内蒙古自治区自然科学基金(200508010412)
- 作品数：3 被引量：18H指数：2
- 相关作者：杨莲茹王军申之义王瑞孙晓智更多>>
- 相关机构：内蒙古农业大学内蒙古大学更多>>
- 发文基金：内蒙古自治区自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 呼和浩特市区牛种布鲁菌bp26和omp10的克隆被引量：1
- 2011年
- 为明确试验布鲁菌和参考布鲁菌菌株与基因库中布鲁菌外膜蛋白BP26和OMP10基因间的同源性。利用布鲁菌外膜蛋白bp26和omp10基因,针对试验布鲁菌和参考布鲁菌菌株进行克隆和序列分析。根据GenBank发表的布鲁菌bp26基因和omp10基因,分别设计合成一对特异性引物,以提取的试验布鲁菌和2株参考布鲁菌的总DNA为模板,通过聚合酶链式反应(PCR)技术扩增得到bp26和omp10基因,回收纯化后将这两个基因分别连接到pMD18-T载体上,热激发转化受体菌大肠杆菌DH5α,质粒提取、PCR鉴定、测序。结果表明,bp26全长为995 bp,包含一个由753 bp组成的完整开放阅读框,试验菌株的同源性为100%,与参考菌株M5、S2的同源性分别为100%和99.9%,与参考序列S19、870的同源性分别为99.9%和100%。omp10全长531 bp,包含一个由396 bp组成的完整开放阅读框,试验菌株的同源性为100%,与参考菌株M5、S2的同源性均分别为100%,与参考序列544的同源性分别为99.7%。证实bp26基因和omp10基因在各种型间的同源性都在99%以上,表明这两个基因在布鲁菌属是高度保守的。
- 王军王瑞杨莲茹郭志亮于翠玲申之义
- 关键词：布鲁菌同源
- 流产布鲁氏菌bp26和omp10基因的同源性分析被引量：4
- 2011年
- 利用布鲁氏菌外膜蛋白bp26基因和omp10基因,对分离的布鲁氏菌和参考布鲁氏菌菌株进行克隆和序列分析,以明确分离的布鲁氏菌和参考布鲁氏菌菌株与基因库中的布鲁氏菌外膜蛋白bp26基因和omp10基因间的同源性。根据GenBank中的布鲁氏菌bp26基因和omp10基因,分别设计合成了1对特异性引物,以提取的分离株布鲁氏菌和2株参考布鲁氏菌的总DNA为模板,通过PCR技术扩增得到了bp26基因和omp10基因,回收纯化后将这2个基因分别连接到pMD18-T载体上,热激发转化受体菌大肠杆菌DH5α,并进行质粒提取、PCR鉴定和测序。结果表明,bp26基因全长为995bp,包含1个由753bp的核苷酸组成的完整开放阅读框,分离菌株的同源性为100%,与参考菌株M5、S2的同源性分别为100%和99.9%,与参考序列S19、870的同源性分别为99.9%和100%;omp10基因全长531bp,包含1个由396bp的核苷酸组成的完整开放阅读框,分离菌株的同源性为100%,与参考菌株M5、S2的同源性均为100%,与参考序列544的同源性为99.7%。证实bp26基因和omp10基因在各种型间的同源性都在99%以上,表明这2个基因在布鲁氏菌属的细菌中是高度保守的。
- 王军王瑞申之义杨莲茹
- 关键词：布鲁氏菌同源性
- 奶牛布鲁氏菌病病原PCR检测方法的建立被引量：13
- 2007年
- 为了弥补血清学和细菌学方法检测和诊断奶牛布鲁氏菌病存在的不足,根据编码牛种布鲁氏菌31KDa外膜蛋白基因的核苷酸序列设计了1对PCR引物,通过对影响PCR扩增条件的优化,建立了快速检测奶牛布鲁氏菌病病原的PCR方法。特异性检测表明,在同一反应条件下,该引物对引起奶牛布鲁氏菌病的牛种、羊种、猪种布鲁氏菌制备的模板DNA均能扩增出384bp目的基因片段,而对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、马流产沙门氏杆菌、溶血性链球菌、嗜肺巴氏杆菌制备的模板分别进行扩增均呈阴性。敏感性检测显示,最低可检出1.5pg的模板DNA。结果表明:本试验所建立的奶牛布鲁氏菌病病原PCR检测方法具有较高的特异性和敏感性。
- 杨莲茹乌伦吉如嘎王建明孙晓智王军
- 关键词：奶牛布鲁氏菌聚合酶链反应
