教育部“新世纪优秀人才支持计划”(NCET-04-0497)
- 作品数：6 被引量：95H指数：4
- 相关作者：王正祥牛丹丹石贵阳姚婷婷张梁更多>>
- 相关机构：江南大学更多>>
- 发文基金：教育部“新世纪优秀人才支持计划”国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：生物学轻工技术与工程化学工程更多>>
- 嗜热菌来源的生淀粉酶分离纯化及其酶学性质被引量：12
- 2008年
- 从嗜热菌库中分离到两株能水解生淀粉的菌株173和174,通过扩增和测定两株菌的16S rDNA序列并进行比对结果表明,所分离两株菌属于Geobacillus属的细菌。液体摇瓶发酵菌株173、174,其产生的生淀粉酶(简称RSDE173、RSDE174)活力分别达14.5 U/mL和12.9 U/mL。通过生淀粉吸附-熟淀粉洗脱系统和TOYOPEARL HW-55F系统进行分离纯化,得到纯化的RSDE173和RSDE174,纯化倍数分别为50和29,活力回收率分别为34%和41%。有关RSDE173和RSDE174酶学性质研究显示,对熟淀粉水解的最适作用温度均为70℃,而对生淀粉水解则分别在50℃～60℃和40℃～60℃下表现出高水解活力;对不同底物的最适作用pH值均为5.0～5.5;它们对大多数试验离子的敏感性较低,但个别离子如Co^(2+)、Cu^(2+)对RSDE173或Cu^(2+)对RSDE174的酶活力有一定的抑制作用。纯化的这两种生淀粉酶对不同来源生淀粉的底物专一性并不相同。RSDE173底物专一性顺序为红薯淀粉>小麦淀粉>玉米淀粉>木薯淀粉>糯米淀粉;而RSDE174的糯米淀粉>小麦淀粉>红薯淀粉>玉米淀粉>木薯淀粉。RSDE173对生红薯淀粉有很好的降解,其水解糊化淀粉与生红薯淀粉的比值为1.48:而RSDE174优先降解生糯米淀粉,其相应比值为1.69。
- 董永存刘洋陈源源牛丹丹张梁石贵阳王正祥
- 关键词：嗜热菌生淀粉酶分离纯化
- 地衣芽孢杆菌α-淀粉酶基因的克隆和及其启动子功能鉴定被引量：23
- 2006年
- 根据已知α-淀粉酶编码基因保守区核苷酸序列,通过PCR和反向PCR技术克隆出Bacillus licheniformisCICIM B0204α-淀粉酶编码基因amyL全长序列及其上下游序列。B.licheniformisCICIM B0204amyL由1539bp组成,其上游180bp为启动子序列,下游160bp为终止子序列;成熟肽由512个氨基酸残基组成,氨基端的29个氨基酸残基为α-淀粉酶的信号肽。通过基因及其氨基酸序列比对发现,amyL及其编码产物与芽孢杆菌来源的α-淀粉酶具有高度相似性。将amyL的结构基因在PT7介导下于大肠杆菌中诱导表达,获得具有α-淀粉酶活性的表达产物。将amyL的启动子序列和信号肽序列与B.licheniformisCICIM B2004的β-甘露聚糖酶结构基因进行读框内重组,在大肠杆菌中获得了β-甘露聚糖酶的分泌表达,重组大肠杆菌表达295U/mL的β-甘露聚糖酶酶活。
- 牛丹丹徐敏马骏双王正祥
- 关键词：地衣芽孢杆菌Α-淀粉酶Β-甘露聚糖酶基因克隆启动子信号肽
- 携多拷贝glaA的重组黑曲霉过量合成糖化酶的研究被引量：18
- 2006年
- 以工业生产菌株黑曲霉CICIM F0410基因组DNA为模板,扩增出糖化酶glaA基因,测序并进行表达研究.GlaA基因的核苷酸序列长为2167 bp,包含4个内含子.氨基酸序列比对表明此黑曲霉糖化酶与其他曲霉属来源的糖化酶有很高的同源性.将glaA基因克隆到pBC-Hygro载体中,构建重组质粒pBC-Hygro-glaA并转化A.niger F0410.携多拷贝glaA的转化子用150μg/mL潮霉素抗性筛选并通过荧光实时定量PCR鉴定.结果表明,在染色体整合2～3倍糖化酶基因对糖化酶的过量合成是适宜的,有助于提高糖化酶活力.对转化子进行摇瓶发酵研究,发酵终止时转化子GB0506的糖化酶活力比出发菌株F0410提高了17.5%.因此,增加黑曲霉染色体糖化酶基因的拷贝数可以显著提高糖化酶活力.
- 姚婷婷王衍敏顾建龙王正祥
- 关键词：黑曲霉糖化酶基因克隆摇瓶发酵
- 嗜热菌合成乳酸的研究
- 2009年
- 从467株原始菌株保藏物中筛选获得了产乳酸的嗜热菌29株。进一步复筛确定19株为产乳酸水平较高的嗜热菌,且均为Bacillus coagulans。采用高效液相色谱法对19株Bacillus coagulans的主要发酵产物进行分析。55℃下发酵54 h,总乳酸产量最高的为74.80 g/L,最低的为49.55 g/L。选择总乳酸产量较高的四株菌和产物中杂酸最少的一株菌作为进一步研究的菌株,分析所形成乳酸光学构型发现,5株菌所产L-乳酸的光学纯度均在98%以上,同时皆形成少量D-乳酸。
- 田康明石贵阳王正祥
- 关键词：嗜热菌乳酸发酵
- 黑曲霉原生质体的制备、再生及转化条件被引量：44
- 2006年
- 为了建立原生质体介导的黑曲霉转化系统，研究了菌龄、酶系统、渗透压稳定剂、酶解时间对葡萄糖淀粉酶生产菌株黑曲霉CICIMF0410原生质体形成与再生的影响。结果表明，培养4d的幼嫩菌丝体最适于制备原生质体；综合考虑原生质体形成与再生的情况，作者选用1mol／L山梨醇为最适渗透压稳定剂，1g／dL蜗牛酶-1g／dL纤维素酶-0．1g／dL溶壁酶为最适裂解酶组合，30℃酶解2．5～3h，最适合的原生质体的再生培养基为含0．6mol／LMgSO4的TZ培养基。在PEG和CaCl2存在条件下，以潮霉素B为选择性标记，质粒pBC-Hygro转化原生质体，每微克DNA可获得4～5个转化予。
- 姚婷婷王正祥
- 关键词：黑曲霉原生质体
- 重组高异构化率葡萄糖异构酶酶学性质的研究被引量：4
- 2006年
- 葡萄糖异构酶催化D-葡萄糖形成D-果糖的异构化反应,是工业上制备高果糖浆的关键酶。介绍一种新型重组葡萄糖异构酶(rGI)的酶学性质。rGI的最适作用温度为90°C￣100°C,最适作用pH为7.0。rGI具有较好的热稳性,90°C下的酶活半衰期约为5h。rGI酶活表达依赖二价金属离子。在90°C、pH7.0和5h下,rGI异构化30%(w/v)葡萄糖液为果糖的异构化率达到54.8%。
- 李松牛丹丹张梁石贵阳沈煜陈卫王正祥
- 关键词：酶学性质高果糖浆异构化
