用不同浓度的嘌呤霉素(15mg/L、45mg/L和75mg/L)作用于足细胞,通过流式细胞仪检测作用24h和48h后足细胞的凋亡情况,以确定嘌呤霉素的作用浓度和时间,建立足细胞损伤的细胞模型;并以噻唑蓝(MTT)检测足细胞损伤后的活力,应用免疫荧光染色观察裂孔隔膜关键分子Nephrin、Podocin以及骨架蛋白F-actin在足细胞损伤中的分布来评价足细胞损伤。结果:45mg/L嘌呤霉素作用48h以及75mg/L嘌呤霉素作用24h或48h,足细胞明显凋亡。结论:嘌呤霉素可以呈时间和剂量依赖性诱导小鼠足细胞凋亡,45mg/L嘌呤霉素作用48h后诱导的足细胞损伤模型稳定、可靠,可应用于足细胞损伤的研究。
- 刘淑芳丁洁范青锋张涵
- 关键词：足细胞嘌呤霉素细胞凋亡
