国家自然科学基金(81050009)
- 作品数：6 被引量：13H指数：3
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- 叉头状转录因子01对高糖培养大鼠肾小球系膜细胞氧化应激的影响被引量：7
- 2012年
- 目的通过激活和抑制叉头状转录因子01（Fox01）活性及表达，探讨其对高糖培养下大鼠肾小球系膜细胞（MCs）氧化应激的作用。方法采用脂质体转染法将FoxOl短发夹样RNA（Fox01shRNA）质粒载体稳定转染MCs；用高糖（30．0mmol／L）和白藜芦醇（Resv20．0txmol／L）培养稳定转染后的MCs。以5．6mmol／L葡萄糖培养的MCs为正常对照组（NG），将高糖培养的MCs分为5组：单纯高糖组（HG）、HG＋Resv组、HG＋Fox01shRNA转染组、HG＋Resv＋Fox01shRNA转染组、HG＋转染阴性对照组（shNC）。培养72h后，用荧光酶标仪检测各组MCs内活性氧（ROS）水平；逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）检测去乙酰化酶（Sirtl）、Fox01、锰超氧化物歧化酶（MnSOD）mRNA表达；Westernblotting法检测Fox01及磷酸化Fox01（p-Fox01）水平。多组间数据比较采用单因素方差分析。结果与NG组相比，HG组SirtlmRNA表达下降，p-Fox01水平升高，MnSODmRNA表达下降，ROS水平升高，差异均有统计学意义（t=12．38、13．27、14．13、8．36，均P〈0．05）。与HG组相比，HG＋Fox01shRNA转染组Fox01mRNA表达被抑制，MnSODmRNA表达更低，ROS水平更高，差异均有统计学意义（t=20．61、13．61、10．13，均P〈0．05）；HG＋Resv组SiitlmRNA表达升高，p-Fox01水平下降，MnSODmRNA表达升高，ROS水平下降，差异均有统计学意义（t=6．02、10．69、5．39、5．37，均P〈0．05）。与HG＋Resv组比较，HG＋Resv＋Fox01shRNA转染组，Fox01mRNA表达被抑制，MnSODmRNA表达降低，ROS水平升高，差异均有统计学意义（t=22．53、15．31、14．63，均P〈0．05）。结论Fox01是调节MCs内ROS水平的重要转录因子，其可能通过激活下游抗氧化靶基因MnSOD的表达，保护MCs对抗氧化应激。
- 吉鸿飞秦贵军张伟伟吴丽娜马晓君
- 关键词：叉头转录因子类氧化性应激肾小球系膜细胞高糖
- 白藜芦醇对糖尿病大鼠肾脏叉头转录因子01表达的影响被引量：2
- 2012年
- 以链脲佐菌素诱导建立糖尿病大鼠模型，白藜芦醇治疗12周后，与糖尿病未治疗组比较，治疗组大鼠尿白蛋白、血肌酐和尿素氮明显降低（均P〈0．05），肾脏病理学变化明显改善，肾脏叉头转录因子01（Fox01）、过氧化氢酶mRNA表达均明显升高（P〈O．05），FoxOl蛋白磷酸化水平明显降低（P〈0．05），提示白藜芦醇可能通过调节Fox01的表达而对糖尿病肾脏起保护作用。
- 吴丽娜秦贵军张娜张颖辉马笑堃
- 关键词：白藜芦醇氧化应激
- 糖尿病肾病大鼠肾小球叉头状转录因子O1的表达和作用被引量：3
- 2011年
