山东省优秀中青年科学家科研奖励基金(BS2009YY019)
- 作品数：5 被引量：19H指数：3
- 相关作者：马秀丽李建亮崔言顺于可响黄兵更多>>
- 相关机构：山东省农业科学院山东农业大学沂南县畜牧局更多>>
- 发文基金：山东省优秀中青年科学家科研奖励基金山东省现代农业产业技术体系创新团队建设专项资金山东省农业科学院青年科研基金更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 一起鸭甲肝病毒1型和3型混合感染的研究报道被引量：1
- 2014年
- 自山东省某疑似鸭肝炎发病鸭肝脏中分离到两株病毒,命名为TA1和TA2,分离毒分别回归3日龄雏鸭,可复制出鸭肝炎的典型症状和病理变化。利用鸭甲肝病毒1型(DHAV-1)和3型(DHAV-3)特异性引物进行RT-PCR扩增,结果为阳性,经测序证实为DHAV-1和DHAV-3。分别扩增分离毒的VP1基因,经序列测定及遗传进化关系分析发现,分离毒TA1和DHAV-3毒株之间有较高的核苷酸序列相似性,与DHAV-3遗传距离最近,属于基因C型;分离毒TA2和DHAV-1毒株之间有较高的核苷酸序列相似性,与DHAV-1的遗传距离最近,属基因A型。
- 孙晓军任建亭刘金凤杨胜富马秀丽
- 鸭甲肝病毒1型和3型间接ELISA方法的建立与应用被引量：8
- 2015年
- 【目的】研究鸭甲肝病毒(Duck hepatitis A virus,DHAV)1型VP3和3型VP1串联基因在大肠杆菌中的表达,并以纯化的重组蛋白为抗原建立鸭病毒性肝炎抗体检测的间接ELISA方法。【方法】设计2对特异性引物,提取鸭甲肝病毒1型(DHAV-1)和3型(DHAV-3)的RNA,分别RT-PCR扩增得到714bp的DHAV-1VP3和720bp的DHAV-3 VP1基因,并克隆至p MD18-T载体中,然后依次将DHAV-1 VP3和DHAV-3 VP1定向插入p ET-32a(+)表达载体,获得重组表达载体p ET-1VP3-3VP1,进行IPTG(Isopropyl-beta-D-1-thiogalactopyranoside)诱导表达分析,以纯化的重组蛋白为抗原建立间接ELISA方法并应用于临床。【结果】经IPTG诱导表达,在大肠杆菌中可稳定、高效地表达DHAV-1VP3-3VP1蛋白。Western blot检测结果表明,表达的重组蛋白与DHAV-1和DHAV-3阳性血清均能发生特异性反应。确定间接ELISA方法的抗原最佳包被浓度为1.0μg/孔,血清最佳稀释度为1∶200,临界值为OD6 50值≥0.38,建立的间接ELISA方法具有较好的敏感性、特异性和重复性。该方法与中和试验分别检测DHAV-3阳性血清,两种方法的符合率各为96.3%和96.7%;初步临床应用结果表明该方法可用于雏鸭母源抗体和免疫后抗体的消长变化的检测。【结论】以大肠杆菌表达的DHAV-1VP3-3VP1重组蛋白建立的间接ELISA方法可用于DHAV-1和DHAV-3抗体的检测。
- 张玉瑶马秀丽黄兵李玉峰于可响李建亮刘存霞韩宏宇崔言顺
- 关键词：VP1基因VP3基因
- 鸭甲型肝炎病毒1型3D基因克隆与表达被引量：1
- 2013年
- 提取鸭甲型肝炎病毒1型(DHAV-1)RNA作为模板,进行RT-PCR扩增,得到714bp的3D基因,将纯化的3D基因片段与pMD18-T载体进行连接,构建DHAV-13D基因克隆重组质粒。然后定向插入到pET-32a(+)表达载体,筛选获得原核表达载体pET-32a-3D。经ITPG诱导,SDS-PAGE分析表明,3D基因得到正确表达,融合蛋白分子量为71.4kDa。Western blotting结果表明纯化的融合蛋白与DHAV-1阳性血清具有反应性。
- 吴朝军刘金凤冯涛马秀丽
- 关键词：3D基因克隆
- 鸭坦布苏病毒E基因的克隆表达及初步应用被引量：7
- 2012年
- 利用PCR方法从鸭坦布苏病毒山东分离株(BZ株)扩增整个E基因,全长1 503 bp,克隆到pMD18-T载体中,然后将双酶切目的片段亚克隆入pET-28a(+)载体,构建出重组表达质粒PET28a-E。将PET28a-E转化大肠杆菌BL21(DE3)后,经IPTG诱导可表达出分子量约54.8 kD的蛋白,Western blotting试验呈阳性,表明E蛋白有很好的反应原性。以纯化的表达产物作为包被抗原,鸭坦布苏病毒血清为一抗,HRP标记的羊抗鸭IgG为二抗建立间接ELISA方法。采用该方法对80份送检鸭血清进行检测,并与中和试验进行比较,结果显示,两者的符合率为95.0%,表明该方法具有较好的应用前景。
- 杨少艳于可响王华史玉颖马秀丽李建亮崔言顺
- 关键词：E基因间接ELISA
- 基因C型鸭肝炎病毒VP1基因的克隆表达及其多克隆抗体的制备被引量：3
- 2011年
- 采用RT-PCR方法,扩增基因C型DHV JFX08株的VP1基因,与pMD18-T载体进行连接,构建新型DHVVP1基因克隆重组质粒。然后将VP1基因定向插入到pET-32a(+)表达载体中,筛选原核表达载体pET-32a-VP1,进行IPTG诱导表达。SDS-PAGE电泳分析表明,基因C型DHV-VP1基因可在大肠杆菌中稳定高效的表达。Western-blot检测表明,表达产物可与基因C型DHV阳性血清发生特异性反应。将纯化的重组蛋白免疫4周龄SPF鸡,以纯化的VP1重组蛋白和基因C型DHV全病毒分别包板,制备的抗血清ELISA效价分别可达1∶25 600,1∶51 200,表明该重组蛋白具有良好的免疫原性。
- 赵立娜崔言顺任建亭李建亮黄兵李玉峰马秀丽
- 关键词：鸭肝炎病毒VP1基因克隆表达多克隆抗体
