国家自然科学基金(30572079)
- 作品数：7 被引量：17H指数：2
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- 胶质细胞源性神经营养因子基因修饰CD34^+细胞静脉移植治疗高血压大鼠脑梗死
- 2010年
- 背景:近年来,已有实验证实经颅直接给予胶质细胞源性神经营养因子(glialcell-derived neurotrophic factor,GDNF)或携带GDNF基因病毒载体有显著减少脑梗死体积、促进神经功能恢复的疗效,但其治疗方法有创,临床应用有限。目的:观察GDNF基因转染的人脐血CD34+细胞经静脉移植对自发性高血压大鼠脑梗死的疗效,并探讨其机制。方法:分离人脐血CD34+细胞,脂质体方法转染pEGFP-GDNF质粒和pEGFP空载体至CD34+细胞制备pEGFP-GDNF-CD34+和pEGFP-CD34+细胞;制备60只雄性自发性高血压大鼠大脑中动脉栓死模型并随机分为3组:pEGFP-GDNF-CD34+细胞移植组(基因细胞组)、pEGFP-CD34+细胞移植组(单纯细胞组)、生理盐水组。改良神经功能损害评分评价神经功能恢复状况;图像分析法观察TTC染色脑梗死体积;酶联免疫法检测细胞培养液与脑组织匀浆GDNF水平,荧光显微镜及免疫组织化学检测绿色荧光蛋白标记CD34+细胞及其人神经胶质纤维酸性蛋白和人神经元核抗原表达。结果与结论:经静脉移植pEGFP-GDNF-CD34+细胞向自发性高血压大鼠脑缺血区域迁移、存活、并向神经细胞定向分化,促进神经功能恢复。GDNF基因转染CD34+细胞在脑组织存活、向神经细胞分化及对大脑神经功能保护作用优于CD34+细胞。脑组织GDNF水平可能是GDNF基因转染CD34+细胞和单纯CD34+细胞移植治疗自发性高血压大鼠局灶性脑缺血疗效差异机制之一。
- 欧雅莉余国龙杨天伦方立胡柯
- 关键词：胶质细胞源性神经营养因子CD34+细胞高血压大鼠
- 自发性高血压大鼠缺血再灌注性脑损伤实验动物模型制备被引量：9
- 2009年
- 目的探讨自发性高血压大鼠(SHR)局灶性脑缺血/再灌注模型制备方法及其可行性。方法采用线栓法对84只雄性SHR进行局灶性脑缺血/再灌注模型制作,并以30只SD大鼠作为对照。术后24h应用神经行为学评分、氯化三苯基四氮唑(TTC)染色法评价大鼠局灶性脑缺血/再灌注模型制备的成功率及可靠性。结果SHR组模型制作成功60只(71.4%),术中、术后死亡20只(23.8%)、未成功4只(4.8%);而SD大鼠模型制作成功26只(86.7%),术中、术后死亡3只(10.0%),未成功1只(3.3%)。SHR组模型制作成功率低于SD大鼠,但两者比较,差异无统计学意义(χ2=3.69,P>0.05)。SHR组脑梗死面积百分比平均值较SD大鼠组显著增加[(42.6±5.6)%比(29.5±6.7)%,P<0.05],SHR组神经行为学损伤亦更严重(P<0.05)。结论采用线栓法制作SHR局灶性脑缺血/再灌注模型方法可行,稳定性较好。
- 余国龙胡柯欧雅丽杨天伦
- 关键词：动物模型自发性高血压大鼠线栓法
- 静脉移植转染GDNF基因的人脐血CD34＋细胞改善局灶性脑缺血大鼠的神经功能被引量：1
- 2010年
- 目的 观察静脉移植转染胶质细胞源性神经营养因子（GDNF）基因的人脐血CD34＋细胞对局灶性脑缺血大鼠神经功能的影响及其可能机制。方法密度梯度离心结合免疫磁珠法收集人脐血CD34＋细胞，以携带GDNF基因的质粒转染CD34＋细胞，以空载体转染者作对照。取SD大鼠，线栓法制备大脑中动脉栓塞模型，将模型随机分为3组：治疗组于成模后24h经尾静脉注射转染GDNF基因的CD34＋细胞1×10^6个；阳性对照组经尾静脉注射空载体转染的CD34＋细胞1×10^6个；空白对照组经尾静脉注射等量生理盐水。另以正常SD大鼠为假手术组。移植后采用改良的神经功能缺损评分（mNSS）评价神经功能恢复状况；图像分析法检测脑梗死体积；酶联免疫吸附试验检测细胞培养液与脑组织匀浆中GDNF水平；免疫组化方法检测CD34＋细胞及其人神经胶质纤维酸性蛋白（GFAP）和人神经元核抗原（NeuN）表达。结果转染GDNF基因的CD34＋细胞培养上清液中GDNF的含量明显高于空载体转染者（P〈0．05）。移植后7d，治疗组、阳性对照组和空白对照组间两两比较，mNSS评分的差异均无统计学意义（P〉0．05）；至移植后28d，治疗组运动功能改善，mNSS评分为5．0±1．0，显著低于阳性对照组的5．9±1．4N空白对照组的7．0±1．7（P〈0．05，P〈0．05）。移植后28d，治疗组梗死脑组织体积为（142±44）mm^3，显著低于阳性对照组的（196±58）mm^3（P〈0．05）和空白对照组的（233±50）mm3（P〈0．01）。移植后28d，治疗组NeuN阳性细胞为（6．7±2．0）个，GFAP阳性细胞为（14．1±3．3）个，明显高于阳性对照组和空白对照组（P〈0．05，P〈0．05），而在空白对照组和假手术组未见上述阳性细胞。移植后第28天，治疗组脑组织匀浆中GDNF水平较阳性对照组明显升高（P〈0．05）。结论静脉移植转染GDNF基因的人脐血CD34�
