上海市科委医学引导类科技项目(10411964600)
- 作品数：7 被引量：4H指数：2
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- 相关机构：同济大学附属口腔医院同济大学复旦大学更多>>
- 发文基金：上海市科委医学引导类科技项目国家自然科学基金更多>>
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- 兔抗鼠CaV1.2羧基末端多克隆抗体的制备和鉴定
- 2011年
- 目的:制备高效价的兔抗鼠钙通道CaV1.2羧基末端多克隆抗血清。方法:人工合成鼠L型钙离子通道CaV1.2羧基末端短肽;用该短肽与马来酰胺活化匙孔血蓝蛋白(Keyhole limpet hemocyanin,KLH)偶联免疫兔获得抗血清;利用饱和硫酸铵盐析和亲和层析法获得纯化后抗血清;酶联免疫吸附法实验测定抗体效价;斑点杂交实验测定抗血清特异性。结果:经免疫得到兔抗鼠L型钙离子通道CaV1.2羧基末端多克隆抗血清;ELISA和斑点杂交实验证实兔抗鼠CaV1.2羧基末端多克隆抗体可以特异性识别CaV1.2羧基末端多肽。结论:本实验成功制备纯化抗CaV1.2羧基末端多克隆抗体并且可以用于后续CaV1.2羧基末端水解片段的功能研究。
- 许多刘大力赵守亮粱景平
- 关键词：钙离子通道抗体制备酶联免疫吸附法
- 尼莫地平对大鼠牙髓干细胞分化后DMP-1表达的影响
- 2014年
- 目的观察尼莫地平对牙本质基质蛋白-1在大鼠牙髓干细胞分化前后基因表达的影响。方法通过特殊培养液诱导大鼠牙髓干细胞向成牙本质细胞方向分化,实验组分为正常诱导组和加入尼莫地平干扰组,在诱导后的不同时间点,1、3、5、7、10和14天,分别提取细胞的总RNA,通过Real-time PCR观察大鼠牙髓干细胞分化前后牙本质基质蛋白-1基因表达的变化,数据采用独立样本t检验。结果大鼠牙髓干细胞向成牙本质细胞方向分化后,1、3天的牙本质基质蛋白-1表达没有明显变化(P>0.05);5天变化较明显,差异有统计学意义(P<0.05);5、7、10和14天随着时间增加牙本质基质蛋白-1基因表达明显增高。加入尼莫地平干扰的诱导分化组和正常诱导组比较,同一时间点,牙本质基质蛋白-1的表达量减少(P<0.05)。结论尼莫地平可减少牙本质基质蛋白-1在大鼠牙髓干细胞向成牙本质细胞方向分化后的表达,推测L型钙离子通道可能在牙髓干细胞的分化中起重要的作用。
- 琚燕琴葛剑平黄晓峰许多蒋承智赵守亮
- 关键词：牙髓干细胞L型钙离子通道
- 经典瞬时受体电位通道1在大鼠牙胚发育过程中的表达
- 2015年
- 目的研究经典瞬时受体电位通道1(TRPC1)在大鼠牙胚发育过程中的表达并探讨其意义。方法制备大鼠牙胚发育各阶段(蕾状期E14.5、帽状期E16.5、钟状期E18.5、钟状晚期P1及牙根形成期P7)标本,进行TRPC1的免疫组化研究。结果 TRPC1在牙胚发育过程中呈动态时空表达。在蕾状期增厚的牙板上皮,帽状期和钟状早期的内釉上皮和外釉上皮,钟状晚期的成釉细胞和前成牙本质细胞及牙根形成期的成牙本质细胞和成釉细胞均可见阳性信号表达,且呈增强趋势。结论 TRPC1可能是一种新的参与调控牙胚细胞的增殖分化和牙齿发育矿化的跨膜信号转导分子。
- 杨俊李午丽陈龙杰蒋承智朱霞赵守亮
- 关键词：牙胚发育免疫组织化学
- Cav1.2羧基末端水解片段在SD大鼠牙胚中分布情况研究
- 目的：通过免疫组织化学方法研究Cav1.2及其羧基末端水解片段在出生后1天SD大鼠牙胚中的表达特征以及定位情况.方法：人工合成鼠L型钙离子通道Cav1.2羧基末端短肽；用该短肽与马来酰胺活化匙孔血蓝蛋白(Keyhole ...
