北京市自然科学基金(7072078)
- 作品数：4 被引量：13H指数：2
- 相关作者：石炳毅蔡明钱叶勇郑德华洪宝发更多>>
- 相关机构：中国人民解放军总医院军事医学科学院更多>>
- 发文基金：北京市自然科学基金“十一五”国家科技攻关计划解放军总医院科技创新苗圃基金更多>>
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- 负向免疫调节树突状细胞对心脏移植大鼠免疫状态的影响被引量：1
- 2009年
- 目的探讨经体外光化学法（PUVA）处理的供者脾淋巴细胞与受者树突状细胞（DC）共培养后，对移植受者体液免疫、细胞免疫及移植物排斥反应的影响。方法以DA大鼠为供者，LEW大鼠为受者，建立大鼠腹部异位心脏移植模型。分离供者脾淋巴细胞（SP），制备经PUVA处理的供者脾淋巴细胞（PUV～SP）。在体外分别将供者PUVA-SP和SP与受者骨髓来源的未成熟DC共培养，得到PUVA-SP-DC及SP-DC，流式细胞仪检测上述DC表型。根据受者心脏移植术前1周静脉输注成分的不同，将受者随机分为3组：（1）对照组（n=7）：单纯输注磷酸盐缓冲液（PBS）；（2）SP—DC组（n=8）：输注SP-DC5×10^6个；（3）PUVA—SP-DC组（n=8）：输注PUVA—SPDC5×10^6个。每日观察各组移植心的存活状况。移植后第6天，检测受者血清中抗供者特异性IgG水平；通过混合淋巴细胞反应（MLR）检测受者脾脏T淋巴细胞对供者抗原刺激的增殖反应；比较各组受者脾脏体积的大小。结果供者脾淋巴细胞经PUVA处理后细胞凋亡率为81．93％。正常LEW大鼠DC共刺激分子CD80和CD86阳性率分别为（3．5±0．27）％和（13．0±0．58）％，受者DC与供者SP混合培养后，其CDS0和CD86的表达水平为（16．6±0．72）％和（36．5±0．87）％，后者明显高于前者（P〈0．01）；受者DC与供者PUVA～SP混合培养后，其CD86和CDS0的表达率分别为（3．9±0．12）％和（13．4±0．59）％，与正常LEW大鼠DC相当（P〉0．05）。PUVA-SP—DC组的受者抗供者特异性IgG水平明显低于SP—DC组及对照组（P〈0．01）。PUVA—SP-DC组受者T淋巴细胞对供者抗原的刺激反应指数为1．66±0．29，明显低于SP-DC及对照组（7．28±0．38、4．19±0．16，P％0．01）；而其对无关供者抗原的刺激反应指数为4．37±0．11，与SP-DC及对照组相当（4．51±0．40、4．36±0．14，P〉0．05）。PUVA-SP—DC组�
- 郑德华石炳毅邹一平杜国盛蔡明钱叶勇史迎昌黎立
- 关键词：树突细胞心脏移植抗体生成
- 负向免疫调节树突细胞对心脏移植大鼠Th1/Th2类细胞因子的影响被引量：7
- 2009年
- 目的探讨受体树突细胞(DC)与体外光化学法(PUVA)处理的供体脾淋巴细胞共培养后,对心脏移植受体Th1/Th2类细胞因子及移植物存活的影响。方法以DA大鼠为供体,LEW大鼠为受体,建立大鼠腹部异位心脏移植模型。分离正常的供体脾淋巴细胞(SP),制备经PUVA处理的供体脾淋巴细胞(PUVA-SP)。在体外将PUVA-SP或SP与受体骨髓来源的未成熟DC共同培养,检测上述处理对受体DC分泌白介素-10(IL-10)及干扰素-γ(IFN-γ)的影响。按受体术前1周静脉输注的细胞成分将受体大鼠随机分为3组:对照组(n=7),单纯输注PBS;SPDC组(n=8),输注负载供体SP的受体大鼠DC;PUVA-SPDC组(n=8),输注负载PUVA处理的供体SP的受体大鼠DC。观察移植物的存活时间,移植术后6d检测受体血清中Th1细胞因子(IL-2、IFN-γ)及Th2细胞因子(IL-10),并取移植心脏标本作切片检查,确定排斥反应的病理分级。结果受体DC与供体PUVA-SP共培养后,其分泌的细胞因子IL-10、IFN-γ的水平分别为75.3±3.7、24.3±1.2ng/ml,明显高于同供体SP共培养后的受体DC(分别为39.0±3.1ng/ml、12.1±0.5ng/ml,P<0.01)。心脏移植术后,PUVA-SPDC组受体大鼠血清中Th1细胞因子IL-2和INF-γ的浓度分别为199.3±8.4、9.0±1.2ng/ml,明显低于对照组(分别为295.0±3.2、61.0±3.2ng/ml,P<0.01)及SPDC组(分别为559.3±35.3、69.0±2.3ng/ml,P<0.01),而其Th2细胞因子IL-10水平(58.2±0.9ng/ml)明显高于对照组(19.0±0.6ng/ml,P<0.01)及SPDC组(20.1±1.6ng/ml,P<0.01)。PUVA-SPDC组移植物排斥反应病理分级明显低于对照组,而对照组移植物排斥反应病理分级则低于SPDC组。与对照组(6.7±0.3d)比较,PUVA-SPDC组移植物存活时间(27.3±1.3d)显著延长(P<0.01),而SPDC组移植物存活时间短于对照组(5.5±0.3d,P<0.05)。结论PUVA-SPDC具有负向免疫调节特性,能够在移植物受体体内诱导Th2免疫偏移,下调移植物排斥反应。
