河北省生物工程重点学科资助(200500021)
- 作品数：2 被引量：20H指数：2
- 相关作者：刘建荣赵晓瑜刘建国顾雅君宋小青更多>>
- 相关机构：河北大学更多>>
- 发文基金：河北省生物工程重点学科资助河北省教育厅科学技术研究计划河北省科技攻关计划更多>>
- 相关领域：生物学更多>>
- 金属螯合亲和层析纯化和复性重组人铜锌超氧化物歧化酶被引量：11
- 2005年
- 将重组人铜锌超氧化物歧化酶(rhCu,ZnSOD)包含体(经纯化后纯度达80%以上)以稀释法或透析法初步复性后,分别再经金属螯合亲和层析(MCAC)纯化。结果透析复性样品和稀释复性样品经MCAC纯化后的rhSOD比活是各自上柱前样品比活的2.2倍和5.3倍,蛋白回收率分别为64%和25%,同时两者活性回收率皆大于130%。表明目标蛋白rhSOD在经过MCAC纯化的同时又获得进一步复性。SDSPAGE显示rhSOD为19kD的单一条带,纯度大于95%,比活达到5000umg左右,同时NBT生物活性染色鉴定显示出很强的超氧化物歧化酶活性。表明MCAC对于复性不完全的rhCu,ZnSOD而言是一种纯化和使其进一步复性的简便省时且有效的方法。该方法为以包含体形式表达的基因重组蛋白的纯化和复性提供了新思路。
- 刘建荣刘建国赵晓瑜顾雅君
- 关键词：金属螯合亲和层析复性包含体
- 重组人Cu,Zn-SOD包含体的复性、纯化及复性蛋白稳定性研究被引量：9
- 2007年
- 目的通过体外复性和纯化技术获得具有高纯度、高生物活性的重组人铜锌超氧化物歧化酶（rhCu,Zn-SOD）,并研究复性蛋白的稳定性。方法以透析法对在大肠杆菌中以包含体形式表达的rhCu,Zn-SOD进行复性,采用金属螯合亲和层析对复性样品进行纯化,通过酶活性测定考查复性和纯化的rhCu,Zn-SOD的热稳定性、pH稳定性和对变性剂的稳定性。结果建立了体外透析复性的基本条件,其比活可达2 380 U·mg^-1。该复性样品经金属螯合亲和层析纯化后,结果得到纯度大于95%、比活5 000 U·mg^-1、活性回收率大于100%的目的蛋白。复性和纯化蛋白在温度25-70℃和pH 5.0-10.5内活性稳定,并可耐受2-10 mol·L^-1的尿素和2%-8%的十二烷基硫酸钠（SDS）,对更强烈的变性剂盐酸胍稳定性较弱。结论确定了重组人Cu,Zn-SOD包含体的体外复性条件和复性蛋白纯化方法,且复性蛋白表现出很好的稳定性,为重组人Cu,Zn-SOD的生产奠定了良好基础。
- 刘建荣赵晓瑜宋小青静天玉
- 关键词：包含体复性
