中国博士后科学基金(20090450935)
- 作品数：7 被引量：11H指数：2
- 相关作者：张永学胡硕张猛熊玲静余剑英更多>>
- 相关机构：华中科技大学中南大学郑州大学更多>>
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- 相关领域：医药卫生建筑科学生物学更多>>
- 对比研究两种腺病毒载体对大鼠骨髓间充质干细胞的转染效率及机制被引量：2
- 2010年
- 目的对比研究两种腺病毒载体Ad5／EGFP和AdF35／EGFP转染SD大鼠骨髓间充质干细胞（rBMSC）的效率及其机制。方法用密度梯度法从大鼠骨髓中分离出rBMSC，流式细胞仪检测其表面相关标志抗原（CI）90、CD29、CD44、CD34、CD11b和CIM5）以鉴定rBMSC。用不同梯度感染复数（MOI）的Ad5／EGFP和AdF35／EGFP分别转染rBMSC，MTT检测二者对rBMSC生长的影响。转染后第1～9天，荧光显微镜下观察转染情况，同时流式细胞仪检测转染效率及平均荧光强度，实时PCR检测rBMSC表面CAR及CIM6的表达水平。结果rBMSC表达CD90、CD29、CD44阳性，而CD34、CD11b、CIM5表达为阴性。MOI≤1600时，Ad5／EGFP对rBMSC的生长无明显抑制作用（t=3．12，P=0．052）；MOI≤1000时，AdF35／EGFP对rBMSC的生长无明显抑制作用（t=2．20，P=0．15））。荧光显微镜下，Ad5／EGFP转染rBMSC1d后即可见大量EGFP表达阳性的细胞，第2～3天阳性细胞数最多，随后减少，第9天仍可见少量的阳性细胞。AdF35／EGFP转染rBMSC后1～9dEGFP阳性细胞数始终很少。Ad5／EGFP的转染效率显著性高于AdF35／EGFP的转染效率（t=2．45，P=0．008）。经实时PCR检测，rBMSC高度表达CAR，而极低表达CIM6，二者之间差异有统计学意义（t=2．57，P〈0．01）。结论Ad5／EGFP对rBMSC的转染效率明显高于AdF35／EGFP，这可能与rBMSC表面高表达CAR而极低表达CD46有关。AdF35不合适作为目的基因转染rBMSC的载体，Ad5可作为目的基因有效转染rBMSC的载体，这为后续目的基因转染rBMSC治疗各种疾病的实验研究奠定了基础。
- 胡硕熊玲静余剑英兰晓莉张永学
- 关键词：干细胞转染腺病毒
- 重组腺病毒pAdxsi-eGFP-rNIS的构建及初步应用
- 2010年
- 目的构建包含rNIS和eGFP基因的重组腺病毒载体及初步应用。方法以CMV为启动子,将pShuttle-eGFP-CMV重组穿梭载体和含有目的基因rNIS的原始质粒酶切后,电泳、切胶回收,分别得到载体片段和插入片段。连接酶连接两种片段后,转化化学感受态DH5a菌株,涂布到抗性固体培养基中;挑取单克隆菌落,接种到抗性液体培养基培养;提取pShuttle-eGFP-CMV-rNIS重组穿梭质粒,酶切鉴定。用类似的方法将pShuttle-eGFP-CMV-rNIS重组穿梭质粒转移到pAdxsi重组腺病毒骨架载体上。在细菌内扩增培养后,提取pAdxsi-eGFP-rNIS病毒质粒,酶切鉴定。将最终的重组腺病毒Ad-eGFP-rNIS转染到A549细胞,荧光显微镜下观察、拍照;细胞与125I溶液培养后,γ计数器检测细胞放射性计数。结果rNIS构建到pShut-tle-eGFP-CMV(-)TEMP重组穿梭质粒中,并成功转移到pAdxsi重组腺病毒骨架载体上,经酶切鉴定,rNIS和eGFP均表达正确。荧光显微镜下,转染Ad-eGFP-rNIS的A549细胞可见大量强烈绿色荧光,未转染细胞未见明显绿色荧光。转染细胞摄取放射性计数为(29250±1441)cpm,未转染细胞摄取放射性计数为(490±27)cpm,两者之间的差异有统计学意义,t=15.2,P<0.001。结论成功构建了含rNIS基因的重组腺病毒载体,转染肿瘤细胞后rNIS功能正常,为下一步rNIS介导的肿瘤基因靶向治疗及分子显像奠定了基础。
- 胡硕赵敏柴文文李崇佼覃春霞陈荃张永学
- 关键词：基因重组腺病毒肿瘤
- 基于联合算法的受损变电构架承载能力可靠度分析被引量：1
- 2018年
- 采用蒙特卡罗方法与响应面法相结合的方法,分析了三种常见钢结构变电构架在设计荷载作用下的承载力可靠度。结果表明：在设计荷载作用下,三种变电构架承载能力的可靠度均随着构件损伤程度的增大而降低。当构件损伤程度较轻时,整个变电构架的结构可靠度并不明显降低,此时整个结构仍具有良好的工作性能;随着构件损伤程度的增大,结构的可靠概率明显降低,结构很快就变得不可靠,此时须立即修复或更换受损构件,以保证变电构架结构整体的安全性。
- 吕中宾张猛
- 关键词：变电构架极限承载力可靠度分析
- 随机地震多点激励作用下对称结构的扭转效应被引量：3
- 2011年
- 结合GB 50011—2010《建筑抗震设计规范》选取与规范各类场地条件相适应的Clough-Penzien地震动随机模型功率谱的谱参数,从多点输入地震角度研究了不同场地、不同设计地震分组情况下单层对称空间刚架结构的动力响应,结果表明:多点非一致地震激励下,即使严格意义上的对称结构也会产生明显的扭转效应,扭转效应大小可采用一致激励下使结构产生同样扭矩的等效偏心率来衡量,且等效偏心率随结构体系的自振周期、平扭周期比、场地条件等因素变化而改变;对于多高层对称结构,多点非一致激励扭转效应的影响主要集中在结构底层附近,这种作用方式类似圣维南局部性原理.
