国家自然科学基金(30572009)
- 作品数：20 被引量：51H指数：5
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- 视神经损伤的基因治疗研究进展被引量：4
- 2009年
- 视神经损伤后,所处的微环境发生了较大改变,如何通过基因治疗的手段调整这些变化,使其更好地发挥对损伤视神经的保护作用是近期研究的热点。视神经及视网膜神经节细胞(RGCs)与相关的视觉通路作为一种成熟的中枢神经系统研究模型,其研究结果对中枢神经系统疾病的治疗有积极的意义。拟从视神经损伤后RGCs死亡的特点、所处微环境的改变、基因治疗工具及治疗损伤常见的基因干预等方面进行综述。
- 尹小磊袁容娣叶剑
- 关键词：视神经基因治疗
- siRNA对体外培养大鼠海马神经细胞NgR基因表达的抑制
- 2007年
- 目的研究siRNA对体外培养的大鼠海马神经细胞NgR基因表达抑制作用,为进一步研究中枢神经损伤修复提供实验基础。方法使用阳离子脂质体转染试剂将体外化学合成的针对NgR基因的siRNA转染体外培养的海马神经细胞,GAP43对培养细胞进行鉴定,分别于转染后48小时、1周收集转染细胞,提取总蛋白并定量。结果海马神经细胞成功培养,转染48小时后NgR蛋白的含量为阴性对照组的45.11%,差异显著P<0.05;转染1周后NgR蛋白的含量为阴性对照组的99.18%,差异不明显。结论化学合成的针对NgR基因的siRNA在转染48小时后能显著下调NgR基因表达,但在转染1周后对NgR基因表达影响不明显。
- 尹小磊叶剑陈春林
- 关键词：SIRNANOGO受体RNA干扰海马神经细胞
- NgR蛋白在新生SD大鼠视网膜中的表达被引量：5
- 2007年
- 目的观察NgR(Nogo-66 receptor)蛋白在出生24hSD大鼠视网膜中的表达。方法使用免疫荧光组织化学技术及激光共聚焦显微镜观察6只出生24h的正常SD大鼠视网膜中NgR蛋白的表达。结果在6只出生24h的正常SD大鼠视网膜神经节细胞及其突起上可以观察到NgR蛋白的表达,且该蛋白主要分布在视网膜神经节细胞核的周围。结论出生24h的SD大鼠视网膜中就已经存在NgR蛋白,为进一步研究哺乳动物中枢神经系统损伤后轴突再生修复奠定了基础。
- 尹小磊叶剑陈春林
- 关键词：视网膜NGR免疫荧光组织化学激光共聚焦显微镜
- siNgR重组质粒载体构建及效应检测被引量：3
- 2008年
- 目的构建具有特异阻断大鼠NgR基因功能的siRNA表达系统，为视神经损伤基因治疗提供新的方法。方法实验研究。根据Genbank提供的NgR基因mRNA序列，应用设计软件设计特异性的短链寡核苷酸，化学合成2对编码短发夹RNA的寡核苷酸序列，退火、克隆到经BglⅡ、HindⅢ酶切处理的pSUPER—EGFP质粒，获得重组siNgR质粒，用EcoRⅠ和HindⅢ双酶切和序列测定对重组体进行鉴定，最后将构建的表达载体转染Wistar大鼠体内视网膜神经节细胞，免疫印迹法观察对NgR蛋白表达的影响。结果重组siNgR表达载体的酶切鉴定结果和测序结果表明重组载体构建成功。视网膜冰冻切片后，经荧光显微镜观察，视网膜神经节细胞层和视神经纤维可见绿色荧光蛋白表达。免疫印迹法分析表明，siNgR-1和siNgR-2可抑制RGCs NgR蛋白的表达，而siNgR-C和pSUPER—EGFP对照对NgR蛋白的表达无明显影响。结论成功构建了siRNA表达载体，此载体具有阻断NgR基因的表达的功能，为进一步研究视神经损伤基因治疗打下基础。
- 陈春林陈小皤尹小磊叶剑
- 关键词：髓磷脂蛋白质类重组蛋白质类视网膜神经节细胞神经再生质粒
- 荧光金逆行标记观察正常大鼠视网膜神经节细胞及轴突被引量：11
- 2006年
- 使用荧光金通过立体定位仪逆行标记对正常大鼠视网膜神经节细胞及其轴突进行观察研究。成年SD大鼠6只(12眼),体重250±20g,按照标记后1周,2周分为2组,每组3只(n=6眼)。将荧光金注射到大鼠的外侧膝状体和上丘,观察视网膜神经节细胞(RGCs)的数量和视网膜神经节细胞及其轴突的形态。结果显示:视网膜铺片的节细胞边界清楚,易于观察和计数。荧光金标记1周后,RGCs密度为2210±128个/mm2;标记后2周,RGCs密度为2164±117个/mm2。视网膜神经节细胞的轴突内荧光分布均匀,呈线性。结论是使用荧光金逆行标记能够可靠、有效地研究视网膜神经节细胞及其轴突。