- 目的观察糖尿病肾病大鼠肾小球叉头状转录因子O1（FoxO1）的表达，探讨其与糖尿病肾病发生、发展的关系。方法8周龄健康雄性sD大鼠30只，链脲佐菌素（STZ）诱导建立糖尿病大鼠模型，采用随机数字表法分为糖尿病组（13只，普通饲料连续喂养4周）和糖尿病肾病组（13只，普通饲料连续喂养12周）。选取健康同龄大鼠18只作为正常对照组（NC组）。4、12周末检测体质量（BW）、血糖（BG）、血肌酐（Scr）、尿素氮（BUN）、24h尿蛋白（UPro／24h）及尿白蛋白定量（UAIb）。处死动物后计算肾重指数（KI）；分光光度计测定大鼠肾皮质丙二醛（MDA）含量和总超氧化物歧化酶（SOD）活性；免疫组化法检测肾小球FoxO1蛋白、胶原Ⅳ及纤连蛋白水平；RT—PCR检测肾皮质Fox01mRNA水平；光镜及电镜下观察肾脏组织形态学变化。组间比较采用独立样本t检验。结果糖尿病肾病组肾皮质MDA蛋白、肾小球胶原Ⅳ和纤连蛋白水平显著高于糖尿病组[分别为（3．49±0．31）VS（2．34±0．28）nmol／mgProt，20．1±1．3VS10．1±1．0，10．6±1．3VS6．3±1．0，t值分别为9．290、20．967、9．119，均P〈0．05]；糖尿病肾病组肾皮质SOD活性蛋白、Fox01mRNA表达水平明显低于糖尿病组[分别为（23±8）VS（43±6）U／mgProt，0．20±0．06VS0．35±0．05，t值分别为7．069、6．717，均P〈0．05]。FoxO1蛋白表达水平各组问比较无显著差异（均P〉0．05）。结论糖尿病肾病大鼠肾皮质FoxO1 mRNA表达水平降低，其机制可能通过下调其抗氧化靶基因使。肾脏氧化应激反应增强，从而参与糖尿病肾病发生发展的过程。
- 秦贵军吴丽娜张娜张颖辉马笑堃
- 关键词：活性氧糖尿病肾病
- 叉头状转录因子O1基因过表达慢病毒载体构建及其大鼠系膜细胞株的建立
- 2015年
- 目的构建含组成性激活突变型Fox O(CA-Fox O1 1)基因的过表达慢病毒载体,并建立其过表达的大鼠肾小球系膜细胞株。方法通过四质粒合成法构建包含CA-Fox O1编码序列的过表达慢病毒载体(LV-CA-Fox O1)。实验分为3组:空白对照组(NC组)、空慢病毒载体阴性对照组(LV-empty-Fox O1组)和过表达慢病毒载体组(LV-CA-Fox O1组)。培养系膜细胞(RMCs)72 h后,用流式细胞仪检测RMCs中绿色荧光蛋白(GFP)阳性率,并采用实时荧光定量PCR及蛋白免疫印迹法检测Fox O1的m RNA及蛋白表达情况。结果成功构建LV-CA-Fox O1,其病毒滴度为1×108TU/ml。LV-empty-Fox O1组和LV-CA-Fox O1组GFP阳性率分别为84.5%和81.4%;与NC组相比,LV-CA-Fox O1组Fox O1的m RNA与蛋白表达量相当于NC组的27.92倍与5.41倍(均P<0.05);而NC组与LV-empty-Fox O1组Fox O1的m RNA及蛋白表达量差异均无统计学意义。结论成功构建了大鼠Fox O1基因的过表达慢病毒载体,并建立了稳定过表达Fox O1的大鼠肾小球系膜细胞株,为进一步研究Fox O1的功能和作用机制奠定了研究基础。
- 岳欣阁刘飞秦贵军王庆祝张月
- 关键词：慢病毒载体过表达系膜细胞
- 大鼠叉头蛋白转录因子O1基因的shRNA慢病毒载体构建与RNA干扰效率的鉴定
- 2013年
