国家自然科学基金(30760056)
- 作品数：13 被引量：64H指数：4
- 相关作者：马纪张富春邱立明王艳候凤更多>>
- 相关机构：新疆大学军事医学科学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金新疆生物资源基因工程重点实验室开放基金博士科研启动基金更多>>
- 相关领域：生物学农业科学更多>>
- 叶绿体型转昆虫抗冻蛋白基因烟草的耐寒性被引量：3
- 2009年
- 根据已构建的大豆叶绿体表达载体pJY01,设计特异性引物,将昆虫抗冻蛋白基因MpAFP149插入此载体中构成叶绿体表达载体pJY01-MpAFP149,利用基因枪轰击法转化烟草,经壮观霉素筛选获得4株叶绿体型转抗冻蛋白基因烟草株系。PCR和PCR-Southern结果显示外源基因已整合至烟草叶绿体基因组中,但同质化水平不高;RT-PCR结果也表明昆虫抗冻蛋白基因已发生了转录。将野生型烟草、叶绿体型转抗冻蛋白基因烟草及核转化T1代转抗冻蛋白基因烟草(pCAMBIA1302-MpAFP149)于–1℃低温处理3d,观察耐寒表型及测定相对电导率。结果表明,叶绿体型转基因烟草的耐寒表型优于野生型烟草,但与核转化的T1代转抗冻蛋白基因烟草无显著差异。处理3d时,叶绿体型转基因烟草和T1代转抗冻蛋白基因烟草的电导率分别为39.2%和38.2%,而野生型烟草已达73.7%。本实验获得的异质化转叶绿体抗冻蛋白基因烟草与转核基因烟草的耐寒力无差异。
- 王艳马纪黄薇邱立明叶锋张富春
- 关键词：烟草耐寒性
- 准噶尔小胸鳖甲融合抗冻蛋白活性的比较研究被引量：4
- 2008年
- 为了比较准噶尔小胸鳖甲Microdera punctipennis dzhungarica原核表达的不同融合抗冻蛋白活性是否存在差异,分别利用重组表达质粒pGEX-4T-1-Mpafp5和pMAL-p2x-Mpafp5在大肠杆菌Escherichia coliBL21(DE3)中诱导表达融合抗冻蛋白GST-MpAFP5和MBP-MpAFP5,并利用亲和层析纯化蛋白。SDS-PAGE分析结果证明获得了两种高效表达纯化的GST-MpAFP5和MBP-MpAFP5融合蛋白。在浓度为0.5mg/mL时,两种蛋白的热滞值分别为0.51℃和1.336℃,其溶液冰晶形态均为棱型。抗冻保护实验结果显示:准噶尔小胸鳖甲两种融合抗冻蛋白均能够显著提高细菌在低温下的存活率,并且MBP-MpAFP5对细菌的保护效果显著高于GST-MpAFP5。研究结果对于准噶尔小胸鳖甲抗冻蛋白的应用具有重要的理论意义。
- 李素丽张富春孙琳杰刘璇马纪
- 关键词：准噶尔小胸鳖甲抗冻蛋白原核表达热滞活性
- 低温下转昆虫抗冻蛋白基因烟草的亚显微结构变化被引量：1
- 2009年
- 分析在-1℃温度中处理1、2和3d的转昆虫抗冻蛋白基因MpAFP149烟草和野生型烟草亚细胞显微结构变化的结果表明,转基因烟草和野生型烟草的超微结构有差异,尤其是细胞膜、叶绿体和线粒体的膜。转基因烟草细胞器的膜结构伤害程度明显低于野生型烟草,这提示低温条件下转基因烟草中的抗冻蛋白可能有保护细胞膜和细胞器膜结构的作用,由此降低了低温的伤害。
- 王艳马纪邱立明王晶代春英张富春
- 关键词：低温胁迫超微结构
- 光滑鳖甲(Anatolica polita borealis)的生物学特性研究被引量：3
- 2008年
- 光滑鳖甲（Anatolica polita borealis）以成虫和不同龄期幼虫越冬，一般在4月上旬至8月中旬产卵．卵期为13～15d。根据室内饲养观察结果：光滑鳖甲幼虫龄期在8龄期仍然没有化蛹．其中1龄历期为3～4d，2龄历期为4～5d，3龄历期为7～8d．4龄历期为11～15d，5龄历期为12～14d，6龄历期为18～21d．7龄历期为20～26d，8龄历期为24～28d．本研究在建立光滑鳖甲室内人工饲养体系的基础上，对其形态特征、生活习性等生物学特性进行了观察和描述，为进一步深入研究光滑鳖甲的生物学特性和昆虫抗冻蛋白等相关研究提供理论依据．
- 候凤马纪刘禾培郭士杰刘小宁
- 关键词：光滑鳖甲人工饲养生物学特性
- 准噶尔小胸鳖甲抗冻蛋白MpAFP698在真核细胞中的表达与鉴定被引量：1
- 2011年
- 目的:构建真核表达质粒pEGFP-N1-mpafp698,转染人胚肾293T细胞,并表达准噶尔小胸鳖甲抗冻蛋白MpAFP698。方法:PCR扩增出mpafp698序列,将其克隆入本室保存的真核表达载体pEGFP-N1中,转染293T细胞;利用RT-PCR、流式细胞仪、免疫荧光、Western印迹检测蛋白表达。结果:构建了真核表达载体pEGFP-N1-mpafp698,在转染后24 h可检测到绿色荧光的表达,而对照组则没有检测到荧光蛋白;Western印迹结果显示表达蛋白的相对分子质量约37 000。结论:为准噶尔小胸鳖甲抗冻蛋白的细胞表达及功能研究奠定了基础。