- 尹小磊叶剑陈春林
- 关键词：荧光金视网膜神经节细胞视神经
- 视网膜内节细胞轴突定向发育的分子基础被引量：1
- 2008年
- 在视觉系统的发育过程中,钙黏素、硫酸软骨素蛋白多糖、Slit、细胞黏附分子L1、Eph/ephrin、Sonic hedgehog等分子在视网膜内节细胞轴突定向发育的过程中发挥了关键的作用。而这些轴突定向影响因素,对视神经损伤和中枢神经疾病的治疗同样有积极的指导意义。
- 尹小磊袁容娣叶剑
- 关键词：轴突导向生长锥
- 改良胎鼠视网膜干细胞的分离培养方法
- 2009年
- 目的对大鼠胚胎视网膜干细胞的培养方法进行改良,并观察其生长及分化特性,以期寻求有效的视网膜干细胞培养方法。方法取18d孕龄的SD大鼠视网膜睫状缘(CMZ)色素上皮层组织,通过剪切、吹打、胰酶消化、过滤、离心后,在DMEM/F12培养基中加入碱性成纤维细胞生长因子(bFGF),用无血清培养技术扩增视网膜干细胞;传代后离心收集培养细胞,以5%胎牛血清诱导细胞分化;用免疫细胞化学技术对干细胞及诱导分化的细胞进行鉴定,确定所培养细胞是否为干细胞且具有分化潜能。结果从SD胚胎大鼠视网膜中分离的细胞在体外悬浮生长,形成致密的球形细胞团,传代后能够生成新的细胞团,免疫细胞化学染色显示原代和传代细胞中Nestin和掺入BrDU均呈阳性表达。诱导分化后的细胞经鉴定证明部分表达胸腺细胞表面糖蛋白(Thy1.1)。结论SD胎鼠视网膜内存在视网膜干细胞,通过改良方法可以进行体外培养和扩增,产生分化,部分分化细胞具有视网膜神经细胞特性,包括分化形成节细胞。
- 郑政袁容娣叶剑尹小磊
- 关键词：视网膜干细胞细胞培养技术细胞分化
- 视网膜干细胞的研究进展
- 2009年
- 干细胞研究是近年生命科学研究的热点之一,近来在干细胞研究领域的进步已经给治疗甚至是治愈某些变性疾病和不能治疗的人类疾病带来了希望。在体外,睫状缘色素上皮细胞来源的视网膜干细胞能增殖形成克隆球,并能分化成视网膜各种细胞类型,包括光感受器细胞,双极细胞及神经胶质细胞等等。视网膜干细胞的移植可以作为治疗一些致盲性眼病潜在治疗方式。因此,视网膜干细胞的研究对于视网膜变性疾病,如遗传性视网膜变性、青光眼、年龄相关性黄斑变性等,提供了新的治疗途径。现就视网膜干细胞的培养与鉴定,增殖、分化、移植以及信号机制方面的研究进展作一综述。
- 郑政叶剑袁容娣
- 关键词：视网膜干细胞分化信号机制
- 新生大鼠视神经损伤后视觉系统中GAP-43的表达被引量：2
- 2010年
- 目的:研究新生大鼠视神经横断伤后视觉系统中神经生长相关蛋白质(GAP-43)的表达变化及意义。方法:新生健康SD大鼠(24h)72只,随机分为正常对照组和视神经横断组。采用免疫组织化学方法检测正常发育及视神经损伤后发育过程中1、3、7、14、28和56d的SD大鼠视觉系统中GAP-43的表达。结果:正常对照组SD大鼠出生后整个发育阶段视觉系统中均可检测到GAP-43阳性细胞的表达,且随着神经元发育成熟表达逐渐下降(P<0.05);视神经横断组GAP-43在损伤后发育过程中可检测到阳性表达,且较正常对照组增高,1d变化不明显,3d开始增高,7～14d达峰值,之后逐渐下降至正常水平,直至56d基本恢复正常水平(P<0.05)。结论:GAP-43在新生鼠视觉系统中随生长发育而改变,在神经横断后GAP-43表达增强,表明GAP-43在视觉系统发育和再生过程中起重要作用。
- 霍妍袁容娣叶剑尹小磊邹欢
- 关键词：神经生长相关蛋白视觉系统
- 神经损伤轴突再生影响因素研究新进展被引量：3
- 2008年
- 神经损伤会导致体内一系列微环境的改变,这些改变包括炎症反应、各种因子、细胞信号等的变化,它们直接调控损伤神经轴突的再生,本文拟对影响轴突再生的一些相关因素作一简要回顾。
- 尹小磊袁容娣叶剑