- 欧雅莉余国龙
- 关键词：脐血干细胞移植基因转染脑缺血
- 经体循环脐血细胞移植治疗脑梗死机制及其疗效影响因素被引量：2
- 2010年
- 本综述重点总结、回顾经体循环移植脐血细胞治疗脑梗死实验与临床研究结果,探讨其疗效机制。并就经体循环移植脐血细胞治疗脑梗死的优势、缺陷及影响其疗效的因素进行讨论。
- 欧雅莉余国龙杨天伦
- 关键词：脐血干细胞脑梗死
- 人脐血细胞静脉移植对自发性高血压大鼠缺血再灌注脑损伤疗效及其机制探讨被引量：2
- 2010年
- 目的探讨人脐血细胞(HUCBCs)静脉移植治疗自发性高血压(SHR)大鼠缺血再灌注脑损伤疗效及其相关机制。方法人脐血细胞体外分离、扩增并以4,6-2胺-2苯基吲哚(DAPi)标记。68只雄性SHR大鼠经线栓法建立大鼠大脑中动脉栓塞(MCAO)模型,并随机分为2组:治疗组和对照组。术后48h后经尾静脉治疗组注射1×106HUCBCs,对照组注射HUCBCs细胞培养基。于移植后3、14、28d,Bederson评分观察大鼠神经功能状况;图像分析法检测计算各组TTC染色脑梗死面积;荧光显微镜对治疗组脑组织DAPi染色阳性细胞计数;免疫组化法检测脑组织内脑源性神经营养因子(BDNF)染色阳性细胞数以及逆转录聚合链式反应(RT-PCR)检测移植后14、28d缺血侧脑组织BDNFmRNA表达水平。结果(1)移植后3d2组Bederson评分无显著差别,移植后14、28d治疗组显著低于对照组(P<0.05)。(2)移植后3d两组脑梗死面积无显著差别,移植后14、28d治疗组显著低于对照组(P<0.05)。(3)治疗组移植后3d梗死侧见少量DAPi阳性染色细胞,移植后14、28d梗死侧DAPi阳性染色细胞增加(P<0.05)。(4)免疫组化显示治疗组各时间点BDNF阳性细胞数较对照组增加(P<0.05)。(5)移植后14、28d治疗组缺血侧脑组织BDNFmRNA表达水平显著增加。结论HUCBCs静脉移植改善SHR大鼠脑缺血再灌注损伤的神经功能并缩小脑缺血损伤面积,其保护作用机制可能与经静脉移植的HUCBCs迁入脑组织内生存与增殖,并促进缺血侧脑组织BDNF表达水平增高相关。
- 胡柯余国龙欧雅莉涂秋云杨天伦
- 关键词：人脐血细胞静脉移植自发性高血压大鼠
- GDNF基因真核表达载体的构建及其在脐血CD34^+干细胞的表达被引量：3
- 2008年
- 目的构建人胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)基因的新型真核表达载体,为进行GDNF基因修饰的脐血干细胞移植治疗脑梗死奠定基础。方法将GDNF基因克隆到增强型绿色荧光蛋白(EGFP)真核表达载体中,进行酶切鉴定及DNA测序分析,并将携带有GDNF基因的该真核表达载体,通过脂质体介导,转染人脐血CD34+细胞,荧光显微镜、ELISA检测转基因脐血干细胞GDNF的表达与释放。结果经双酶切鉴定和测序证实已将GDNF基因DNA片段正确插入到真核表达载体中,并能在脐血CD34+干细胞中表达、分泌有活性的GDNF。结论成功构建pEGFP/GDNF基因新型真核表达载体。
- 欧雅莉杨天伦方立余国龙
- 关键词：基因重组真核表达载体
- 甘露醇促进人脐血CD34^+细胞通过血脑屏障静脉迁移至高血压脑梗死大鼠脑组织被引量：2
- 2011年
- 背景:单纯脐血细胞经静脉移植治疗脑梗死疗效有限,移植细胞经血脑屏障迁入脑内数量不足为重要原因之一。目的:观察血脑屏障开放剂甘露醇对人脐血CD34+细胞经静脉移植治疗高血压大鼠脑梗死疗效的影响。方法:分离人脐血CD34+细胞,脂质体方法转染pEGFPF质粒,制备pEGFP-CD34+细胞;45只雄性SD大鼠经线栓法建立大脑中动脉栓塞模型,造模后24h随机分为3组:实验组注射1×106GFP-CD34+细胞,继之注射20%甘露醇2g/kg;阳性对照组注射1×106GFP-CD34+细胞;空白对照组注射等量生理盐水。结果与结论:①荧光显微镜下实验组每张切片脑组织GFP标记阳性的绿色荧光细胞计数平均值显著多于阳性对照组。②移植后第7天治疗组与其他各组神经功能损害评分差异无显著性意义;移植后28d,各组神经功能均有不同程度恢复,实验组神经功能恢复明显优于阳性对照组和空白对照组(P<0.05)。③实验组与其他两组相比,大鼠脑梗死体积均显著减少。④实验组脑组织匀浆胶质细胞源性神经营养因子水平较阳性对照组、空白对照组明显增高。提示血脑屏障开放剂甘露醇促进静脉移植CD34+细胞通过血脑屏障迁入至脑组织,并增强静脉移植CD34+细胞治疗脑梗死的疗效。
- 余国龙欧雅莉杨天伦方立胡柯
- 关键词：CD34+细胞细胞移植静脉途径脑梗死