- 郑德华石炳毅邹一平蔡明钱叶勇史迎昌黎立洪宝发窦立萍
- 关键词：树突细胞心脏移植免疫偏移
- 大鼠原位肝移植模型的手术改进被引量：3
- 2007年
- 目的本文结合作者自身的实践体会，详细阐述了用“二袖套”方法建立大鼠原位肝移植模型的手术改进方法，以帮助初学者掌握本技术。方法将136只健康清洁级雄性SD大鼠随机分为供、受者两组。在Kamada的“二袖套法”大鼠原位肝移植技术基础上进行改进，供者改经腹主动脉进行肝脏冷灌注，供受者肝上下腔静脉用7-0线连续端端吻合，门静脉和肝下下腔静脉用袖套法吻合，胆总管采用单管内支架端端吻合。术后观察受者大鼠存活率，并分析死亡原因。结果供肝切取时间23-35min，修整供肝时间8-13min，受体无肝期16-19min，胆管插管时间2-3min。受者术后48h存活率为95.5%，1周存活率为89.7%。术后48h内主要死亡原因是出血。存活超过48h者，主要死亡原因为胆管梗阻、胆漏及肝叶坏死。结论改进的大鼠原位肝移植手术成功率高，可作为肝移植实验研究可靠、稳定的动物模型。
- 郑德华石炳毅洪宝发蔡明钱叶勇杜国盛周文强翟树森裴雪涛
- 关键词：肝移植动物
- 负向调节树突状细胞对心脏移植大鼠调节性T细胞的影响被引量：2
- 2010年
- 目的:探讨受者树突状细胞(DC)与体外光化学法(PUVA)处理的供者脾淋巴细胞共培养,对心脏移植受者CD4+CD25+调节性T细胞(Treg)及移植心存活时间的影响。方法:以DA大鼠为供者,Lewis大鼠为受者,SD大鼠为无关供者,建立大鼠腹部异位心脏移植模型。分离正常的供者脾淋巴细胞(SP),制备经PUVA处理的供者脾淋巴细胞(PU-VA-SP)。在体外将DA大鼠PUVA-SP或SP与受者骨髓来源的DC共同培养,收集经上述处理后受者DC,流式细胞术(FCM)检测其表面分子CD80、CD86以及OX6的表达状况。根据受者术前静脉输注的成分将实验动物随机分为3组:①Control组:单纯输注PBS,n=7;②SPDC组:输注加载供者SP的受者大鼠DC,n=8;③PUVA-SPDC组:输注加载PUVA处理的供者SP的受者大鼠DC,n=8。移植术前7d,经外周静脉给受者输注与PUVA-SP共培养后的DC(PUVA-SPDC组)、正常受者DC(DC组)或只输注PBS(Control组),移植术后观察受者移植物的存活时间,检测受者外周血中CD4+CD25+T细胞、CD4+CD25highT细胞的比例及其Foxp3表达状况。过继转移PUVA-SPDC组受者大鼠的T细胞后,检测正常LEW大鼠对供者抗原或无关抗原的DTH反应。结果:受者DC与供者未经处理的脾淋巴细胞(SP)混合培养后,其表面分子CD80、CD86以及OX6的表达分别为16.6%±0.72%、36.5%±0.87%及65.6%±1.45%,明显高于未处理DC组(3.53%±0.27%、13.0%±0.57%及27.7%±1.23%)(P<0.01);而受者DC与PUVA处理过的供者脾淋巴细胞(PUVA-SP)混合培养后,其表面分子的表达仍保持较低的水平,CD80、CD86以及OX6的表达分别为3.9%±0.12%、13.4%±0.59%及28.0%±1.73%,与未经任何处理的受者DC无统计学差异(P>0.05)。移植术后,PUVA-SPDC组受者,外周血CD4+CD25+T、CD4+CD25highT细胞占CD4+T的比例分别是18.97%和3.81%,明显高于输注DC组(4.40%和0.81%)和Control组(3.11%和0.09%)的大鼠(P<0.01)。PUVA-SPDC组大鼠外周血CD4+CD25+T细胞中Foxp3表达率为29%±1.73%,CD4+CD25highT细胞中Foxp3阳性率�
- 郑德华石炳毅邹一平蔡明钱叶勇洪宝发窦立萍黎力
- 关键词：树突状细胞PUVA心脏移植调节性T细胞
