浙江省医药卫生科学研究基金(2007A037)
- 作品数：2 被引量：4H指数：1
- 相关作者：朱敏张政金大智叶菊莲罗芸更多>>
- 相关机构：浙江省疾病预防控制中心更多>>
- 发文基金：浙江省医药卫生科学研究基金艾滋病和病毒性肝炎等重大传染病防治专项更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 荧光定量PCR结合TaqMan-MGB检测食品中空肠弯曲菌被引量：1
- 2009年
- 目的:基于TaqMan-MGB探针的荧光定量PCR技术,研发出一种定量检测食品污染物中空肠弯曲菌的方法,为食品污染物调查提供快速、可靠的监测工具。方法:根据TaqMan-MGB探针原理,在空肠弯曲菌基因组保守区设计引物和探针,探针的5′端用FAM荧光标记,3′端标记MGB,建立基于TaqMan-MGB探针的实时荧光定量PCR方法。并对其特异性、灵敏度、重复性进行评价,然后对收集的市场食品污染物调查样本进行检测,与常规方法做对照。结果:所建立的实时荧光定量PCR方法可准确、特异的检测空肠弯曲菌,最低检测限为10 cfu/ml;对50例市场污染物调查样本进行评价,结果显示6份食品污染物调查样本中空肠弯曲菌为阳性,其余为阴性,结果与常规培养检测结果一致。结论:空肠弯曲菌TaqMan-MGB探针荧光定量PCR方法具有结果可靠、操作简便等优势,比目前常规检测方法更灵敏,该方法可用于食物污染物调查、临床检验等多个方面。
- 金大智程苏云张政朱敏罗芸叶菊莲
- 关键词：实时荧光定量PCR空肠弯曲菌
- 多重实时荧光定量PCR检测肠出血性大肠杆菌O157：H7被引量：3
- 2009年
- 目的利用多重荧光定量PCR技术，建立一种快速、准确、特异检测肠出血性大肠杆菌O157：H7的定量方法。方法选取肠出血性大肠杆菌O157：H7编码脂多糖基因（rfoE）和编码鞭毛抗原基因（fliC）作为检测的靶基因，设计引物和TaqMan—MGB探针，探针的5’端分别用FAM和HEX进行荧光标记，3’端标记MGB。优化PCR扩增体系，对多重实时荧光定量PCR方法的特异性、灵敏度、重复性评价，同时进行一定数量临床样本鉴定，与常规方法进行比较。结果本研究所建立的多重实时荧光定量PCR方法可准确、特异地检测和鉴定肠出血性大肠杆菌O157：H7，能够有效甄别肠出血性大肠杆菌O157：H7与非H7菌株，其他菌株均无阳性结果；该方法的灵敏度可达到10CFU／ml；定量检测的批间和批内变异系数均小于5％；对66例临床样本进行评价，结果显示15例肠出血性大肠杆菌O157：H7阳性，2例为肠出血性大肠杆菌O157：非H7阳性，其中16例与常规培养法结果符合，符合率达到98．49％。结论本研究建立的检测肠出血性大肠杆菌O157：H7多重实时荧光定量PCR方法快速，结果准确、可靠，操作简便，为肠出血性大肠杆菌O157：H7的临床诊断、现场流行病学调查和食品安全监测提供了新的鉴定方法。
- 金大智张政罗芸程苏云朱敏叶菊莲
- 关键词：肠出血性大肠杆菌O157:H7靶基因
