教育部科学技术研究重点项目(211177)
- 作品数：5 被引量：40H指数：3
- 相关作者：张大为张岗郭顺星宋超赵明明更多>>
- 相关机构：陕西中医药大学中国医学科学院北京协和医学院北华大学更多>>
- 发文基金：陕西省科学技术研究发展计划项目教育部科学技术研究重点项目陕西省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学更多>>
- 铁皮石斛鲨烯合酶基因的克隆及其组织表达模式分析被引量：9
- 2013年
- 【目的】克隆珍稀濒危兰科药用植物铁皮石斛（DendrobiumofficinaleKimuraetMigo）鲨烯合酶（Squalenesynthase，SS）基因（DoSS），并对其进行生物信息学与组织表达模式分析，为研究其生物学功能提供参考。【方法】采用RT—PCR和RACE技术，获得DoSS基因全长序列；利用生物信息学软件预测DoSS蛋白的理化性质、结构域及亚细胞定位等分子特性；用DNASTAR6．0和MEGA4．0分别进行DoSS蛋白氨基酸多序列比对和进化关系分析；借助qPCR检测DoSS基因的组织表达模式。【结果】成功克隆获得铁皮石斛鲨烯合酶基因，命名为DoSS（GenBank注册号JX272631），其cDNA全长1735bp，编码一条由410个氨基酸组成的多肽，分子质量46．99ku，等电点7．13；DoSS蛋白含有鲨烯／八氢番茄红素合成酶保守结构域（44—315位氨基酸）；DoSS与其他多种植物SS基因的编码蛋白同源性很高（61％～75％），与水稻、玉米等单子叶植物的亲缘关系较近；DoSS基因为组成型表达，在根中的表达量最大，为叶的12．41倍；茎次之，为叶的1．87倍。【结论】成功克隆得到1个鲨烯合酶基因（DoSS）全长cDNA；DoSS基因的（在根中高）表达特征暗示，其可能在铁皮石斛根的生长发育中发挥重的调控功能。
- 张岗唐志书周莉英刘清李依民张小飞吕欣
- 关键词：铁皮石斛鲨烯合酶基因克隆结构域萜类
- 珍稀濒危药用铁皮石斛HMGR基因的克隆和特征分析被引量：20
- 2014年
- 3-羟基-3-甲基戊二酸单酰辅酶A还原酶（3-hydroxy-3-methylglutarylcoenzyme—Areductase，HMGR）是甲羟戊酸途径中的第一个限速酶，在植物细胞萜类物质合成代谢过程中发挥重要作用。但是，HMGR基因在珍稀濒危兰科药用植物铁皮石斛类萜生物合成途径中的作用尚不清楚。本研究利用RT-PCR和RACE技术，首次从铁皮石斛中克隆到一个HMGR基因，命名为DoHMGRl（GenBank注册号JX272632）。DoHMGRl基因eDNA全长2071bp，编码一条由562个氨基酸组成的多肽，分子量59-73kD，等电点6-18。DoHMGRl蛋白包含HMGR蛋白家族的4个保守结构域（63-561、147-551、268-383、124-541）和两个跨膜基序（42-64、85～107）。DoHMGR1基因与多种植物HMGR基因相似性很高（67％～89％），与万代兰、水稻、玉米等单子叶植物亲缘关系较近。DoHMGR1基因具有组织表达特异性，其转录本在石斛根和茎中表达量较高，为叶中的2-13和1-98倍。DoHMGR1基因的分子鉴定为进一步解析该基因在铁皮石斛萜类物质合成代谢途径中的分子调控作用奠定基础。
- 张琳王继涛张大为张岗郭顺星
- 关键词：铁皮石斛基因表达实时定量PCR
- 铁皮石斛M型硫氧还蛋白基因的分子特征被引量：3
- 2013年