- 目的构建针对大鼠叉头蛋白转录因子O1(FoxO1)基因的shRNA慢病毒载体,并在大鼠系膜细胞(RMCs)上鉴定其沉默效率。方法利用四质粒合成法合成慢病毒载体。分别用阴性对照慢病毒载体(LV-shNC-GFP组)、shRNA慢病毒载体(LV-shRNA-FoxO1组)和感染增强剂(NC组)处理RMCs。72h后,采用流式细胞仪检测绿色荧光蛋白(GFP)阳性表达率。采用荧光定量PCR检测FoxO1mRNA表达情况。15d后,采用蛋白免疫印迹法检测FoxO1蛋白的表达情况。结果 LV-shNC-GFP、LV-shRNA-FoxO1组GFP阳性表达率分别为87.4%、95.8%;LV-shRNA-FoxO1组FoxO1的mRNA与蛋白表达量较NC、LV-shNC-GFP组均降低(P<0.05)。其mRNA及蛋白抑制率分别达到86.2%和77.3%,而LV-shNC-GFP、LV-shRNA-FoxO1组FoxO1的mRNA及蛋白表达量差异无统计学意义(P>0.05)。结论成功构建大鼠FoxO1基因的shRNA慢病毒载体能高效、稳定地抑制FoxO1的表达,为进一步研究FoxO1的功能和作用机制奠定研究基础。
- 刘飞王庆祝秦贵军杨慧霞马晓君
- 关键词：慢病毒载体系膜细胞
- 白藜芦醇对波动性高糖培养的大鼠肾小球系膜细胞脂联素受体表达的影响被引量：3
- 2012年
- 目的探讨白藜芦醇（resveratro]）对波动性高糖培养的大鼠肾小球系膜细胞脂联素受体（AdipoRl和AdipoR2）表达的影响及机制。方法采用脂质体介导的方法将叉头转录因子O1（FoxO1）短发夹样RNA（FoxO1shRNA）质粒载体稳定转染大鼠肾小球系膜细胞；波动性高糖（5．6mmol／L或30mmol／L，每隔8h轮换）培养转染后的大鼠肾小球系膜细胞，并用白黎芦醇（20μmol／L）处理。以葡萄糖浓度（5．6mmol／L）培养的大鼠肾小球系膜细胞作为正常对照组（NG），将波动性高糖培养的大鼠肾小球系膜细胞分为5组：波动性高糖组（IHG）、IHG＋白黎芦醇组、IHG＋FoxO1shRNA转染组、IHG＋白黎芦醇＋FoxO1shRNA转染组、IHG＋转染阴性对照组（shNC）。培养72h后，用荧光酶标仪检测各组大鼠肾小球系膜细胞内活性氧簇（ROS）水平：RT—PCR检测去乙酰化酶（Sirtl）、FoxO1、AdipoRl、AdipoR2mRNA的表达，Western印迹检测FoxO1、磷酸化FoxO1（P—FoxO1）、AdipoR1和AdipoR2蛋白的表达。结果（1）与NG组相比，IHG组Sirtl mRNA表达下降，p-FoxO1水平升高，转录活性降低，AdipoRl表达下降，ROS水平升高（均P〈0．05）；（2）与IHG组相比，IHG＋FoxO1shRNA转染组，FoxO1表达被抑制，AdipoRl表达更低，ROS水平更高（均P〈0．05）；（3）与IHG组相比，IHG＋白黎芦醇组Sirt1 mRNA表达升高，p-FoxO1水平下降，转录活性升高，AdipoR1表达升高，ROS水平下降（均P〈0．05）；（4）与IHG＋白黎芦醇组相比，IHG＋白黎芦醇＋FoxO1shRNA转染组，FoxO1表达被抑制，AdipoRl表达降低，ROS水平升高（均P〈0．05）；（5）各组间AdipoR2表达无统计学意义（P〉0．05）。结论（1）白藜芦醇能显著上调波动性高糖诱导的大鼠肾小球系膜细胞内AdipoRl的表达。（2）FoxO1在白藜芦醇调节AdipoR1表达中发挥重要作用。
- 秦贵军吉鸿飞张伟伟吴丽娜马晓君
- 关键词：白藜芦醇波动性高糖脂联素受体
