教育部“新世纪优秀人才支持计划”(NCET-10-0174)
- 作品数：14 被引量：68H指数：5
- 相关作者：马红霞裴志花刘树明孔令聪高云航更多>>
- 相关机构：吉林农业大学教育部中国农业科学院哈尔滨兽医研究所更多>>
- 发文基金：教育部“新世纪优秀人才支持计划”吉林省世行贷款农产品质量安全项目国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 分枝杆菌噬菌体CJAUS9 lysB基因的克隆与序列分析被引量：1
- 2013年
- 参照GenBank中lysB基因序列设计特异引物,以耻垢分枝杆菌噬菌体CJAUS9的基因组为模板,PCR扩增出1029 bp的条带,经酶切、PCR鉴定含有目的基因的克隆载体pMD19-T正确后进行测序分析。结果显示,克隆出的lysB基因与已知分枝杆菌肌尾噬菌体lysB序列同源性为98.7%～99.1%;编码的氨基酸同源性为99%～100%,有酯酶保守的G-X-S-X-G基序,为研究LysB蛋白的生物学特性奠定了基础。
- 苏胜兵姜秀云马红霞高云航么乃全王春芳胡静涛宋磊徐凤宇
- 关键词：分枝杆菌基因克隆
- 家蝇幼虫防御素基因MddⅠ的克隆与原核表达被引量：3
- 2013年
- 以猪肺炎支原体诱导家蝇幼虫的cDNA为模板,通过cDNA末端快速扩增技术(RACE)对MddⅠ基因进行扩增,对扩增产物测序和分析。构建重组表达质粒pET-32a-MddⅠ,在大肠杆菌BL21(DE3)中用IPTG对其诱导表达,对表达产物进行SDS-PAGE分析。结果,MddⅠ基因全长475bp,其开放阅读框(ORF)276bp,编码91个氨基酸,编码蛋白的理论分子质量9.7ku,理论等电点(pI值)8.89,存在信号肽的剪切位点,亲水性较强且无明显跨膜区,α螺旋和不规则盘绕为其主要结构元件,β折叠散布在整个蛋白质中。具有Defensin-2家族保守区域,与GenBank中登录号为AY260152同源性最高,达78%。构建的重组表达质粒pET-32a-MddⅠ在大肠杆菌BL21(DE3)中表达出分子质量约为25ku的蛋白质,与预期大小一致。结果表明,MddⅠ基因具有完整的开放阅读框,为新的家蝇防御素基因;MddⅠ基因在原核表达系统中的表达为进一步研究表达产物的生物学活性和免疫学活性奠定了基础。
- 万玲傅小蒙唐艳孙小宁裴志花刘树明马红霞
- 关键词：家蝇防御素原核表达
- 家蝇幼虫溶菌酶Ⅱ基因的克隆、表达及抑菌活性研究
- 2015年
- 以本实验室构建的鸡致病性大肠杆菌诱导家蝇幼虫抑制性消减杂交文库(SSH)为基础,对家蝇幼虫溶菌酶II基因(MdL-II)进行克隆,得到全长为532 bp的cDNA片段,其开放阅读框(ORF)与GenBank中登录号为HQ897688.1的MdL-II基因全序列同源性为95%。将MdL-II ORF序列插入到pET-32a(+)表达载体中成功构建重组质粒,其表达产物经十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析,结果显示约在34 ku处出现表达条带且与目的蛋白大小相符。当诱导温度为37℃,IPTG浓度为0.6 mmol/L时可获得大量可溶性Trx-MdL-II融合蛋白,纯化融合蛋白并进一步检测该蛋白的抑菌活性,结果表明融合蛋白对大肠杆菌和链球菌均有抑菌作用,且对大肠杆菌的抑菌作用相对较强。
- 邵清唐艳万玲孔令聪裴志花马红霞
- 关键词：家蝇幼虫克隆表达蛋白纯化
- 牛支原体致病机制研究进展被引量：11
- 2015年
- 牛支原体是引起牛呼吸系统疾病的主要病原之一,给养牛业造成了严重的经济损失。论文对近期国内外关于其致病机制的研究进展进行梳理,以期为牛支原体肺炎的防控提供参考。对牛支原体致病机制的研究可为研制有效的疫苗和新型绿色药物及其他防控途径提供理论依据,进而在临床上有效控制牛支原体引发的疾病。论文涉及三方面内容:一是牛支原体黏附蛋白的黏附作用;二是牛支原体在黏附基础上其代谢产物对宿主细胞的损伤和相关蛋白介导的宿主细胞凋亡;三是免疫学致病机制,包括黏附蛋白的免疫原性及免疫逃避机制、宿主的免疫应答及炎症损伤和宿主的抗炎反应及免疫抑制机制。
- 高铎孔令聪贾博岩王梓徐凤宇刘树明马红霞
- 关键词：牛支原体致病机制免疫学
- 家蝇幼虫双翅肽MdDpt I成熟肽基因的克隆与原核表达被引量：1
- 2015年
