转基因生物新品种培育专项(2009ZX08009-147B)
- 作品数：4 被引量：4H指数：1
- 相关作者：周恩民吴海珍吕军华肖一红刘宁宁更多>>
- 相关机构：西北农林科技大学山东农业大学山东省动物疫病预防与控制中心更多>>
- 发文基金：转基因生物新品种培育专项国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 非肌肉肌球蛋白Ⅱ型重链A单克隆抗体的制备及其靶位点区域的鉴定
- 2012年
- 为制备非肌肉肌球蛋白Ⅱ型重链A(NMHC-II A)的单克隆抗体(MAb),本研究将编码NMHC-Ⅱ A羧基端1 651～1 960氨基酸的表达重组质粒转化到大肠杆菌感受态细胞Rosseta中诱导表达,重组蛋白纯化后免疫BALB/c小鼠,分离小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞用PEG 4000介导融合。ELISA方法检测筛选阳性杂交瘤细胞,制备腹水并纯化MAb,以间接免疫荧光和免疫沉淀方法鉴定MAb的特异性,western blot检测MAb靶位点区域。结果表明,通过筛选得到1株稳定分泌抗体的杂交瘤细胞系,其抗体亚型为IgG1,细胞培养上清和腹水效价分别为1∶2 560和1∶1.0×106;该MAb能够特异性结合相应抗原,并结合Marc-145细胞;western blot结果显示该抗体与NMHC-Ⅱ A的1 812～1 894氨基酸位点结合。该抗体的制备为研究NMHC-Ⅱ A在猪繁殖与呼吸综合征病毒感染细胞中的作用奠定了基础。
- 吴海珍刘宁宁张璐吕军华肖一红周恩民
- 关键词：单克隆抗体
- 山东省规模化猪场PRRSV NSP2变异株的感染情况调查被引量：1
- 2013年
- 为了解山东省规模化猪场猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒(PRRSV)NSP2变异株的感染情况,2010～2011年本研究从山东省未免猪繁殖与呼吸障碍综合征(PRRS)疫苗猪场、免疫进口PRRS弱毒苗猪场和免疫国产PRRS弱毒苗猪场选择20个临床表观健康的规模化猪场,采集830份血清,利用RT-PCR方法对其进行PRRSVNSP2变异株病原学检测。结果表明山东省规模化猪场普遍存在PRRSV NSP2变异株感染,而且临床表观健康的未免疫PRRS疫苗猪场、免疫进口PRRS弱毒苗猪场及免疫国产PRRS弱毒苗猪场中PRRSV NSP2变异株的检出率由高到低,同一猪群中存在PRRSV NSP2变异株野毒和疫苗毒。
- 成岩赵梦娇王美君聂兆晶刘少宁周恩民姜世金田夫林
- 关键词：NSP2变异株弱毒苗
- 非肌肉肌球蛋白Ⅱ型重链A羧基端蛋白的真核表达及在猪繁殖与呼吸综合征病毒感染Marc-145细胞中的作用被引量：2
- 2012年
- 前期研究结果证明抗猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)GP5蛋白的抗独特型抗体特异性结合Marc-145细胞上的非肌肉肌球蛋白Ⅱ型重链A(Nonmuscle myosin heavy chainⅡ-A,NMHCⅡ-A)蛋白,其结合位点位于NMHCⅡ-A的羧基端。本研究通过真核表达NMHCⅡ-A的羧基端(PRA)蛋白,验证其对PRRSV感染Marc-145细胞的作用。通过Bac-to-Bac杆状病毒表达系统表达PRA蛋白。Western blot和间接免疫荧光鉴定PRA蛋白的表达及其与Marc-145细胞的结合。通过病毒中和试验、荧光聚焦中和试验和荧光定量PCR检测PRA蛋白对PRRSV感染Marc-145细胞的作用。Western blot和间接免疫荧光结果表明,PRA蛋白在真核细胞中得到成功表达,其最高表达量为接种1个MOI杆状病毒后96h时。PRA蛋白特异性结合Marc-145细胞,使PRRSV感染Marc-145细胞延迟24h并且感染效率降低60%。真核表达的NMHCⅡ-A羧基端蛋白能特异性结合Marc-145细胞并有效降低PRRSV的感染。这些结果为进一步阐明NMHCⅡ-A在PRRSV感染细胞过程中的作用提供了新的依据。
- 吕军华刘宁宁赵钦马玉萍张冲王向鹏胡守彬赵菲菲吴海珍肖一红周恩民
- 关键词：杆状病毒
- 应用TaqMan荧光定量RT-PCR方法检测PRRSV变异株在莱芜黑猪体内动态分布被引量：1
- 2013年
- 为了检测猪繁殖与呼吸综合征病毒（Reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV）接种莱芜黑猪后病毒在体内的增殖分布规律,将15头PRRSV阴性的莱芜黑猪仔猪随机分成两组,试验组10头,对照组5头。分别于攻毒后3、7、14、21、28 d各剖杀试验组2头,对照组1头,采集脾脏、肺脏、心脏、肝脏、肾脏、扁桃体、颌下淋巴结、腹股沟淋巴结和肠系膜淋巴结等组织,并应用建立的荧光定量RT-PCR方法对各组织中病毒进行定量。结果表明,PRRSV攻毒后d 3感染组猪的各组织中均检测到低拷贝病毒核酸存在,攻毒后7~21 d,各种组织中的病毒载量维持在较高水平,而攻毒后d 28时,多数组织中的PRRSV含量明显下降。扁桃体及各种淋巴结中的病毒载量要明显高于其他脏器,显示PRRSV在感染莱芜黑猪后对淋巴组织具有组织嗜性。
- 王辉李井新孙振谢之景姜运良成子强周恩民姜世金
- 关键词：莱芜黑猪