- 利用RT-PCR和RACE技术,从珍稀濒危兰科药用植物铁皮石斛中分离到1个编码M型硫氧还蛋白(TRX)基因cDNA全长,命名为DoTRXm1(GenBank注册号KC178573)。序列分析结果表明,DoTRXm1基因长850bp,ORF(570bp)编码1条由189个氨基酸组成的肽链,分子量20.32kD,等电点9.44;DoTRXm1蛋白具有保守的硫氧还蛋白结构域(第87～187位氨基酸)和催化位点(106～124)。多序列比对和系统进化分析结果显示,DoTRXm1与植物M型TRXs基因有较高相似性(53%～70%),与水稻、玉米以及高粱等单子叶植物TRXs聚在1个分支,隶属于M型TRXs基因进化系统的Ⅱ类群。实时定量PCR分析显示,DoTRXm1基因为组成型表达,其转录本在石斛根中的相对表达量较高,为叶中的5.63倍,茎中次之(2.35倍),叶中最低。该研究为进一步解析DoTRXm1在铁皮石斛生长发育、逆境胁迫等过程中的生物学功能奠定基础。
- 张岗唐志书李依民沈霞孙静张朋
- 关键词：铁皮石斛硫氧还蛋白基因表达实时定量PCR
- 铁皮石斛类唾液酸转移酶基因的分子鉴定被引量：2
- 2013年
- 利用RT-PCR和RACE技术,从珍稀濒危药用植物铁皮石斛(Dendrobium officinale)中分离到一个类唾液酸转移酶(sialyltransferase-like proteins,STLP)基因,命名为DoSTLP1(GenBank注册号KC178574)。序列分析结果表明,DoSTLP1基因全长cDNA为1 340bp,编码1条由367个氨基酸组成的肽链,分子量41.66kD,等电点8.64;DoSTLP1蛋白具有唾液酸转移酶和糖基转移酶29家族的保守结构域(分别为1～357,87～346位氨基酸)、信号肽(1～27)和跨膜结构域(3～25,285～311)。多序列比对和系统进化结果显示,DoSTLP1与多种植物的STLPs基因有较高的相似性(44.7%～53.7%),而且与水稻、玉米等单子叶植物STLPs基因的亲缘关系较近。实时定量PCR分析显示,DoSTLP1基因在铁皮石斛根、茎、叶器官中为组成型表达,其转录本在石斛根中的相对表达量较高,为叶中的2.857倍,茎和叶中的表达量无显著差异。该研究为进一步解析该基因在铁皮石斛生长发育过程中的生物学功能奠定基础。
- 张岗王昌利李依民沈霞刘清
- 关键词：铁皮石斛基因表达分子鉴定
- 铁皮石斛促分裂原活化蛋白激酶基因DoMPK1的克隆及特征分析被引量：18
- 2012年
- 促分裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)及其级联途径在根瘤、从枝菌根宿主植物共生体系中起重要调控作用。然而,MAPK在兰科菌根共生体系中的作用机制尚不明确。本研究利用RT-PCR、RACE方法,首次从小菇真菌(Mycena sp.)侵染的铁皮石斛根中克隆到一个促分裂原活化蛋白激酶基因,命名为DoMPK1(GenBank注册号JX297594)。DoMPK1基因cDNA全长1 632 bp,编码一条由372个氨基酸组成的肽链,分子量42.61 kD,等电点6.07。DoMPK1蛋白包含MAPK蛋白家族保守的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶催化结构域(39 325)和MAP激酶的保守位点(77-177)。DoMPK1与多种植物MAPK基因高度同源(71%～85%),与单子叶植物MAPK基因亲缘关系较近。DoMPK1为组成型表达,其转录本在石斛根、茎、叶和种子等4种组织中的相对表达量差异不显著。在小菇真菌侵染30天的根中,DoMPK1显著上调,为对照根中的7.91倍,表明DoMPK1可能在小菇真菌铁皮石斛菌根共生早期互作过程中起作用。本研究为进一步解析DoMPK1在小菇真菌铁皮石斛菌根共生中的分子作用奠定基础。
- 张岗赵明明宋超张大为李标郭顺星
- 关键词：铁皮石斛激酶基因表达