- 对鸡沙门氏菌诱导家蝇幼虫构建的抑制性消减文库(SSH)中筛选得到的家蝇双翅肽I(Musca domesticaDiptericin I,MdDptI)基因进行克隆、表达,并对表达产物的抑菌活性进行初步研究。以沙门氏菌诱导家蝇幼虫cDNA为模板,采用cDNA末端快速扩增技术(RACE),对MdDptI基因进行扩增,并对扩增产物进行测序和生物信息学分析,进一步去掉信号肽并构建重组表达质粒pET-28a-MdDptI,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,对表达产物进行SDS-PAGE电泳分析。借助亲和纯化获得目的蛋白,并验证目的蛋白的生物活性。MdDptI基因全长为419 bp,包含一个300 bp的完整开放阅读框(ORF),编码99个氨基酸,其cDNA序列与GenBank中登录号为FJ794602.1的家蝇双翅肽基因同源性为95%。构建了家蝇MdDptI基因的成熟肽原核表达质粒pET-28a-MdDpt-I,并获得成功表达,表达产物约为12 ku,与预期结果一致。纯化后的目的蛋白表现出一定的抑菌活性。本试验获得了MdDptI基因的全长序列,构建了原核表达载体,并成功获得表达纯化。
- 孙小宁裴志花卞路张丹丹马红霞
- 关键词：家蝇克隆原核表达
- 家蝇溶菌酶1基因的克隆、序列分析及原核表达被引量：3
- 2014年
- 采用cDNA末端快速扩增技术(RACE),对鸡致病性大肠杆菌诱导家蝇幼虫抑制性消减文库(SSH)中筛选得到家蝇溶菌酶1基因((Musca domestica lysozyme-1,MdL-1)进行扩增,测序分析得到一个全长为537 bp的cDNA片段,其开放阅读框(ORF)432 bp,与Genbank中登录号为AY344589.1基因同源性为96%。构建重组表达质粒pET-32a-MdL-1,转化大肠杆菌BL21(DE3),异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)诱导表达,十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析显示,表达产物大小约为34 kD,与预期蛋白大小一致。结果表明,利用RACE技术克隆得到MdL-1全长基因并在大肠杆菌中获得了表达,为进一步研究该蛋白的生物学及免疫学活性奠定了基础。
- 王梅梅万玲孔令聪裴志花刘树明马红霞
- 关键词：家蝇克隆原核表达
- 绵羊溶血性曼氏杆菌的分离鉴定被引量：13
- 2016年
- 本研究对疑似患有溶血性曼氏杆菌的病羊肺组织进行病原分离,并对分离菌株进行生化反应、动物致病性试验、PCR鉴定和药敏试验。结果表示,分离菌株为革兰阴性短杆菌且具有较强的致病性,经生化试验和PCR鉴定为溶血性曼氏杆菌,该分离菌株对大部分抗菌药物敏感,对红霉素和庆大霉素、磺胺间甲氧嘧啶耐药。本研究为溶血性曼氏杆菌病选择合理、正确的抗菌药物提供了一定的科学依据,并为进一步研究其耐药机制奠定了基础。
- 王羽董文龙汪艳王巍马红霞高云航钱爱东
- 关键词：耐药
- 家蝇基因工程抗菌肽的研究进展被引量：6
- 2013年
- 利用基因工程技术获取家蝇抗菌肽能克服传统方法产量低、耗时长、无法实现大规模生产等缺点,是目前获取家蝇抗菌肽最为有效的方法。对家蝇基因工程抗菌肽的分类、编码基因的获得和表达以及生物活性方面进行了综述,以期为兽医临床早日研制出高效、低毒且不易产生耐药性的新兽药提供参考。
- 万玲王梅梅孔令聪裴志花刘树明马红霞
- 关键词：家蝇抗菌肽基因工程生物活性
- 一例牛支原体与多杀性巴氏杆菌混合感染的诊断与治疗被引量：2
- 2017年
- 某肉牛养殖场经长途运输的犊牛暴发肺炎,并发生大规模死亡。经主诉和临床症状的分析、肺脏病变观察、病原的形态学检查、分子生物学鉴定,结果确诊为牛支原体(M.bovis)与荚膜血清多杀性巴氏杆菌(A型P.mutocida)混合感染。根据药敏试验结果推荐该场使用恩诺沙星肌肉注射辅以电解多维对患病牛进行治疗,疫情得到有效控制。
- 高铎孔令聪高云航王梓贾博岩刘树明辛九庆马红霞
- 关键词：牛支原体多杀性巴氏杆菌
- 抗菌肽在多领域应用的研究进展被引量：3
- 2014年
- 抗菌肽（antibacterial peptides）是生物体内免疫系统产生的一类抵抗外界病原体感染的多肽,是先天免疫的重要组成成分。抗菌肽能非特异性的抗细菌、抗真菌、抗病毒、抗寄生虫等病原体,并对肿瘤细胞、多重耐药菌也具有明显的杀伤作用,但不损伤体细胞,无毒副作用。近年来,人们从植物、昆虫、两栖类、水产类以及哺乳类动物甚至一些细菌中都发现了抗菌肽。
- 裴志花孙小宁王开陈绍辉马红霞
- 关键词：抗菌肽基因ANTIBACTERIAL水产类抗寄生虫病原体感染先天免疫