- 姜敏于继云李晨晨马纪
- 关键词：准噶尔小胸鳖甲抗冻蛋白细胞表达
- 昆虫血淋巴的收集技术与方法被引量：13
- 2009年
- 血淋巴是昆虫生理生化研究的重要材料之一。文章分析归纳各类昆虫血淋巴的不同收集方法、收集前的昆虫准备以及收集后血淋巴的预处理,并结合该试验室研究阐述在收集昆虫血淋巴过程中的一些问题和经验,为能有效提取血淋巴提供一定的方法支持。
- 王岩马纪刘小宁
- 关键词：昆虫血淋巴
- 昆虫抗冻蛋白基因的克隆与表达研究进展被引量：3
- 2009年
- 产生抗冻蛋白(antifreeze protein,AFP)是许多昆虫抵御寒冷的一种重要机制。昆虫抗冻蛋白基因的克隆和表达是研究抗冻蛋白活性和功能的主要途径。文章归纳GenBank所登录的昆虫抗冻蛋白基因及其特点,总结昆虫抗冻蛋白基因的天然表达和基因工程表达方面尚未明确或需要克服的一些问题。目前在GenBank注册的昆虫抗冻蛋白基因约100个,集中于9种昆虫隶属鞘翅目3个科和鳞翅目1个科。昆虫抗冻蛋白基因具有多拷贝和多同种型(isoforms)的特点。昆虫抗冻蛋白的天然表达具有物种间和同种型间的多样性。基因工程表达昆虫抗冻蛋白需要克服表达量低活性不高的问题。对昆虫抗冻蛋白表达规律的研究有助于全面认识其功能。
- 邱立明马纪
- 关键词：昆虫抗冻蛋白基因克隆鳞翅目鞘翅目
- 荒漠昆虫光滑鳖甲的耐寒性季节变化及其生理机制被引量：22
- 2009年
- 光滑鳖甲Anatolica polita borealis生活于温差大的新疆荒漠环境,为探讨其耐寒性及耐寒机制,本研究测定了其3-9月份成虫在-10℃的耐寒性、过冷却点(SCP)、含水量、甘油含量和血淋巴热滞活性(thermal hysteresis activity,THA)以及冷驯化对增强光滑鳖甲成虫耐寒性的效果,还测定了光滑鳖甲不同发育阶段幼虫的SCP。结果表明:光滑鳖甲成虫的耐寒性和SCP具有明显的季节性变化,3月初SCP为-12.5℃,7月为-6℃,9月底为-13.6℃。4℃冷驯化能够提高光滑鳖甲成虫在-10℃的存活率,未驯化组在40min的存活率为50%,而驯化2h的为70%,驯化24h的为90%。虫体含水量在夏季有显著降低,3月、7月和9月结合水与自由水的比值分别为10.8∶1,2.6∶1和5.4∶1。成虫甘油含量与SCP的回归方程为y=-0.6204x-5.681,R2=0.7714。成虫血淋巴THA与过冷却点的回归方程为y=-5.26x-1.713,R2=0.9049。血淋巴THA比甘油浓度更能影响过冷却点降低的程度。随着幼虫的发育,其SCP逐渐降低。结果提示,光滑鳖甲通过提高结合水与自由水的比值、增加抗冻蛋白和甘油的含量使虫体保持较低的SCP,因而具有较高的耐寒性。
- 马延龙候凤马纪
- 关键词：光滑鳖甲耐寒性过冷却点热滞活性生理机制
- 抗冻蛋白应用前景及基因工程表达研究进展
- 2012年
- 抗冻蛋白(antifreeze protein,AFP)又称为热滞蛋白,是一类抑制冰晶生长的蛋白,它具有三个基本特征:热滞效应(thermal hysteresis activity,THA)、冰晶形态效应和重结晶抑制效应(frecrystallization inhibition,RI),抗冻蛋白是一类广泛存在于鱼类、植物、真菌、昆虫中的蛋白,不同生物的AFPs的化学结构、理化性质、空间构型各不相同,并且同类生物之间的AFPs同源性也不高,不存在相似性序列或结构模式,说明它们可能是在不同的有机体中独立进化而来,没有共同的演化规律。随着研究的深入,抗冻蛋白可广泛应用于医学农学食品工业等领域,起到冷冻保护剂,食品添加剂的作用,前人已经对抗冻蛋白的结构、生化性质和抗冻机制进行了阐述,研究主要对抗冻蛋白应用方面及基因工程的表达作了系统综述,为抗冻蛋白的深入研究奠定基础。
- 蔡文萍马纪
- 关键词：抗冻蛋白基因工程
- 利用烟草高效转化功能基因体系的建立被引量：6
- 2008年
- 对农杆菌介导的烟草遗传转化条件进行探索,以20mg/L的潮霉素作为转化苗的筛选压,稀释至OD600为0.2～0.3的农杆菌对外植体浸染15min,于添加300mg/L头孢霉素的生根培养基中诱导生根,可稳定获得较高的阳性转化率.经PCR和PCR-Southern检测,阳性转基因植株达84.8%以上.通过本研究建立了一种稳定高效的功能基因烟草遗传转化体系.
- 邱立明王艳王瑜代春英马纪
- 关键词：烟草农杆菌生根培养基