- 赵守亮许多刘大力黄晓峰
- 关键词：L型钙离子通道抗体制备酶联免疫吸附法牙胚
- L型钙离子通道Cav 1.2在大鼠根尖牙乳头干细胞成牙向分化中的作用
- 2015年
- 目的利用慢病毒转染系统构建Cav 1.2基因沉默的大鼠根尖牙乳头干细胞（stem cells from apical papilla,SCAPs）,探讨Cav 1.2在大鼠牙乳头干细胞成牙向分化中的作用。方法取3周龄SD大鼠,采用酶消化法获取大鼠根尖牙乳头干细胞,取第二代大鼠根尖牙乳头干细胞进行克隆平板实验鉴定其增值能力;采用慢病毒转染的方法构建Cav 1.2基因沉默Sh-Cav 1.2牙乳头干细胞及对照组Luc-Cav 1.2牙乳头干细胞,RT-PCR及Western印迹法鉴定其转染效率,并诱导其向成牙本质细胞样细胞分化;在成牙向诱导分化第10天,RT-PCR及茜素红S染色观察Cav 1.2对大鼠根尖牙乳头干细胞成牙向分化的影响。结果分离获得较强增殖能力的大鼠牙乳头干细胞,其中每200个细胞可形成6~10个克隆;荧光倒置显微镜下转染48 h,Sh-Cav 1.2及Luc-Cav 1.2均呈现绿色荧光,转染效率均达到90%;在两组细胞成牙向诱导过程中,实验组Sh-Cav 1.2牙乳头干细胞成牙相关基因DSPP的表达及钙化结节的形成均明显低于对照组Luc-Cav 1.2。结论 L型钙离子通道Cav 1.2对大鼠根尖牙乳头干细胞成牙向分化有重要作用。
- 高倩倩葛剑平琚燕琴高健吴美生赵守亮
- 关键词：L型钙离子通道基因沉默
- L型钙离子通道在体外鼠牙胚发育中的表达被引量：1
- 2013年
- 目的观察L型钙离子通道在体外培养的牙胚发育过程中表达的时空特异性。方法取20只18 d胎龄的ICR孕鼠下颌第一磨牙牙胚,用Trowell培养系统进行培养。分别培养4 d、7 d,用小鼠抗Cav1.1单克隆抗体、兔抗Cav 1.2、Cav 1.3、Cav 1.4多克隆抗体进行免疫组织化学染色,光镜下观察在小鼠牙胚发育的不同阶段L型钙离子通道各种亚型的表达情况。结果 Cav 1.2和Cav 1.3在E 18 d、培养4 d、培养7 d时在不同的部位都有表达,但表达的强弱不同。未见有Cav 1.1和Cav 1.4的表达。结论 L型钙离子通道在牙胚发育过程中的表达具有时空特异性。
- 李艳赵守亮梁丽许多
- 关键词：牙胚L型钙离子通道
- 牙髓干细胞分化过程中L型钙离子通道羧基末端的表达被引量：2
- 2012年
- 目的:探讨牙髓干细胞(DPSCs)分化过程中L型钙离子通道羧基末端的表达。方法:利用酶消化法体外分离、培养大鼠牙髓干细胞;吉姆萨染色法检测大鼠牙髓干细胞的克隆形成能力;神经诱导体系下诱导牙髓干细胞向神经样细胞分化,免疫荧光染色检测细胞分化后胶质纤维酸蛋白(glial fibrillary acidic pro-tein,GFAP)的表达和细胞分化前后L型钙离子通道Cav 1.2及羧基末端的表达。结果:牙髓干细胞的克隆形成能力为每1 000个细胞形成2～17个克隆;免疫荧光染色检测诱导后细胞GFAP表达阳性;免疫荧光染色检测显示:牙髓干细胞分化前L型钙离子通道Cav 1.2羧基末端表达于细胞膜上,细胞分化后羧基末端同时表达于细胞膜上和细胞核中。结论:L型钙离子通道Cav 1.2羧基末端在牙髓干细胞分化过程中发生核转位,羧基末端可能在牙髓干细胞的分化过程中发挥着一定的作用。
- 黄晓峰葛剑平琚燕琴许多蒋承智赵守亮
- 关键词：牙髓干细胞L型钙离子通道细胞分化
- Cav1.2在大鼠磨牙牙胚发育中的时空表达被引量：3
- 2010年
- 目的观察L型钙离子通道Cav1.2亚型在大鼠磨牙牙胚发育过程中的时空表达特征,探讨其在牙齿发育中的作用。方法制作大鼠不同时期牙胚发育标本,采用免疫组织化学方法,观察Cav1.2在大鼠牙胚发育的不同时期的表达。结果 Cav1.2在大鼠磨牙发育的蕾状期、帽状期,牙蕾上皮和内釉上皮层呈弱阳性表达;钟状期时,Cav1.2在内釉上皮层和成牙本质细胞层呈阳性表达,并随着牙本质的矿化阳性表达增强。结论 Cav1.2在大鼠牙胚发育过程中具有时空表达特异性,推测其在牙胚的发育和细胞分化中发挥重要作用。
- 梁丽李艳许多赵守亮
- 关键词：牙胚免疫组织学
