国家自然科学基金(30572021)
- 作品数：3 被引量：24H指数：3
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- 相关机构：中南大学中南大学湘雅二医院复旦大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金中国博士后科学基金湖南省卫生厅资助项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 连接蛋白基因一个新致聋突变体p.Y155X及功能分析被引量：7
- 2010年
- 目的 观察连接蛋白（connexin 26,CX26）基因的一个新致聋突变c.465T→A,P.Y155X,在体外表达细胞功能的改变,以探讨其致聋的可能机理.方法 常染色体隐性遗传耳聋家系的先证者外周血抽提DNA,DNA直接测序法分析CX26基因突变.将在该家系发现的突变c.465T→A,P.Y155X和野生型CX26（wtCX26）定向克隆到pEGFP-N1质粒,构建CX26 p.Y155X-EGFP及wtCX26-EGFP融合蛋白表达载体,转染HeLa细胞,Western印迹分析蛋白的表达,共聚焦显微镜观察突变蛋白和野生型CX26在HeLa细胞的定位及有无间隙连接斑形成,染料转移实验分析间隙连接的功能.结果 在该耳聋家系发现CX26基因一个新的致聋突变：c.465T→A,P.Y155X.CX26 P.Y155X突变体在HeLa细胞表达的突变蛋白的分子量小于野生型蛋白分子量;突变蛋白在细胞质表达,不能分布到细胞膜和形成间隙连接,无染料转移.野生型表达于细胞膜并形成间隙连接斑,能转移染料.结论 CX26 P.Y155X突变体在翻译后不能从细胞内转运到细胞膜,不能形成间隙连接通道.CX26基因c.465T→A,P.Y155X导致常染色体隐性遗传性聋.
- 杨中纯肖自安谢鼎华夏昆
- 关键词：连接蛋白基因突变耳聋
- Stathmin基因在喉鳞状细胞癌中的表达及临床意义被引量：9
- 2008年
- 目的观察stathmin基因和蛋白质在喉鳞状细胞癌（简称鳞癌）中的表达情况，探讨stathmin基因与喉鳞癌生物学行为的关系及临床意义，进一步认识喉鳞癌发生和发展的分子机制。方法选取2005年3月至2006年4月的38例喉鳞癌患者，术中从肿瘤中心部位取癌组织（实验组），在肿瘤边缘外1．0cm部位取癌旁正常组织（对照组）。应用半定量逆转录．聚合酶链反应（RT-PCR）分析38例患者的喉鳞癌组织和癌旁正常组织中stathmin基因mRNA的表达水平，冰冻切片免疫组织化学方法检测喉鳞癌组织和癌旁正常组织中stathmin蛋白的表达情况。结果RT-PCR结果显示，stathmin基因mRNA在38例喉癌患者的喉癌组织和癌旁正常组织均呈阳性表达；经半定量分析，stathminmRNA在喉癌组织中的表达水平明显高于在癌旁正常组织的表达水平（t=9.655，P〈0．05）。免疫组织化学发现，stathmin蛋白在26例（26／38，68．4％）患者的喉癌组织呈阳性表达，在13例（13／38，34．2％）患者的癌旁正常组织呈弱阳性表达；stathmin蛋白在喉癌组织中的阳性表达率明显高于在癌旁正常组织的阳性表达率（X^2=8．901，P〈0．05）。同时发现，stathmin mRNA的表达水平和stathmin蛋白的阳性表达率在Ⅲ期和Ⅳ期喉癌组明显高于Ⅰ期和Ⅱ期病例组（t=6．284，）（X^2=5.810，P〈0.05），有颈部淋巴转移组明显高于无转移组（t=9．350,X^2=6．923，P〈0.05）。结论stathmin基因和蛋白在喉鳞癌中的表达明显高于癌旁正常组织，在中晚期喉鳞癌中的表达明显高于早期喉鳞癌，并且与颈淋巴转移有关。stathmin基因与喉鳞癌的发生和发展均有密切关系，并可能与喉癌的预后有关。
- 张才云肖自安曾益慈杨新明谢鼎华夏昆刘伏友黄伯云
- 关键词：喉肿瘤鳞状细胞免疫组织化学
- GJB2基因在湖南地区非综合征耳聋患者中的突变分析被引量：8
- 2009年
- 目的:为明确湖南地区人群中非综合征性耳聋(NSHL)患者发病的遗传学基础,分析患者间隙连接蛋白2(GJB2)基因突变的情况,并探索其发病的分子机制。方法:经过详细的病史询问和临床检查,收集符合要求、无亲缘关系的NSHL患者140例。PCR扩增患者GJB2基因的编码序列全长,纯化回收扩增产物,直接双向测序,用DNAStar软件分析测序结果,统计患者GJB2基因突变情况。设计1对错配引物并酶切以证实该新发现的突变。结果:在140名无亲缘关系的NSHL患者中,共有56例检测到GJB2基因突变,检出率达40%(56/140);其中29例患者发现2个GJB2等位基因突变,另27例患者只有1个GJB2等位基因突变,等位基因突变率为30.4%(85/280)。总共发现10种不同的碱基变异,包括7种致病突变和3种多态。7种致病突变分别是无义突变c.139G>T,移码突变c.176_191del16和c.235delC,错义突变c.109G>A,c.344T>G,c.550C>T和c.571T>C。c.344T>G是1个新报道的错义突变。最常见的突变是c.235delC,共有27名患者检测到该突变,达19.3%(27/140)。c.109G>A突变频率仅次于c.235delC,有25名患者检测到该突变,检出率达17.9%(25/140)。结论:GJB2突变是导致湖南地区人群NSHL的最常见的基因突变,其c.235delC突变是湖南地区人群NSHL最常见的突变类型,发现1个GJB2基因的世界首次报道的新突变c.344T>G(F115C)。
- 王树辉胡正茂肖自安唐青来夏昆杨新明
- 关键词：非综合征性耳聋突变分析
