国家科技重大专项(2013ZX10004-803)
- 作品数：4 被引量：16H指数：2
- 相关作者：修冰水李鹏飞张贺秋葛红卫戴云更多>>
- 相关机构：军事医学科学院北京市红十字血液中心河北联合大学更多>>
- 发文基金：国家科技重大专项更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 腮腺炎病毒核蛋白原核表达及其血清学检测方法的建立被引量：2
- 2017年
- 目的可溶性表达具有良好抗原性的腮腺炎病毒核蛋白(nuclear protein,NP),并建立特异性的腮腺炎病毒IgG抗体血清学检测方法。方法提取腮腺炎病毒RNA,用RT-PCR法扩增NP基因全长,并连接至pET-32a(+)载体,构建重组表达质粒pET-32a(+)-NP,鉴定正确后转化大肠埃希菌BL21(DE3)菌株,异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(isopropyl-β-D-1-thiogalactopyranoside,IPTG)诱导表达,可溶性成分经饱和硫酸铵沉淀粗提后,再利用镍柱进行亲和层析纯化,获得高纯度的NP蛋白,并用Western blot方法进行鉴定。包被纯化后NP抗原建立间接酶联免疫吸附测定(enzyme-linked immunosorbent assays,ELISA)检测方法 (NP ELISA法),并检测了348份健康儿童血清中抗腮腺炎病毒IgG抗体水平,与维润腮腺炎病毒ELISA IgG抗体检测试剂盒(维润ELISA法)进行平行比较。结果本研究建立的NP ELISA法和维润ELISA法符合率为78.45%(273/348);与维润ELISA法比较灵敏性为72.58%(135/186),特异性为85.19%(138/162)。两种方法检测348份健康儿童血清腮腺炎病毒IgG抗体的阳性率分别为45.69%(159/348)和53.45%(186/348)。结论利用原核表达的方法成功制备出具有腮腺炎抗原特性的NP抗原,并建立了腮腺炎病毒IgG抗体ELISA检测方法,为腮腺炎病毒人群血清流行病学调查奠定了基础,但需进一步使用中和试验评估两种方法的敏感性和特异性。
- 陈红利曹蕾郉文月崔爱利祝双利毛乃颖许文波扈瑞平
- 关键词：腮腺炎病毒血清学间接ELISA检测方法WESTERNBLOT
- 腺病毒55型抗原表位分析及评价被引量：2
- 2014年
- 目的：筛选腺病毒55型（Ad55）抗原表位，为研制腺病毒免疫诊断试剂提供基础。方法：采用生物信息学方法预测Ad55六邻体、纤突的B细胞抗原表位；利用大肠杆菌优势密码子获得相应基因，插入载体pBVIL-1克隆表达后获得重组Ad55表位抗原；用临床疑似腺病毒呼吸道感染患者血清对重组Ad55表位抗原活性进行检测，用ROC曲线分析重组Ad55抗原的诊断意义；采用ClustalX软件进行多序列比较。结果：Ad55六邻体含有6个主要抗原表位，纤突含有2个主要抗原表位；采用退火延伸法获得上述8种表位基因，片段长度为90～180bp；获得上述8种重组基因工程抗原，相对分子质量为18X10^3-21x10^3；血清学检测的ROC曲线分析显示，270-320、410-460和135-165氨基酸残基抗原表位的AUC面积超过0．75，具有一定的诊断意义（P〈0．05）；序列比较结果显示，上述3种抗原表位与腺病毒11型序列高度同源，与3型存在较大差异。结论：获得了3个Ad55主要抗原，对研制通用性呼吸道传播腺病毒免疫诊断试剂具有一定的意义。
- 李鹏飞陈堃修冰水张庆波张贺秋
- 关键词：抗原表位
- 北京市无偿献血人群梅毒抗体筛查结果调查被引量：12
- 2014年
- 目的了解北京市区无偿献血者梅毒传染指标流行情况,为无偿献血的招募策略调整提供依据。方法分析2007年1月1日～2011月12月31日北京市红十字血液中心无偿献血者抗梅毒螺旋体的检测结果,按性别、年龄、职业、文化程度、献血方式、献血组织形式进行分层,回顾性调查分析各层5年间的整体情况。结果 2007～2011年5年间北京市红十字血液中心1 065 177人次无偿献血者梅毒抗体筛查阳性者4923例,阳性率为0.462%;女性的阳性筛查率高于男性(χ2=27.84,P<0.05);梅毒抗体阳性检出率随着年龄增长而增加,不同年龄层之间差异有统计学意义(P<0.05);5种职业献血人群的阳性率间差异有统计学意义(P<0.05),不合格率排序为农民>其他>工人>职员>学生;不同文化程度、不同献血形式以及不同献血组织形式献血人群的检测结果差异均有统计学意义(P<0.05),机采项目的抗梅毒螺旋体检测阳性率高于全血,高中以下人群和家庭互助人群的阳性率最高。结论献血者选择过程的质量控制是招募安全血源的重要环节,根据本地献血人群的特点,应选择低危的、具有较高文化程度的年轻人和学生,积极引导他们成为固定献血者。同时,提高检测效能进一步保证血液安全。
- 张莉袁曜孙莉葛红卫戴云修冰水
- 关键词：无偿献血者梅毒抗体筛查招募策略
- 埃博拉病毒NP抗原表位区段的克隆和表达
- 2014年
- 目的分析埃博拉病毒核蛋白（NP）抗原表位,克隆表达埃博拉病毒NP抗原,为免疫学诊断试剂的研究奠定基础。方法采用BioSun生物学软件预测分析埃博拉病毒NP抗原的氨基酸表位区间,采用大肠杆菌优势密码子反向翻译成基因序列,采用PCR退火合成法合成NP优势密码子抗原基因,并利用载体pBVIL1进行克隆表达。采用间接ELISA技术评价获得NP抗原的特异性。结果确定埃博拉病毒NP抗原的氨基酸表位位于360~739 aa,共设计36条引物,扩增合成1140 bp的NP抗原基因,克隆表达后,融合蛋白相对分子质量为58×10^3,测序结果显示插入的NP基因正确。初步结果显示,NP抗原的特异性为99.24%（130/131）。结论获得埃博拉病毒NP抗原,为进一步研制特异的埃博拉病毒快速诊断试剂提供了抗原储备。
- 王晓丹李鹏飞冯晓燕朱翠侠阙海萍张旭辉刘志强段翠密修冰水张贺秋
- 关键词：埃博拉病毒核蛋白