- 张猛赵桂峰马人乐何敏娟
- 关键词：多点激励
- 人和大鼠骨髓间充质干细胞体外培养和生物学特性的对比研究被引量：1
- 2010年
- 目的对比体外分离培养的人和SD大鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)的生长情况和生物学特性。方法骨髓穿刺抽取健康成人的骨髓,SD大鼠处死后从股骨取骨髓,采用密度梯度法分离出BMSCs,MTT法测定两种细胞的生长曲线,用成骨、成脂培养基对细胞进行定向诱导分化。结果两种原代培养的BMSCs生长到第3代后,细胞形态均一、呈梭形排列,生长曲线提示人的BMSCs第9、15代仍有较强的增殖能力,第20代后增殖速度明显减慢。大鼠的BMSCs第8、16代增殖能力也很强,第30代仍有活力。2种干细胞都能成功诱导分化为骨细胞和脂肪细胞。结论人和大鼠骨髓间充质干细胞均能在体外分离培养,并具有多向分化潜能,大鼠的骨髓间充质干细胞增殖能力更强于人的骨髓间充质干细胞。
- 胡硕刘小云柴文文张永学
- 关键词：骨髓间充质干细胞细胞培养生物学特性
- 基于神经网络的受损钢结构变电构架承载能力预测被引量：2
- 2013年
- 以单侧、双侧及无侧向支撑的两跨人字形钢结构变电构架为研究对象,通过分析其受损前后的受力性能,得到变电构架在斜向、水平及竖向荷载作用下的二阶效应特点及影响因素。在此基础上,运用人工神经网络方法,建立起精度很高的钢结构变电构架承载能力预测模型,有效预测变电构架在不同损伤程度下的弹性、弹塑性极限承载力及相应变形,可为实际变电构架的安全性监测分析及日常运营维护提供参考依据。
- 咸庆军张猛李天
- 关键词：钢结构变电构架二阶效应极限承载力神经网络承载力预测
- 改良腺病毒AdF35-eGFP转染人及大鼠骨髓间充质干细胞的效率对比研究被引量：3
- 2010年
- 目的:比较改良腺病毒AdF35-增强绿荧光蛋白(eGFP)转染人骨髓间充质干细胞(humanbone marrow mesenchymal stem cells,hBMSCs)和大鼠骨髓间充质干细胞(rat BMSCs,rBMSCs)的效率。方法:分别从人体、大鼠骨髓中分离出BMSCs,成骨、成脂诱导培养以鉴定BMSCs。构建含eGFP的AdF35重组腺病毒载体AdF35-eGFP,以不同感染复数(multiplicity of infection,MOI)分别转染BMSCs后,MTT检测AdF35-eGFP对2种BMSCs的毒性作用,荧光显微镜观察eGFP的表达,流式细胞仪检测转染效率,实时定量PCR检测2种BMSCs表达柯萨奇腺病毒受体(CAR)和CD46mRNA的水平。结果:hBMSCs和rBMSCs从骨髓中分离出来后,分别成功诱导分化成骨和成脂。当MOI为1 000 PFU/mL时,AdF35-EGFP对2种BMSCs的活性均有明显抑制作用(P<0.001)。AdF35-eGFP感染hBMSCs 48 h后,荧光显微镜下可见发强烈绿色荧光的细胞,流式细胞仪检测其转染效率可达(84.8±7.1)%;Ad5-eGFP感染rBMSCs后,荧光显微镜下仅见少量发绿色荧光的细胞,48 h转染效率为(3.1±1.1)%。hBMSCs高表达CD46mRNA,低表达CARmRNA;而rBMSCs则高表达CARmRNA,低表达CD46mRNA,2种基因的表达差异有统计学意义(P<0.01)。结论:AdF35可作为理想载体携带目的基因转染hBMSCs,但不适合作为转染rBMSCs的载体。
- 胡硕熊玲静余剑英雷萌赵敏张永学
- 关键词：骨髓间充质干细胞转染CD46
